菠菜中草酸的测定.doc

菠菜中草酸的提取及含量测定一 、实验目的 1. 学会沉淀法提取操作，进一步熟悉过滤，离心，提取等操作，掌握均匀沉淀法的原理。 2.学习文献资料的查询方法，学会制作实验方案，综合运用各种分析方法解决实际问题。 3.学习食品采样方法，综合分析菠菜中草酸的含量分布情况。二 、实验原理 草酸是一种二元羧酸，是植物体内普遍存在的一种组分，在菠菜、苋菜、生菜等许多蔬菜作物体内都有较高的含量。从环境毒理学和食品营养学角度看，草酸在蔬菜作物可食部位的大量累积会影响到人类的身体健康。 本实验采取灵敏度较高的比色法测菠菜中草酸含量。采用722型分光光度计测定，Fe在pH值1.82.5的KCL-HCL缓冲液中与磺基水杨酸（SSAL）和草酸均生成络合物，Fe3+和草酸的络合物能使与Fe3+磺基水杨酸的紫色络合物颜色变浅，测定Fe3+的磺基水杨酸络合物的吸光度，随着草酸量的增加而降低，据此可计出样品中草酸根的含量。 三、仪器和试剂 仪器部分：榨汁机，722型分光光度计，水浴锅，电子天平，台秤，100mL容量瓶3个，250mL容量瓶4个，200mL烧杯2个，500mL烧杯2个，离心机及离心管，长颈漏斗，铁架台，滤纸。 试剂部分：新鲜菠菜，磺基水杨酸（分析纯）（s），FeCL(s)，草酸钠（s），KCL（s），12mol/L浓盐酸，0.5mol/L稀盐酸，去离子水，pH试纸。四、实验步骤 1.铁标准液的制备（0.5mg/mL）：称取0.4gFeCl3于500mL烧杯中，加入250mL去离子水溶解。 2.磺基水杨酸（SSAL）的配制（0.5%）：称取0.5g磺基水杨酸（分析纯）于100mL容量瓶中，加水稀释至刻度。 3.草酸钠标准液的配制（2mg/mL）：称取0.2000g草酸钠于200mL烧杯中，加入去离子水，稍加热，使其溶解，移入100mL容量中，用去离子水定容。 4.缓冲液的配制（pH值2）：称取3.7g左右KCL于500mL烧杯中，加入去离子水少量，在水浴锅上微热溶解，加12mol/L浓盐酸用pH试纸使pH值为2，移入250mL容量瓶中，用去离子水稀释至刻度。 5.草酸的待测液制备：将菠菜在去离子水中洗涤2次，晾干。称取菠菜可食部位100g，加入100ml水，压榨23min，每2g匀浆折算为1g试样，称取1份匀浆50g，用100mL水洗入250mL容量瓶，加入0.5mL浓度为0.5mol/L的HCL溶液，澄清，置于7080度水浴上加热30min，其间摇动数次，取出冷却，加水至刻度，摇匀过滤，将滤液经10000r/min离心10min，得到的即是草酸待测液。 6.比色法测定菠菜中草酸含量的条件研究 该最大吸收波长即为测定时所要选择的最佳波长508nm。 标准曲线的制作 按照以上确定的条件，按下列顺序： 加液：2mLFe3+，20mL缓冲液，1.2mL磺基水杨酸，从容量瓶中依次取出已经配制的草酸钠溶液体积为：0、0.1、0.2、0.4、0.8mL，再用蒸馏水定容至100mL容量瓶中，显色30min后，以蒸馏水为参比液，在508nm波长处进行比色测定。根据测定结果，绘制草酸含量的标准曲线，通过计算机拟合，获得该标准曲线A关于x的方程。其中式中，x为显色体系的草酸的质量浓度（mg/mL），A为吸光度。 7.菠菜中的待测液中草酸含量的测定： 用菠菜待测液替代草酸根溶液，依次取0，0.2,0.4,0.6mL用蒸馏水定容至100mL容量瓶中。显色30min后，以蒸馏水为参比液，在510nm波长处进行比色测定，其余按照制作标准曲线同样的方法，进行显色反应，并测定其吸光度，填入表下中。根据标准曲线方程，计算待测液中草酸含量。波长（nm）508508508508菠菜待测液体积（mL）0.000.200.400.60吸光度五、注意事项：1比色实验的选择：在显色30min后进行比较合适。2在比色测定时，都是要以蒸馏水为参比溶液注意不能用1号溶液作为参比。3加液时要按顺序加入，分光光度计使用之前要预热。4用标准曲线法测草酸含量时注意草酸