（植物学专业论文）一品红组织培养与植株再生初步研究.pdf

硕士学位论文 、l st e r st h ! s is 摘要 本文以一品红( e u p h o r b i ap u i c h e r r i 册w i l l d ) 为材料，以幼嫩茎、叶 片为外植体。以m s 为基本培养基附加不同浓度和比例的细胞生长素、细胞分 裂素，进行了愈伤组织的诱导、芽的分化、根的分化、芽的增殖及芽苗生根及 以休眠芽为外植体快繁等的些基本规律进行了研究；初步探讨了固体培养条 件下不同光质、不同糖及浓度对愈伤组织的形成、芽分化的影响，以期为一 品红的快速繁殖提供一些基础资料，为我国优质一品红种苗的专业化生产提供 可能性。 、实验结果如下： 不同种类、不同浓度的激素及其组合对愈伤组织的诱导效果均不相同，愈 伤组织的质量及再分化的能力也有较大的差别：不同的外植体在相同的生长 素、相同浓度下，愈伤组织的诱导率、质量有明显差异。本文根据实验得出： 以幼嫩茎段作为外植体，诱导愈伤组织时，单因子以m s + n m 。l - i 组合因子 以m s + z t 。“+ n a k 。为培养基效果最好；m s + 6 一ba 】。+ n a a 。一 。：。1 次之。诱导愈伤组织以叶片为外植体单因子以m s + n 地。1 组 合因子以m s + 6 一b a 。，。1 + n 地。“效果最好。在附加有n a a 、2 ，4 - d 、 i a a 的培养基中，愈伤组织疏松、湿润、乳白色或白绿色、透明状或半透明状： 在附加有i b a 、k t 的培养基上，愈伤组织致密、干燥、白绿色、易褐化；在低 浓度( 小于1 0 m g l “) 的z t 培养基上愈伤组织疏松、湿润、乳白色、容易 分化：在高浓度( 大于等于1 0m g l 1 ) 的z t 培养基上，愈伤组织致密、绿 色、瘤状：在附加有6 一b a 的培养基上，最初切口处形成白色、致密、小晶体 状的愈伤组织，随后逐渐转变为致密、绿色、瘤状的愈伤组织。 芽分化最佳培养基配方为m s + z t ，。1 + n a k 。1 和m s + z t 。 _ 1 效果最好；m s + 6 一b a 。d - 2 。_ 1 + n a k ，ms 。, l - i 效果次之。并且在m s + z t 、 m s + z t + n 从的培养基中培养过程中容易形成胚性细胞团。开始时在愈伤组织表 面，长出许多淡黄色、小颗粒状构成的球形细胞团、质地较坚硬，很容易从原 愈伤组织上脱离下来，生长迅速，容易分化成苗。 不同糖类及糖浓度对一品红培养过程中愈伤组织的诱导率、愈伤组织的芽 分化率具有显著影响；相比较而言，蔗糖效果比葡萄糖好，蔗糖的最适浓度范 硕士学位论文 、f s t e rst h e s is 围为3 0 一4 0g l ，葡萄糖的最适范围为3 0 一5 0g l - l ：同时还可知，高 浓度的蔗糖对愈伤组织的芽分化有明显的抑制作用，高浓度的葡萄糖对愈伤组 织的芽分化的抑制作用不显著。 根分化最佳培养基配方为m s + i b w o 。l - j + n a k s 。1 和幅+ n “。 。- - l 效果最佳；m s + i 从。1 效果次之。在m s + i b a + n 从培养上，形成 根数量多、白色、粗壮、多根毛、生长迅速，能产生次级根，但容易再愈伤组 织化；在m s + i 从培养基上分化出的根，乳黄色、直而细、根毛少、不愈伤组 织化。 芽的增殖培养基的最佳配方为m s + z t t 。1+ n a k 一。t 1 和m s + z t m 。t “+ 6 一b a 土。1 + n 。“效果次之。从芽的增殖培养中发现z t 与6 一b a 组 合在一起时，对于愈伤组织的形成、芽的分化均没有显著的促进作用，这一点 与前人在仙客来、泡桐等组织培养中的应用结果不太一致。在拈+ z t m 一“+ n a & 。1 培养基上芽的增殖培养过程中，形成的芽粗壮、叶片生长正常。 试管苗生根培养基为m s + i a a 。，惦+ n 从。；。l - 1 效果最好，m s + i b & 。1 + n 地；。1 效果次之。 以日光为对照，在红、绿、蓝、黄四种不同光质条件下，愈伤组织的诱导 率均有所提高，红光下愈伤组织诱导率最高。各种光质对愈伤组织芽的分化均 没有显著的促进作用，相比较而言，绿光比较有利。- 关键词：一品红；愈伤组织；植株再生 i i 硕士学位论文 ” s t e r st | e sjs a b s t r a c t t i l i sp a p e rr e p o r t e dt h er e s e a r c ho f e u p h o r b i ap u l c h e r r i m aw i l l du s e dy o u n g s t e r n aa n dy o u n gl e a v e sa se x p l a n t s t h em sm e d i aw a st h eb a s i cm e d i a , g i v e n d i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o na n dr a t i oa u x i no r c y t o k i n i n s s t u d i e d c a l l u s i n d u c e ，e n d o s p e r md i f f e r e n t i a t i o na n dr e p r o d u c e ，r o o td i f f e r e n t i a t i o na n dy o u n gp l a n t r o o t a g e a i s os t u d i e dt h eb a s i cl a wo fr e p r o d u c t i o no fd o r m a n tb u d ：t h ee f r c c to f d i f f e r e n tl i g h tq u a l i t u ya n ds u c r o s ed i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n h o p et oo f f e rs o m et o 也ei n d u s t r i a l i z a t i o no f e u p h o r b i ap u l c h e r r i m aw d d i f f e r e n th o r m o n e d i f f c r e n tc o n c e n t r a t i o nc o u l di n d u c cd i f f e r e n tc a l l u s i f g i v e ns a m ef a c t o r s ，d i f f e r e n te x p l a n t sh a dd i f f e r e n tc a l l u sr a t i o i fy o u n ge n d o s p e r m w a su s e da se x p l a n t s ，t h em e d i am s + z t o 2 i 0 m gl q ( f o l l o wa si t ) + n a a 0 5 10w a s t h e b e s tm e d i a x h em e d i a m s + 6 - b a i o - 2 o + n a a o5 - 2 0s e c o n d e dt oi t i f y o u n gl e a v e sw a s u s e da se x p l a n t s ，t h em e d i a m s + 6 b a i 0 - 2o + n a 5 20w a st h eb e s tm e d i a 1 1 1 em e d i a m s + 6 一b a l0s e c o n d e dt oi t i ft h em e d i aw a sg i v e nn a a ，2 ，4 一d ，i a a ，c a l l u sw a s l o o s e ，m o i s t ，m i l kw h i t e o rw h i t e g r e e n ，t r a n s p a r e n to rs e m i - t r a n s p a r e n t i ft h em e d i a w a sg i v e ni b a ，k t , c a l l u sw a sd e n s i t y , d r y , w h i t e g r e e na n de a s yt ob r o w n c a l l u s c u l t u r e d i nl o w c o n c e n t r a t i o n ( 1 o m g l “1 t h em e d i am s + z t l 0 20 + n a i - 05w a st h eb e s tm e d i am e d i af o re n d o s p e r m d i f f e r e n t i a t i o n t h em e d i am s + 6 - b a t0 - 20 + n a a o1 - o5s e c o n d e dt oi t c a l l u sc u l t u r e d i nm e d i am s 十z t 村q aaw 觞e a s yt or e g e n e r a t ep a r t i c u l a t ee m b r y o n i cc a l l u s o nt h e s u f f i c eo f c a l l u s , t h e r ew a ss o m ec e l lg r o u p ，a n de a s yt or e g e n e r a t ep l a n t d i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o ns u g a rh a dd i f f e r e n te f r e c tt oc a l i n s t h ee f f e c to fm e d i a 诹t hs u c r o s ew a sb e t t e rt h a nt h a tw i t hg l u c a n t h ec o n c e n t r a t i o no fs u c r o s ef r o m 3 0 - 4 0 9 l - 1w a ss u i t a b l et oc a l l u s ，t h ec o n c e n t r a t i o no fg l u c a nf r o m 3 0 5 0 9 l 1 w a s a l s os u i t a b l et oc a l l u s a tt h es a m et i m e , h i g hc o n c e n t r a t i o ns u g a ri n h i b i t e dc a l l u s i n d u c t i o n , b u th i g h c o n c e n t r a t i o ng t u c a nd i dn o ti n h i b i t e dc a l l u si n d u c t i o n t h ee f f e c to fm e d i am s + i b a o 2 i o + 1 q a a 0 - 1 05 w a sb e s tt o r o o t d i f f e r e n t i a t i o n ，a n dm e d i am s + l a 2 - 0 5s e c o n d e dt o i t m e d i aw a sg n e n i b a , n a a , t h er o o tw a sw h i t e ，m o r es t r o n g e ra n dg r e wm o r eq n i c k l y , h a dm o r er o o t r i p b u t i tw 砌dc o m eo u tc a l l u s a g a i n i f m e d i aw a s g i v e nl a a , r o o t w a s y e l l o w , s l i m ，l e s sr o o tr i pa n d c o u l d n o tc o m et oc a l l u sa g a i n t h eo p t i m u mm e d i af o r a m p l i f i c a t i o nw 蠲m s + z t l o 斗n a a 0i 1 1 1 em e d i a j i i 一一 硕士学位论丈 m s t e rst h e s 【s m s + z t lo + 6 - b a 2 o + n a a o1 s e c o n d e d t o i t , b u t t h em e d i am s + 6 b ac o u l d n o t p r o m o t ec a l l u si n d u c eo rd i f f e r e n t i o n e n d o s p e r mc u l t u r e di nm e d i am s + z t low a s s t r o n ga n d i t sl e a v e sw e r en o r m a l 1 1 1 e o p t i m u mm e d i af o rr o o tr e g e n e r m i o nw a sm s + i a a i o a n dt h em e d i a m s + i b a o 2 + n a a 05s e c o n d e dt oi t c o n t r a s t e dt os u n l i g h i , c a l l u s r a t i oi n r e d ，b l u e ，g r e e n a n dw h i t e l i g h t w a s h i g h e r , c a l l u sr a t i oi nr e dl i g h tw a 3t h eh i g h e s t l i g h tq u a l i t yh a dn oo b v i o u se f f e c t t oe n d o s p e r m d i f f e r e n t i a t i o n , b u tg r e c i ll i g h th a dal i t t l ee f f e c t k e yw o r d ：e u p h o r b i a p u l c h e r r i m a w i l l d ；c a l l u s ；p l a n tr e g e n e r a t i o n i 硕士学位论文 、i s t e rst h e s is 第一章前言 1 一品红的分类地位及生活习性 一品红( e u p h o r b i a p u l c h e r r i m a w i l l d ) 为大戟科大戟属多年生灌木， 原产于墨西哥a z t e c s 地区。茎呈青绿色，光滑无毛，有分支，茎上部髓空， 革质草本，下部黄褐色，有皱纹，已木质化；上部枝叶，有乳白色的浆液；叶 单生，互生，卵圆形至披针形，叶脉明显，叶柄红紫色，叶全缘或浅波状，有 浅裂，下部的叶较阔大，上部叶较窄：苞叶初为绿色，后转红似花瓣，这些变 态叶，十分显眼，往往被误以为花0 1 。因其叶片鲜红之处，像猩红血滴，所以 也叫“猩猩术”，因其鲜红的叶片急尖似象牙，又叫“像牙红”，又因红色的时 间长久，故称日：“万年红”还因红色苞片里水平状，着色期长，我国爱好者 又取名“水萍相逢”1 ，一品红不但红得鲜明，红得象烈火，射出耀眼的红颜 色，而且它傲视在万花凋谢了的寒冬，显示着它那大无畏的精神，所以倍受青 睐。 一品红适于温暖，阳光充足和肥沃湿润的土壤中生活，不耐寒，在下霜之 前务必将花盆置于1 5 度以上温度的温室，否则叶片变黄，脱落：夏季忌强光 直射，不然叶片卷曲，发黄生长不良。在温度适合时，营养生长季节需要光强 为4 0 0 0 至6 0 0 0 l u x ，光度降低对一品红母株生长发育有极不良的影响，如叶片 较大，节间变长，其所繁殖的后代生育及开花都要受影响，会造成花朵发育不 整齐，延迟开花。光质对一品红开花和茎伸长也很重要；光周期决定植物是 维持营养状态还是进入生殖生长状态。一品红是典型的短日照植物，通常的自 然条件下日长1 2 小时2 0 分钟是临界点，日照长于该临界点，一品红就转入生 殖生长，开始花芽分化“3 。 2 一品红的栽培历史 一品红原产于墨西哥a z t e c s 地区，其花朵色泽鲜红，被当地印地安人视 为纯洁的象征。十七世纪，法国圣芳济教会的传教士首先应用一品红作为庆祝 圣徒诞生游行的装饰”1 ，而现在世界许多地区都把一品红当做圣诞节的应节 花卉，所以又名圣诞花、圣诞红。 一品红在我国的栽培具有悠久的历史，曾有许多文人墨客为她歌颂。清代， ：= 峨士哮i ? i 论文 、1 sre rsr he s is 梁启超在台湾竹枝词；吟“一品红”中这样写到郎行赠妾猩猩木，妾赠郎 行蝴蝶兰：猩红血泪有时尽，蝶翅低垂那得干。1 。现代作家袁鹰说：“远看它犹 如万绿丛中一点红”，“近看时，红朴朴的连成一片”，“使人感到分外新鲜、艳 丽。” 一品红在我国南北都有栽培。在我国南方暖地及云南、西双版纳、闽、广 地区，露地种植，地栽可达3 6 米，长得比屋檐还高，成为亭亭耸立的小乔 木。在长江两岸却长成一米左右的灌木，它的叶片在1 2 月上旬已开始转红。 北方不能在室外越冬。一品红它不仅在南方可以供花坛、庭园、路边、丛植、 带植，在其它地区也可作盆栽观赏，为冬季花卉缺少时的重要花卉。如以多数 盆花聚成花坛，则红云映日，霞光凌空，成为壮丽景色。 3 一品红的应用价值 鲜花文明社会进步与人民生活幸福、美好的象征。花卉业的兴起是我 国经济和社会发展的重要标志。现在我国无论南北，城镇花店的开设如雨后春 笋，人们探亲访友、看望病人，商店开张和有关重大活动，以及平时装点居室、 写字楼、大厅等，花束、花篮、盆花、盆景和盆栽观叶植物，己日益成为不可 缺少的种类。全球的花卉资源非常丰富，据不完全统计，全球植物约有3 5 万 4 0 万种例其中近t 6 具有观赏价值。在这千姿百态的花卉资源中，一品红 就是极具观赏价值的一枝名珠。 自从十七世纪，一品红被传教士第一次作为庚祝圣徒诞生游行时的装饰以 来，现在世界许多地区都把圣诞红当做圣诞节的应节花卉。在欧洲每年约有 8 0 0 0 万盆供应市场，美国每年约上市5 0 0 0 万盆，在日本每年也有5 0 0 万盆的 销售量”“。在我国，一品红销售季节可包括圣诞节、元旦、春节三大节日。在 广州、北京、上海等大城市越来越多的商家在圣诞前一个月甚至更早就开始用 一品红来装点宾馆、写字楼等公共场所。一品红可以从1 1 月开始一直销售到 翌年2 月份，销售季节长达两三个月，并且北方由于冬季缺花，加上一品红具 有摆放周期长，摆放面积大等特点，具有节日气氛的一品红就特别受到青睐， 以冠幅6 0 厘米的一品红和3 0 厘米冠幅的其他花相比，每平方米摆放两个月的 所需费用一览。 硕士学位论文 h s t e rst h e s is 一品红与其它花草的比较 一品红在日常生活中它红色的苞片也被当作红紫色的染剂，植体流出的乳 汁，还可做解热剂。“。 4 一品红的生产现状及市场分析 在2 0 世纪初已开始有商品化一品红的切花生产“，到6 0 年代初由于品种 改良开始成为规模化生产的盆花品种。因其花期长，苞片大，颜色鲜艳而深受 人们的喜爱，8 0 年代以后一直成为欧、美占市场份额最大的盆花品种，经久不 衰。 中国现代化的一品红生产则始于9 0 年代初，当时生产者开始引进新品种， 但由于栽培技术落后，产量一直不高。到了9 0 年代后期，台湾地区的一些 品红生产者来太陆设场生产，把一品红的栽培水平提高了一个档次，市场也随 之扩大，产量剧增。随后又有新的栽培者开始采用现代化的栽培技术，完全按 照国际的质量标准进行一品红生产，产品达到国际标准。虽然产量不大，但对 一品红的市场产生了一定的影响。2 0 0 0 年，世界上三大一品红生产公司已有两 家正式进入中国市场，并通过寻找代理或寻求以合资的方式在中国大陆生产优 质一品红“。他们的进入将对今后一品红的市场产生重大影响。生产技术的发 展将带来产量的急剧增加，19 9 8 年全国的生产总量约在5 0 万盆，较高品质的 一品红约占2 0 万盆。1 9 9 9 年的生产总量达到1 2 0 万盆，较高品质的约占3 5 万盆。一品红，自1 8 2 5 年传人美国，继而推广到欧洲，亚洲和非洲。其中美 国和德国对一品红的驯化和开发比较早，成立了以经营一品红为主的专业花卉 公司，锐意从事一品红的盆栽生意。先后选育了许多新品种。有单瓣的，又有 重瓣的。有以红色为主调，颜色鲜红的一品红，还有白色的“一品白”，宫粉 的“一品粉”，金黄的“一品黄”，紫色的“一品紫”，变色的“一品杂”，“双 色一品红”等。今年在以“名花汇羊城，经贸通五洲”为主题的广州花卉节蹙 花卉商品交易会。怡华园艺公司送展的一品红系列荣获金奖。花都区先锋园艺 3 硕士学注论丈 、l 、sr 卟! rhe s is 公司所报奖的单株盆栽一品红，被评为2 0 0 1 年广州迎春花卉的花王。这两项 突出的殊荣，使当今一代名花一品红的名声更加显赫，并在市场的营销中会更 加繁荣兴旺。 一品红在台湾地区8 0 年代初开始种植“，形成产业化生产则是在9 0 年代 初。当时，由于新品种，技术的引进大大提高了一品红的观赏性并延长了一品 红的摆放寿命使销售量迅速增加。到9 0 年代中期，从晟初的几万盆发展到 年产1 5 0 万盆左右的规模。依台湾地区发展速率推算大陆2 0 0 1 年的市场容 量至少可达3 0 0 万一3 5 0 万盆。中国有比其他任何国家大得多的市场，国际大 公司对中国的兴趣要大得多，因此在中国的一品红竞争将是国际水平的竞争， 最终将会导致中国大陆一品红的质量迅速提高。2 0 0 0 年以来，全球最大的几家 圣诞红种苗公司，如：美国保罗艾克( p a u l e c k er a n c h ) 等频频打出“多 种品系欢迎订购，助您打开成功之门! ”的广告，极力抢占中国一品红的发展 市场。 在中国，一品红销售季节可包括圣诞、元旦、春节三太节日。广州、上海、 北京等大城市越来越多的商家开始用一品红装点宾馆、写字楼等公共场所。一 品红可以从1 1 月开始一直销售到翌年2 月份，高品质的一品红已开始销售到 香港、澳门、日本等周边市场。目前，低品质一品红占有的市场份额很大，约 占2 3 左右，低品质一品红的市场价格这几年稳定在1 5 元左右，中等质量的 一品红在2 0 3 0 元左右，高品质的一品红售价在4 0 元以上。从目前的国内、 国际生产与销售的市场分析，一品红产业的发展空间及市场前景是非常广阔 的，尤其是高品质一品红供不应求。因此，可以肯定整个一品红产业的发展存 在着巨大的市场潜力。 近几年来，一品红增长势头迅猛，受到业内人士的关注，预计未来几年内 一品红的产量将连翻几番，在盆花市场的所占份额必将越来越大。而商品质的 产品是种植者生存、发展的基石，因为，一品红成品质量的好坏对其价格的影 响极大，而一品红种苗质量好坏直接影响成品质量。所以，业内对优质一品红 种苗的需求越来越大。以往种苗的生产主要采用扦插繁殖方法“”，在扦插过程 中如果基质、时间、温度掌握不当，常会导致烂根、成活率低，再者，目前大 多数中、高档一品红种植者都采用进口优质种苗，价格昂贵，插条的来源受到 限制，因此，高品质的一品红的发展受到限制。目前，在国内所见到的有关一 4 硕士学位论文 m a s t e r 。st h e s i s 品红的报导中，多是关于一品红栽培、管理、扦插、肥、水、光、温等生产管 理技术方面的研究，有关一品红组织培养方面的报导很少。本文作者，经过二 年多的努力，在一品红组织培养过程中不同光质、生长调节物质、不同培养基 等因子对愈伤组织的形成、器官分化等方面的作用进行了初探，以期在我国优 质一品红的专业化生产上为后人进一步研究积累些资料。 5 _ 一 硕士学位论文 、l s t e r st h e s is 第二章一品红愈伤组织的诱导 1 材料与方法 1 1 实验材料 供试材料为一品红( e u p h o r b i ap u c h e r r i m aw i l l d ) 的幼嫩茎及叶片 品种为彼得之星全球热销的圣诞红品种。材料购自美国保罗艾克( p a u l e c k e r a n c h ) 公司：中国总代理大汉园景公司，大益农资公司。栽培管 理状况良好，幼茎采用当年生的枝、叶片采用当年生枝条上从顶芽往下数第3 片叶“。材料取下当即处理。 1 2 培养基 采用m s 培养基，附加3 蔗糖及不同浓度的植物生长调节物质及其组合， p h 5 8 ，附加琼脂8 - i 0 9 6 ，高压灭菌1 2 0 ，1 5 分钟。 1 3 不同光源主要技术参数 1 4 实验方法 取一品红幼嫩茎和叶片，经表面消毒“”，把嫩茎切成3 5 帆左右小段： 叶片则主脉附近切取边长为3 5 眦的小方块，接种于附加有各种激素的惦培 养基上“，每日光照l 卜1 2 小时，光强为1 0 0 0 r u x 左右，温度为2 4 摄氏度左 右。2 0 天后，统计各培养基中愈伤组织的诱导率 愈伤组织的诱导率( ) = 愈 伤组织的块数接种外植体块数1 0 0 ，并观察愈伤组织的生长情况。 2 结果与讨论 2 1 植物生长调节物对一品红愈伤组织的诱导效应 2 1 1 单因子的诱导作用 6 硕士学位论文 m s t e r 。st h e s is 本实验选取了z t 、6 _ _ b “k t 、n a a 、i b a 、i a a 、2 4 一d 等七种生长调节 物质附加m s 培养基中，用幼嫩茎段和叶片作为外植体接种。观察不同植物生 长调节物质分别在不同浓度下对一品红愈伤组织的诱导效应，结果如下( 二周 后观察) ： z t 的效应 z t 的诱导效应见表1 从表1 可以看出，不同浓度的z t 对茎，对叶的愈伤组织及其生长的作用， 以0 5 m g 1 - 】最佳。茎段为外植体愈伤组织诱导率比叶片高，同时观察到在z t 浓度大于0 5 m g 1 。1 时培养基中的愈伤组织呈现绿色瘤状物，芽分化率较高； 小于0 5 m g 1 。1 愈伤组织呈现乳白色，疏松颗粒状，芽分化率低。 表1 ：z t 对愈伤组织诱导的效应( ) t a b l e l ：e f f e c to fz to nc a l l u si n d u c t i o n z t 浓度 0o 10 20 51 02 05 0 ( m g 1 。) 茎段诱导率 01 73 68 5 46 2 75 6 71 2 6 生长势 一+ + + + + + 叶片诱导率 o51 21 51 074 5 生长势 一+ 注：一无：+ 差；+ + 一般；+ + + 较好；+ + + + 旺盛( 本文中各表均同) 6 _ b a 的效应 6 一b a 对愈伤组织诱导的效应见表2 表26 - b a 对愈伤组织诱导频率c ) 及其生长势的影响 t a b l e 2 ：e f f e c to f6 一b ao nc a l l u si n d u c t i o i l 6 一b a浓度 00 10 20 51 02 05 0 ( m g 1 1 ) 茎段诱导率 01 06 7 26 9 16 8 45 1 31 6 1 生长势 一+ + + + + + + 叶片诱导率 01 54 7 86 6 56 8 65 4 2 0 5 生长势 一+ + + + + + 7 硕士学位论丈 m s 1 e rs1 h e s is 从表2 可知，不同浓度的6 一b a 对茎、叶愈伤组织及其生长的影响，以茎 为外植体时0 2 一1 o m g 1 。1 效果较好，以0 5 m g 1 1 效果最佳；以叶为外植体时 6 一b a 浓度在0 5 2 o m g 1 1 效果较好，尤以1 o m g 1 1 为最佳：在附加6 - b a 的 培养基上，愈伤组织呈瘤状绿色致密。 k t 的效应 k t 对愈伤组织的效应见表3 表3k t 对愈伤组织诱导率( ) 及生长势的影响 t a b l e 3 ：e f f e c to fk to nc a l l u si n d u c t i o n k t 浓度 ( m g 1 _ 1 ) 00 10 20 51 02 05 0 茎诱导率 ol1 54 04 03 22 0 叶诱导率 00 91 33 53 24 01 5 生长势 一+十 从表3 可见k t 各浓度对茎、叶愈伤组织的诱导率均不高，长势也较差 且易褐化，愈伤组织黄褐色，干燥。 n a a 的效应 n a a 对愈伤组织诱导率及其生长势的影响见表4 表4n a a 愈伤组织诱导率( ) 及生长势的影响 t a b l e 4 ：e f f e c to fn a ao nc a l l u si n d u c t i o n n a a 浓度 00 10 20 51 0 2 05 0 ( m g 1 1 ) 茎段诱导率 o3 5 47 5 39 6 47 8 16 5 35 0 生长势 叶片诱导率 o1 58 51 0 08 67 8 23 2 1 生长势 一+ + + + + + + + + + 从表4 可知，n a a 对茎、叶愈伤组织的诱导作用较好，尤以0 5 m g 1 1 效果 最佳，对叶片愈伤组织的诱导率达1 0 0 ，愈伤组织疏松、湿润、白色透明；同 时。在实验中观察到以叶片为外植体时在0 5 m g 1 1 浓度下，根的诱导率较高。 8 硕士学位论文 、f s t f r st h e s 【s 2 4 _ d 的效应 2 4 - d 对愈伤组织诱导的效应见表5 表52 4 一d 对愈伤组织诱导率( ) 及其生长势的影响 t a b l e 5 ：e f f e c to f2 4 - do nc a l l u si n d u c t i o n 2 4 - d 浓度 o0 10 20 51 o2 o6 0l o o ( m g 1 1 ) 茎段诱导率 0282 04 55 88 54 7 生长势 一+ + + + + + + + + 叶片诱导率 o223 61 0 24 56 59 5 生长势 一+ + + + + + + 从表5 可见，不同浓度的2 4 d 对茎、叶愈伤组织的形成及生长的作用 5 o m g 1 。对茎段，叶片效果较好，尤其对茎段愈伤组织诱导率较高，叶片在 i 0 o m g 1 。达到最高诱导率，低浓度下的愈伤组织黄绿色，易褐化，高浓度下 5 o m g i - 一1 0 o m g i 1 愈伤组织墨绿色、粘稠状、不褐化。 i b a 的效应 i b a 对愈伤组织诱导的效应见表6 表6i b e 对愈伤组织诱导率( ) 及其生长势的影响 t a b le 6 ：e f f e c to fi b ao nc a ll u si n d u c ti o n i b a 浓度 00 10 20 51 02 05 0 ( m g 1 1 ) 茎段诱导率 01 5 34 7 67 l6 3 15 41 0 1 生长势 一+ + + + + 叶片诱导率 05 32 84 52 57 34 5 生长势 一+ + + + + 佳，叶片与茎段相比较，i b a 对茎段愈伤组织的诱导频率较高。愈伤组织自绿 色，致密平滑，呈现晶体小颗粒状。愈伤组织生长到第4 周开始褐化、干燥死 亡。在此培养基上存活期，比附加有n a a 、2 4 - d 等生长调节物质的培养基上 存活期短。 9 硕士学位论文 l f s t e r st j ! s f s i a a 的效应 i a a 对愈伤组织诱导的效应见表7 表7i m t 对愈伤组织诱导率( ) 及生长势的影响 t a b l e 7 ：e f f e c to fi 从o nc a l l u si n d u c t i o n i 从浓度 ( m g 1 。) 00 10 20 5l _ o2 o5 0 茎段诱导率 04 0 55 0 65 8 76 0 35 6 63 0 6 叶片诱导率 03 8 64 9 15 7 65 9 55 4 52 8 4 生长势 一+ + + + + + + + 从表7 可知i a a 对愈伤组织的诱导作用以1 o m g 1 1 效果最佳，对茎段、 叶片的愈伤组织诱导作用较为一致，愈伤组织呈疏松、白绿色、透明状与n a a 诱导形的愈伤组织相似。对愈伤组织的诱导作用比i b a 效果好。 2 1 2 组合因子的诱导作用 z t 和n 从组合的效应 z t 和n a a 的组合对愈伤组织的诱导效应见表8 表8z t 和n a a 组合对愈伤组织的诱导率及生长势的影响 t a b l e 8 ：e f f e c to fz ta n dn 从o l qc a l l u si n d u c t i o n 从表8 可知，z t 与n a a 的各浓度的组合对愈伤组织的诱导作用显著增加。 当z t 固定时在n 从。，1 的范围内作用最明显，且随n a a 浓度的升高，诱导 率增加，在z t o 。- + n a a t - i 的组合中愈伤组织的诱导率达1 0 0 ；当n 从的 1 0 _ _ _ - - - - _ - 一 一 硕士学位论文 m s t e rs1 h e 5 i s 浓度固定时，在z t oz 。- 。“t 1 的效果显著。尤其在z t 。1 十n 地。“愈伤 组织的诱导率达1 0 0 。从实验中还观察到z t 与n a a 各浓度的组合中愈伤组织 的品质与单因子z t 或n a a 的作用有所差别，愈伤组织疏松，乳白色或乳黄色， 愈伤组织生长旺盛。 6 - b a 和n 从组合的效应 6 一b a 和n a a 组合对愈伤组织的诱导效应见表9 表96 - b a 和n a a 组合对愈伤组织诱导率的影响 t a b l e 9 ：e f f e c to f 6 - b aa n dn a ao nc a l l u sl n d u c t i o i l 从表9 可知卜b a 与n a a 各浓度的组合对愈伤组织的诱导作用，6 - b a 与 n a a 各浓度的组合对愈伤组织的诱导作用与单因子6 - b a 、n a a 单独作用没有太 明显的提高。n a a 对愈伤组织的诱导效应显著大于6 - b a 的诱导效应，n a a 在这 个组台中处于主导地位，但与6 一b a 的不同配合诱导效应差异也很大。当6 一b a 为0 时，n a a 的最适浓度为o 5m g 1 ，诱导率为9 6 4 ，n a a 。；。1 与6 一b a 各浓度的组合，愈伤组织的诱导率有所增加，但无显著变化。当n a a 的浓度偏 离最适浓度0 5m g 1 1 时，n a a 与6 - b a 各浓度的组合，愈伤组织的诱导率在 6 b k 。1 范围内随6 一b a 浓度的升高而增加，在6 - b a ，。1 + n 从。，1 效果 最好，诱导率达到1 0 0 ，比单因子6 一b a 。1 的作用有显著提高：从表中还可 知6 - b a 与n a a 的组合，使6 一b a 的最适浓度后移，对n a a 的最适浓度影响不大。 此时的愈伤组织初期白绿色，致密，呈小晶体颗粒状，生长到2 0 天左右，逐 渐变成绿色瘤状的愈伤组织。 1 i 一一一一 硕士学位论交 sr e rst h e s i s 6 一b a 和i b a 组合的效应 6 一b a 和i b a 组合对愈伤组织的诱导效应见表l o 表1 06 - b a 和i b a 的组合对愈伤组织诱导率的影响 t a b l e l 0 ：e f f e c to f6 - b aa n d1 8 ao nc a l l u si n d u c t i o n 从表1 0 可见6 一b a 和i b a 的组合对愈伤组织的诱导有促进作用。当6 一b a 固定时在工b 缸。范围内愈伤组织诱导率较高，并以i 脯* 。时为最佳浓 度，与单因子作用相比向低浓度推移。当i b a 浓度固定时，在6 一b 。- 1 的 范围内诱导效果较好，以6 - b a i 。“时为最佳浓度，与其单因子( 6 一b a ) 作用 相比最佳浓度向高浓度推移。愈伤组织在6 - b a 小于1 o m g 1 - 】的培养基上呈白 绿色、疏松，在6 - b a 大于1 o m g 、l “的培养基中愈伤组织呈绿色瘤状。 n 从和i b a 组台的效应 n a a 和i b a 组合对愈伤组织的诱导效应见表l i 见表i i n a a 和i b a 组合对愈伤组织诱导率的影响 t a b l el le f f e c to fn 从a n di b ao nc a l l u si n d u c t i o n 硕士学位论文 m s t e rst he s is 从表1 1 可知i b a 与n a a 的组合对愈伤组织的诱导作用比单因子i b a 显著 提高，同时与单因子n a a 作用相比，作用不明显。由此可知n a a 在该组合中起 主导作用。最适浓度范围在i b 凡。1 + n 诋。l - t 尤其在i b a 。i - i 这个浓 度下，愈伤组织诱导率很高，可达1 0 0 。愈伤组织的质量受i b a 与n a a 比率的 影响，当i b a 浓度小于5 0m g 1 _ i 时，愈伤组织无色或白色、疏松、湿润、易 分化。当t b a 浓度大于5 0m g 1 - 】时，愈伤组织墨绿色，湿润，不易分化。 3 2 不同碳源对愈伤组织的诱导作用 本实验以幼嫩茎段作为外植体，接种到附加6 一b 几。，1 + n 从。- 1 的m s 培 养基上，把m s 培养基中的碳源用不同浓度的蔗糖或葡萄糖来替代，以观察不 同糖及不同浓度的糖对愈伤组织的诱导效应。其结果见表1 2 。 表1 2 不同浓度的碳源对愈伤组织的诱导效应 t a b l e l 2 ：e f f e c to fs i i l r o s ea n d g l u c o s e o nc a l l u si n d u c t i o n 碳源浓度( g 1 - )愈伤组织诱导率生长势 颜色质量 oo i 07 5 + 黄绿色致密干燥 蔗 2 08 0 + + 黄绿色致密干燥 3 01 0 0 + + + 黄绿色疏松湿润 糖 4 09 0 + + + 十 黄绿色疏松湿润 5 07 5 + + 白绿致密干燥 o0 1 06 0 + 白绿致密湿润 葡 2 07 5 + 白绿致密湿润 萄 3 08 5 + + + 粉白疏松湿润 糖 4 08 0 + + + 粉白疏松湿润 5 08 0 + + + 粉白疏松湿润 从表1 2 可知不同的碳源物质对愈伤组织的诱导作用不同，蔗糖的效果比 葡萄糖好。葡萄糖的最适浓度是3 0 9 1 ，但愈伤组织诱导率仅为8 5 ：蔗糖的 最适浓度范围在3 0 一4 0g 1 ，在3 0 9 1 “时愈伤组织的诱导率最高可达1 0 0 ， 但是在4 0 9 1 _ l 的培养上愈伤组织生长旺盛。同时还可以看出，葡萄糖浓度在 2 0 _ _ 5 0g 1 1 的范围内，随浓度的升高，诱导率增高的幅度不大，这一点与蔗 1 3 一 _ l 一一 硕士学位论丈 、1 a s t e rst h e s is 糖不同。 2 3 不同光质对愈伤组织的影响 有关光质对组织培养中愈伤组织的形成及其分化的影响，众说纷纭，不同 的人以不同的材料进行试验，得出的结论差异较大”。我在一品红的组织 培养过程中试着做了些这方面的工作，以m s + 6 一b a ：。l _ 1 + n a a 。，。为培养基， 以茎为外植体和6 - b a 王。l - i + n a a 。，m 。l - i 形成的愈伤组织分别作为外植体。 结果见表1 3 。 表1 3 ：不同光质对愈伤组织的诱导效应 t a b l e l 3 ：e f f e c to f l i g h tq u a l i t y o i lc a l l u si