（植物学专业论文）槐角的研究及《中国药典》2005年版槐角含量测定项标准修订.pdf

摘要 槐角为豆科植物槐的干燥成熟果实，是我国重要的传统中药之一，始载于 神农本草经。列为上品。具有清热泻火，凉血止血的功效。 槐角中主要含有异黄酮类物质，如染料木素、染料木苷、芦丁、槐角苷、 槐属双苷等，虽然已有不少文献资料报道过染料木索、染料木苷、芦丁等的含量 测定，但是并不全面，对槐角的化学成分分析还是少之又少的。经本人试验，槐 角中槐角苷含量较高，并且药用价值极高。为了进一步对槐角的质量进行控制及 临床用药和新药开发奠定物质基础，本试验对槐角苷进行了含量测定研究。中国 药典目前并没有槐角的含量测定项，为了更好的控制其质量，2 0 0 5 版中国药 典会议将此任务交给我们来完成。我们首先对槐角苷的提取方法进行了研究， 其次对其含量测定方法进行了系统的方法学研究，并对槐角苷的化学结构进行了 初步研究，同时对1 3 个不同产地的槐角进行了含量测定，顺利完成了我们所承 担的中华人民共和国药典( 2 0 0 5 版) 的任务。 关键词：槐角槐角苷染料木素染料木苷芦丁 化学成分含量测定中国药典 西北大学硕士学位论文 a b s t r a c t s o p h o r af r u i t i s d r ym a t u r ef r u i to fs o p h o r aj a p o n i c a ll ， i ti so n eo f c h i n e s et r a d i t i o n a lm e d i c i n ea n dh a ss a l t l ee f f i c a c ya se l i m i n a t i n gh e a ta n df i r e ， c l e a r i n g h e a tf r o mb l o o dt os t o pb l e e d i n g t h em a i n c o m p o n e n t i ns o p h o r af r u i ti si s o f l a v o n e s ，t h es a m ea sg e n i s t e i n 、 g e n i s t i n 、r u t i na n ds o p h o r i c o s i d e ，t h ec o n t e n t so f g e n i s t e i n 、g e n i s t i n a n d r u t i n h a v er e p o r t e db yl o t so fd o c u m e n t sa n dd a t u mb u tt h e ya r en o to v e r a l l ，t h e a n a l y s i s o fc h e m i s t r yc o m p o n e n t sa b o u ts o p h o r af r u i tw a ss t i l ll i t t l e s o p h o r a f r u i th a sh i g hq u a n t i t yo fs o p h o r i c o s i d et h r o u g hm y l a b o r a t o r yt e s ta n dh a sh i 曲 v a l u ef o rm e d i c i n ep u r p o s e s t u d i e dt h ec o n t e n t s ，s o p h o r i c o s i d e o fs o p h o r a f r u i t ，i no r d e rt oc o n t r o lq u a l i t yo fs o p h o r af r u i ta n dd e v e l o p m e n to fn e w m e d i c i n ea n dc l i n i c a lp u r p o s e i th a sn oc o n t e n t st e s t i n gi t e mo fs o p h o r af r u i ti n p h a r m a c o p o e i a o f p e o p l e sr e p u b l i c o f c h i n a ( 2 0 0 0 ) t h em e e t i n g o f p h a r m a c o p o e i ao fp e o p l e sr e p u b l i co fc h i n a ( 2 0 0 5 ) g r a n t e dt h et a s k t ou si n o r d e rf u r t h e rb e r e rt oc o n t r o lt h eq u a n t i t yo fs o p h o r af r u i t f i r s t l y , w es t u d i e d t h e e x t r a c t i v em e a n so f s o p h o r i c o s i d e ，t h e nw e s t u d i e dc o n t e n t st e s to f s o p h o r i c o s i d e o nm a n yo c c a s i o n sb yt h e o r yo fm e t h o d o l o g ya l s ow eh a dp r e l i m i n a r ys t u d yo f c h e m i s t r yc o m p o n e n t a b o u ts o p h o r i c o s i d e ，w et e s t e dc o n t e n t so fs o p h o r af r u i t p r o d u c e di n1 3a r e a s a tt h es a m et i m e ，w e c o m p l e t e d t h et a s ko f p h a r m a c o p o e i a o f p e o p l e sr e p u b l i c o f c h i n a ( 2 0 0 5 ) s u c c e s s f u l l y i nt h ee n d k e y w o r d s ： f r u c t u s s o p h o r a e s o p h o r i c o s i d e g e n i s t e i ng e n i s t i n r u t i n c o m p o n e n t c h e m i s t r yc o m p o n e n t c o n t e n t st e s t p h a r m a c o p o e i ao f p e o p l e sr e p u b l i c o f c h i n a 亘j ! 奎兰堡圭堂垡望兰里昼2 墨殳皇2 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的 研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以 标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写 过的研究成果，也不包含为获得西北大学或其他教育机构的 学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究 所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：签名日期：年月日 一文献综述 槐角为槐的干燥成熟果实，其药用历史悠久，是一种常用中药，据本草纲 目记载，槐角有“久服明目益气，头不白，延年，治五痔疮瘘”【1 。槐角在神 农本草经中被列为上品。槐角在祖国医学中被应用于清热，润肝，凉血，止血。 治肠风泻血，痔血，崩漏，血淋，血痢，心胸烦闷，风眩欲倒，阴疮湿瘁等症 2 】。 国内外学者对它的本草考证、原植物、生药学、化学成分、药理作用、临床应用 等方面作了一定的工作。 1 1 槐角( f r u c t u ss o p h o r a e ) 的植物学研究 1 1 1 原植物 槐( 尔雅) s o p h o r a j a p o n i c a l ，又名：豆槐、白槐、细叶槐、金药树、护 房树【3 o 落叶乔木，高达2 5 米。树皮灰色或深灰色，粗糙纵裂，内皮鲜黄色，有臭 味；枝棕色，幼时绿色，具毛，皮孔明显。单数羽状复叶互生，长达2 5 c m ，叶 柄基部膨大；小叶7 1 5 枚，卵状长圆形或卵状披针形，长2 5 5 c m ，宽1 5 2 6 c m ，先端尖，基部圆形，全缘，上面绿色，微亮，下面伏生白色短毛；小叶 柄长2 5 n m a ；托叶镰刀状，早落。圆锥花序顶生；花乳白色，长1 5 c m ；花萼钟 形，5 浅裂：花冠蝶形，旗瓣阔心形，有短爪，雄蕊1 0 ，分离不等长；子房筒状， 有细长毛，花柱弯曲。果实为荚果，果期l o 1 1 月 们。 1 1 2 异名 槐实( 本经) ，槐子( 陶弘景) ，槐豆( 本草原始) ，槐连灯、九连灯、 天豆( 河南中药手册) ，槐连豆( 中药材手册) 【5 1 。 1 1 3 采集 冬至后，果实成熟时采摘，除去梗、果柄等杂质，晒干。 1 1 4 药材性状 干燥荚果呈圆柱形，有时弯曲，种子间缢缩成连珠状，长1 6 c m ，直径o 6 l c m 。表面黄绿色、棕色至棕黑色，一侧边缘背缝线黄色。顶端有凸起的残留柱 西北大学硕士学位论文 基；基部常有果柄。果肉肉质柔软而粘，干后皱缩。气微弱，焦糖样；味微苦。 内有种子1 6 枚。种子肾形，长8 1 0 m m ，宽5 8 m m ，厚约5 m m 。表面光滑， 棕色至棕黑色，- - n 有椭圆形的种脐，旁有圆形的珠孔，另一旁又略凸起的种脊。 种皮革质，子叶2 片，黄绿色，嚼之有豆腥昧。以肥大、角长、黄绿色、充实饱 满者为佳【6 1 。 1 2 槐角的本草研究 槐树入药在神农本草经中列为上品，其树高可达2 5 米，初夏时节枝头 花盛开，成顶生圆锥花序，蝶形花冠，乳白色花朵，秋末结出长荚果，外皮肉质， 作联球状，叫做槐角，荚内有深棕色种子，名为槐实。归肝、大场经，清热泻火、 凉血止血。中医临床所用的槐花又分为两种，花开放时采收的叫槐花，未开放时 采收的花蕾叫槐米。均为清热、凉血、止血之佳品。味苦，性凉，入肝、大肠经。 常用来治疗肠风便血，痔血、尿血、血淋、崩漏、赤白痢下、风热目赤等，并可 预防中风，现代研究证明，槐花中主要含有芸香苷，而花蕾中的含量远较开花后 为多。芸香苷具有扩张毛细血管、抗炎、解痉、抗溃疡、扩张冠状血管改善心肌 循环、降血脂等多种药理作用【1 ”。 本草经疏中记载：“槐实，其主五内邪气热者，乃热邪实也；伤绝之病， 其血必热；五痔由于大肠火热，火疮，乃血为火伤；妇人乳瑕，肝家气结血热所 成：子藏急痛，由于血热燥火。槐为苦寒纯阴之药，为凉血药品，故能除一切热， 散一切结，清一切火，如上诸病，莫不由斯三者而成，故悉主之。”【8 】 本经逢原中记载：“槐者，益肾清火，与黄柏同类异治。盖黄柏专滋肾 经血燥，| t - t n 专滋肾家津枯。观本经主治，皆脾胃有热，阴津不足之病。止 涎唾，肾司闭藏之职也。下焦痔瘘肠风，风热便血，年久不止者，用此一味熬膏， 炼蜜收服。妇人乳瑕，子藏急痛，皆肝家血热之患，用以清热滋燥，诸证自安。 上皆指槐角而言，其角中核子，专治明目。久服须发不白，益肾之功可知。” 本草求真中记载：“槐角，书所云能疏肝经风热者，非是具有表性，得 此则疏，实因热除而风自息之意。凡书所著治功，多有如此例说，不可不细体会 而详究耳。” 2 西北大学硕士学位论文 1 3 槐角的化学成分研究现状 关于槐角的化学研究早有报道，前人已经从槐角中分离得到数种黄酮类、生 物碱类、三萜类、氨基酸和糖类等成分，其中异黄酮和黄酮醇及其苷类成分含量 较高。主要有槐角苷( s o p h o r i c o s i d e ) 、槐属双苷( p s o p h o r a b i o s i d e ) 、染料木苷 ( g e n i s t i n ) 、染料木素( g e n i s t e i n ) 、芦丁( r u t i n ) 等，其中的槐角苷属于异黄酮类 化合物，是槐角的主要活性成分之一，。槐角苷又称槐苷、槐黄苷、染料木素一4 一葡萄糖苷( g e n i s t e i n - - 4 - - g l u c o s i d e ) ，是染料木苷( 染料木素7 一o 一葡萄 糖苷) 的同分异构体嘲。 ( 1 ) 槐角苷s o p h o r i c o s i d e 异名 槐黄苷，槐苷，染料木素- 4 - 葡萄糖苷，g e n i s t e i n 一1 3 - g l u c o s i d e 化学名 4 h - 1 b e n z o p y r a n - 4 - o n e ，3 - 4 一( b d g l u c o p y r a n o s y l o x y ) p h e n y l 一5 , 7 一d i h y d r o x y 一 结构式 s o p h o r i c o s d i e 【分子式及分子量 c 2 1 h 2 0 0 1 0 ；4 3 2 3 7 物理性状 类白色针状结晶( 二甲基甲酰胺) ，熔点2 9 7 * c ( 2 9 8 * c ) ； n d 3 2 1 9 6 。( c = 2 5 ，吡 啶；1 7 1 。( c = o 6 ，吡啶) ；难溶于水、乙醇、乙酸、稍溶于热乙醇、热乙酸，溶 西北大学硕士学位论文 于吡啶、稀碱，不溶于乙酸乙酯和丙酮。u v m a x ( c h 3 0 田n m ( 1 0 98 ) ：2 6 0 ( 4 5 6 ) ， 3 2 6 ( 肩，3 6 4 ) 。i r u m a x ( k b r ) c m 一1 ：3 3 0 0 ( o h ) ，1 6 5 0 ，1 6 1 0 ，1 5 7 0 ( 共轭= c o ) 。n m r ( d m s o d 。) ：1 2 9 6 ( 1 h ，单峰，c 一5 0 h ) ，1 0 8 0 ( 1 h ，宽峰，c 7 0 h ) ，8 4 0 ( 1 h ，单峰，h 一2 ) ，7 5 6 ，7 1 6 ( 各2 h ，a 2 8 2 型，j = 9 ，分别为h 2 ，h 一6 和 h 3 ，h 5 ) ，6 4 1 ，6 2 6 ( 各1 h ，单峰，h 一8 ，h 一6 ) ，5 3 6 ( 1 h ，多峰，j = 8 ，糖 的h 1 ) ，5 0 0 ，4 6 0 ( 各3 h ，1 h ，宽峰，糖的o h ( 4 ) ，3 3 0 3 7 0 ( 6 h ，多 峰，葡萄糖基质子) 。 ( 2 ) 染料木苷g e n i s t i n 异名 金雀异黄苷，染料木素7 0 葡萄糖苷，g e n i s t e i n - 7 0 一g l u c o s i d e 化学名 4 h 1 b e n z o p y r a n 一4 o n e ，7 一( b d g l u c o p y r a n o s y l o x y ) 一5 h y d r o x y 。3 。( 4 - h y d r o x y p h e n y l ) 结构式 h 0 h 0 0 q h0 h 4 0 h 西北大学硕士学位论文 分子式及分子量 c 2 1 h 2 0 0 1 0 ；4 3 2 3 7 物理性质 苍黄色片状结晶( 8 0 乙醇) ，熔点2 5 6 。c 。( c = o 6 ，0 0 2 m o l l 氢氧化钠) ； o 2 6 d - 2 1 4 。( 吡啶) 。实际不溶于冷水，略微溶于热水、热乙醇及热甲醇，溶 于热8 0 甲醇、热8 0 l 醇、热丙酮及吡啶。u v m a x ( m e o h ) n m ：2 6 0 ，3 3 0 ( i ) ： u v 九m a x m a o a c ) n m ：2 6 0 ，3 3 0 ( i ) 。 ( 3 ) 芦丁r u t i n 异名 芸香甙，维生素p ，紫槲皮甙，r u t o s i d e ，v i o l a q u e r e i t r i n 化学名 h 一1 - b e n z o p y r a n - 4 - o n e ，3 一 ( 6 0 - ( 6 - d e o x y - a - l m a n n o p y r a n o s y l ) - 1 3 - 1 ) 一g l u c o p y r a n o s y 1 ) o x y 一2 一( 3 ，4 一d i h y d r o x y p h e n y l ) 一5 , 7 一d i h y d r o x y 【结构式 分子式及分子量】 c 2 7 h 3 0 0 1 6 ；6 1 0 5 1 o h0 两北大学硕士学位论文 物理性质】 浅黄色针状结晶( 水) ，熔点1 7 6 8 。c u ， a 2 3 d + 1 3 8 2 。c ( 乙醇) ， c t 2 0 d 一3 9 4 3 ( 吡啶) 。l g 溶于7 m l 甲醇、8 0 0 0 m l 水、2 0 0 m l 沸水。u v a c h 3 0 h m a x n m ：2 5 8 3 6 1 。i r v k b r m a x c m 1 ：3 4 0 0 ( o h ) ，1 6 7 0 ( c = o ) ，1 6 2 0 、1 5 2 0 、 1 4 7 0 ( c 6 h 5 一) 1 。 1 4 槐角及其化学成分的药理作用 1 4 1 槐角粗制剂的药理作用 1 升血糖作用 家兔注射槐角浸膏后1 小时血糖升高，同时出现尿糖，但此反应仅为一时 性，注射后1 日即恢复。 2 降压作用 静脉注射槐角提取液o 1 0 7 9 k g 可使麻醉家兔血压下降，降压作用随剂量 递增而增强，持续时间也随之延长。 3 ，抗菌作用及降谷丙转氨酶作用、抗生育作用和抗肿瘤作用 槐角含有杀菌物质，能对抗葡萄球菌及大肠杆菌。 近年来，槐角在药理研究和l 临床应用方面，均发现有明显的降低谷丙转 氨酶作用、抗生育作用和抗肿瘤作用1 1 】。 1 4 2 槐角苷的药理作用 槐角苷属于异黄酮类，异黄酮是一类具有很强生理活性的天然产物，包括抗 氧化、抗溶血、抗菌、防癌、和防心血管病等，特别因其在分子结构上与a 一雌 二醇( e s t r a d i 0 1 ) 有类似的基团间距离长短而成为一类植物雌激素成分u 。其 中以染料木素( g e n i s t e i n ) 和大豆黄素( d a i d z e i n ) 及由他们为苷元所成的苷如槐 苷( s o p h o r i c o s i d e ) 、染料木苷( g e n i s t i n ) 、大豆黄苷( d a i d z i n ) 等最为常见。在自然 界主要存在于豆科( l e g u m i n o s e a ) 染料木属( c e n i s t al ) 、槐属( s o p h o ml ) 、大豆 属( g l y c i n el ) 、羽扇豆属( l u p i n u sl ) 等植物中【l 3 1 。这些苷在植物中往往与其苷元 6 西北大学硕士学位论文 或由它所衍生成的不同苷共存，例如在槐角中就存在苷元染料木素及由它所衍生 成的不同苷如槐苷和染料木苷等。 已知槐苷对慢性肝炎病人的降谷丙转氨酶效果良好“”。近年的报道表明槐苷 能同时抑制由巴豆油诱导的耳水肿和角叉菜胶引起的爪水肿。此外，曾报道槐苷 的动物试验具有抗生物活性。最近报道在槐苷的类似物( 如染料木素、染料木苷 等) 中，槐苷作为i l 5 抑制剂显示了最高的抑制活性，在1 2 5 u m 时达8 9 ，其 i c 5 0 为1 5 u m 1 5 1 。槐苷的多种药理活性引人注目，特别是雌激素样作用，对于 当前用于预防老年妇女的骨质疏松，具有极好的应用前景和开发前途。 1 4 3 槐角苷的苷元染料木素的药理作用研究 槐角苷在人体小肠内被肠道内的糖苷酶水解，以其苷元染料木素形式被人体 吸收，关于染料木素的药理作用研究如下。 1 、染料木素的主要药效学试验结论：染料木素可抑制去势模型大鼠的体 重增加，增加维甲酸模型大鼠的体重，并明显增加维甲酸大鼠的左股骨重量、左 胫骨重量( p 0 0 5 或p o 叭) 。模型大鼠的血清c a 、p 、m g 、c t 水平明显降 低，b g p 、a l p 水平升高，与正常对照组有显著差异( p o 0 5 或p 0 0 1 ) ；4 5 m g k g 、 9 m g k g 染料木素治疗后，上述各指标均显著改善，与模型组比较相差显著 f p 0 0 5 或p 0 0 1 ) 。4 5 m g k g 、9 m g k g 染料木素可显著改善模型大鼠股骨最 大载荷、最大桡度、弹性载荷、弹性桡度；其作用明显优于骨疏康( 阳性对照药) 。 4 5 m g k g 、9 m g l ( g 染料木素可明显增强模型大鼠的股骨、胫骨和腰椎l 2 - 4 的 骨密度( p o 0 5 或p 0 0 1 ) 。4 5 m g k g 、9 m g k g 染料木素可明显升高维甲酸和 去势模型大鼠血清中微量元素含量( p 0 0 5 或p o 0 1 ) 。4 5 m g k g 、9 m g k g 染 料木素可明显增加模型大鼠的骨小梁面积百分比( b v t v ) 、骨小梁厚度 ( t b t h ) 和骨小梁数目( t b n ) ，降低骨小梁间隔( t o s p ) 。1 3 m g k g 、2 6 m g k g 染 料木素具有显著抗炎和镇痛作用( p 0 0 5 或p 0 0 1 ) 。对小鼠单核巨噬系统有 明显抑制作用( p 2 4 9 k g ，该剂量是临床成人用药剂量的2 1 8 1 8 倍 2 4 9 k g x l 0 0 0 m g + 1 1 m g k g ( 平均7 6 m g + 7 0 k g 体重) 的成人拟用剂量【l ”。 4 、染料木素大鼠长期毒性实验结论：8 0 、1 6 0 和3 2 0 m g k g ( 相当于临床成 人日用剂量7 、1 4 6 、2 9 1 倍) 染料木素连续灌胃给药6 个月，对动物的心、肝、 脾、肺、肾、肾上腺、胸腺、甲状腺、睾丸、附睾、前列腺、子宫、卵巢、胃、 十二指肠、回肠、结肠、胰腺、膀胱、淋巴结、脑、脊髓、胸骨( 骨和骨髓) 、 股骨、腰( 胸) 椎骨、视神经及垂体等脏器，经病理组织学检查，未见由药物所 致的病理性改变【l 。 5 、染料木素b e a g l e 犬长期毒性试验结论：试验结果表明，b e a g l e 犬连续口 服6 m g k g ，2 5 0 m g k g ，5 0 0 m g k g ( 相当于临床成人拟用剂量的6 、2 2 7 、4 5 5 倍) 染料木素3 6 周，对b e a g l e 犬的生长、发育、饮食、精神状态、 大小便无明显 影响。对消化道、血液常规指标及肝、肾功能无明显毒性。对心、肝、脾、肺、 肾等主要脏器无损害【2 。 6 、染料木素致突变试验结论：染料木素诱发鼠伤寒沙门氏菌t a 9 7 、t a 9 8 、 t a l 0 0 、t a l 0 2 的回变菌落数均未超过自发回变菌落数的2 倍。根据中药新药 研究指南结果评定标准，受检样品染料术素的鼠伤寒沙门氏菌回复突变试 验结果为阴性。染料木素小鼠骨髓微核试验，试验溶剂对照雌、雄性小鼠的微核 率分别为5 o o 、3 o ；阳性对照雌、雄性小鼠的微核率分别为6 5 8 0 、6 4 8 o ， 符合试验方法的要求。受检样品染料木素各剂量组的微核率与溶剂对照组进 行统计学处理，未见有显著性差异口”。根据中药新药研究指南结果评定标准， 受检样品染料木素的小鼠骨髓微核试验结果为阴性。 7 、染料木素致畸变试验结论：染料木素小鼠睾丸精原细胞染色体畸变试验， 本试验溶剂对照和阳性对照组的染色体畸变率分别为1 o 和2 8 ，两组的染色 体畸变率用x 2 检验进行统计学处理，有显著性差异( p 0 0 5 ) ，符合试验方法的 西北人学硕士学位论文 要求。受检样品各剂量组的染色体畸变率为0 8 1 2 ，与溶剂对照组的染色 体畸变率用x 2 检验进行统计学处理，均未见有显著性差异【2 2 1 。根据中药新药 研究指南结果评定标准判定，受检样品染料木素的小鼠睾丸精原细胞染色体畸 变试验结果为阴性。 8 、染料木素生殖毒理试验结论：染料木素的一般生殖毒性试验，雌、雄性 大鼠试验组给予受检样品染料木素剂量分别为：1 6 、1 6 0 、4 8 0 m g k g b w ；溶剂对 照给予o 5 m l k g b w 蒸馏水。雄性大鼠连续给药6 0 天后与给药1 4 天的雌性大鼠 合笼，雄性大鼠给药至交配结束，雌性大鼠给药至妊娠第1 7 天。各组孕鼠1 2 于妊娠第1 4 天剖检，另1 2 孕鼠使其自然分娩哺乳；仔鼠于第2 8 、3 5 天分别处 死1 2 剖检，观察有无畸形。试验结果表明：受检样品染料木素4 8 0 m g k g b w 剂 量引起亲代雄性大鼠精子活动度下降，但未发现睾丸病变，也未影响雄鼠生殖能 力；同时使雌鼠妊娠期体重增长明显低于其他组，但未影响胚胎形成、仔鼠的生 长发育。16 0 m g k g b w 剂量对亲代和仔代未引起明显的异常。因此，根据本试验 结果认为受检样品染料木素对大鼠不具有一般生殖毒性【2 ”。 9 、染料木素药代动力学结论：大鼠灌胃( i g ) 给予6 2 5 、1 2 5 和5 0m g k g 的 染料木素( 分别为成人推荐用量的2 5 、5 、2 0 倍) ，发现染料木素i g 后能迅速 吸收入血，血浆药物浓度时间血线呈明显的双峰，说明该药在大鼠体内存在肝 肠循环。药时数据经药代动力学软件分析，体内过程符合一室模型，平均消除 t l 2k e 为7 6 3 4 h ，5 0m g k g 呈现异常动力学过程。与大鼠尾静脉注射9 m g k g 染 料木素的a u c 相比，该药胶囊剂i g 给药的绝对生物利用度为6 6 2 8 ( 0 一t ) 5 6 5 0 ( 0 - - c o ) 】。大鼠i g 给予1 2 5m g k g 染料木素，测定不同时间原型药物 的组织分布，发现除胃肠组织外，其他组织在给药后8 0 m i n 药物分布达最高，其 中以肝脏、肾、子宫和卵巢组织分布较多，以后随时间延长而逐渐降低，在同一 时间以胃肠组织药物含量最高。染料木素吸收入血后，迅速与葡萄糖醛酸结合， 大鼠i g 给予9 m g k g 染料木素，部分药物以原型及葡萄糖醛酸结合型经尿及粪便 排出体外。2 4 h 内药物经尿的排谢率为9 6 3 ( 原型及葡萄糖醛酸结合型药物) ， 经粪便的排谢率为2 0 0 6 ( 原型及葡萄糖醛酸结合型药物) 1 2 4 j 。 1 0 染料木素为骨质疏松症的治疗带来机遇：染料木素是一种异黄酮，是 具有弱雌激素样作用同时又非雌激素类化合物，故称之为植物雌激素。至今，国 9 西北大学硕士学位论文 内外植物雌激素的研究还主要集中在动物试验和初步临床试验( 意大利、比利时、 匈牙利、韩国和日本已采用异丙氧黄酮治疗绝经后骨质疏松) 阶段。第四军医大 学药物研究所在查阅大量文献资料的基础上，经历多年的科学研究，其试验结果 证实染料木素可使大鼠骨密度增加，胫骨等骨长度增长，使骨细胞形成超过消溶， 进而防止骨质流失等药理作用。其试验结果与国外人体试验的初步结果完全一 致，提示染料木素可增加骨密度。这些结果有力的说明染料木素极有可能开发成 为治疗骨质疏松症的有效药物【2 5 1 。 1 4 4 芦丁的药理作用 1 、对毛细血管的影响【2 6 芦丁及其苷元槲皮素能保持毛细血管正常的抵抗力，减少血管通透性，可使 因脆性增加而出血的毛细血管恢复正常的弹性。槲皮素可增强豚鼠，大鼠皮肤毛 细血管的抵抗力，降低血管通透性，其对毛细血管稳定性的作用较芦丁强1 3 。 2 、抗炎作用【2 7 芦丁及槲皮素对大白鼠因组胺、蛋清、甲醛、多乙烯吡洛酮引起的足浮肿， 以及透明质酸酶引起的足踩部浮肿有抑制作用。芦丁能显著抑制大鼠创伤性浮 肿，并能阻止结膜炎、耳廓炎、肺水肿的发展，对兔由于芥子油引起的结膜水肿， 仅有轻微的抑制作用，如将芦丁溶于丙二醇中，预防炎症的效果更好。 1 4 5 已有剂型的药理及临床研究结果 1 槐角颗粒冲剂 主要由槐角、何首乌等药材组成，临床用于高血脂症，疗效较好。该冲 剂具有滋肝补肾、清热润肠之功。河南中医学院石建辉等人对其进行了药理 学研究28 1 ，其研究结论为：槐角颗粒冲剂对高脂膳食大鼠血清胆固醇及甘油 三酯水平有显著降低作用，对高密度脂蛋白有显著升高作用，对低密度脂蛋 白有降低趋势，对正常大鼠血清胆固醇小剂量组有显著降低作用，但对血清 甘油三酯和低密度脂蛋白仅有降低趋势，对血清高密度脂蛋白有升高趋势， 已有报道何首乌对大鼠及鹌鹑均有较强的降低血脂作用，槐角也有祛脂作 用，槐角颗粒冲剂的降脂作用是所含药物作用的综合体现。 1 0 西北大学硕士学位论文 2 槐角蜜膏 槐角蜜膏由槐角、白蜜组成。济宁城区中医院王庆华应用该药治疗痔 疮，治疗9 6 例，痊愈6 8 例，好转2 8 例，有效率高达1 0 0 。【2 9 3 复方槐角口服液 经现代药理学研究证实，该复方对由二甲苯诱发的小鼠耳部水肿和蛋清 诱发的大鼠足爪肿胀均呈现抑制作用，能有效的控制急性炎症过程，并且对 棉球引起的大鼠肉芽肿组织增生也有一定抑制作用。还可缩短出血、凝血时 间，止血效果明显。1 3 0 4 槐角饮 治疗慢性咽炎1 7 5 例，山东省东阿县人民医院卢正芩、刘延华自1 9 9 6 年以来，应用单味槐角治疗慢性咽炎1 7 5 例，收到良好效果。【3 1 】 综上所述，槐角的研究历史较早，化学成分复杂，药理作用显著，临 床应用广泛。现代化学和药理学研究都阐明了化学成分和临床应用间的关 系。我们研究的重点槐角苷，具有雌激素样作用，对于当前用于预防中老年 妇女的骨质疏松、更年期综合症等与雌激素代谢相关的疾病，具有极好的应 用前景和开发前途。目前对槐角的研究中，染料木素的研究相对较多，然而 槐角中的其他成分也同样具有很高的开发价值。所以需要进一步进行更深层 次的研究。 西北大学硕士学位论文 二2 0 0 5 年版中国药典槐角含量测定项标准修订 2 0 0 0 年版中国药典槐角的质量标准无含量测定项，为了对槐角的质量 进行有效的评价及检验，2 0 0 5 年版中国药典修订会议作出增加槐角含量测 定项的决定。我承担了此项工作，顺利完成标准修订任务，现在已成功通过宁夏 药品检验所的复核，以下为实验的具体内容。 2 1 实验材料 2 1 1 实验药材 槐角药材购自西安市药材市场及由各省市药品检验所支持提供，均为当年采 收、保存良好的正品。 2 1 2 对照品 槐角苷对照品由陕西省生物医药重点实验室自行分离制备得到。详见本文讨 论。 2 1 3 化学试剂 无水乙醇 甲醇 氯仿 冰醋酸 磷酸 乙腈 乙醚 水 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 分析纯 色谱用水 纯净水 西安化学试剂厂 西安化学试剂厂 西安化学试剂厂 西安化学试剂厂 西安化学试剂厂 西安化学试剂厂 西安化学试剂厂 自制 西安涟漪纯净水饮用有限公司 2 1 4 仪器 超声波清洗器 y c q 一3 0 0 上海凯波超声波设备有限公司 精密电子天平 b p 2 1 1 d德国s a r t o h o u s 公司 紫外。可见分光光度计 u 一2 0 0 1日本h i t a c h i 公司 h p l c 仪器卜7 4 2 0 紫外检测器日本h i t a c h i 公司 西北大学硕士学位论文 色谱柱 n 2 0 0 0 色谱工作站 y w g o d s c 1 8 不锈钢色大连江申分离科 谱柱( 2 5 0 m m 4 6 m m ，学技术公司 1 0 u m ) h a m i l t o n 微量进样器5 0 u l 微孔滤膜中= 1 3 m m ，4 5 u r n 超纯水处理机 b a r n e s t h a m i l t o n 公司 天津市色谱科学技术公司 日本h i t a c h i 公司 2 2 测定化学成分的选择 根据现有文献资料显示，槐角中主要含有异黄酮类物质，如芦丁、染料木素、 染料木苷、槐角苷等，而芦丁主要存在于槐米中，染料木苷为槐角苷的同分异构 体，含量虽高，但它并非槐角独特成分，其广泛存在于豆科植物中，如大豆中含 量极高，并且染料木苷与槐角苷的水解产物都为染料木素，并且槐角中槐角苷的 含量普遍要高于染料木苷，所以为了更好的控制槐角的质量，我们选择了测定槐 角苷的含量作为评价和检验槐角质量的标准，以达到控制槐角质量的目的。 2 3 对照品及供试品溶液的制备 ( 1 ) 对照品溶液的制各 称取槐角苷对照品8 m g ，精密称定，置2 0 0m l 量瓶中，用甲醇溶解并稀释 至刻度，摇匀，制成每l m l 含0 0 4 m g 槐角苷的对照品溶液，用0 4 5 um 的微孔 滤膜过滤，即得。 ( 2 ) 供试品溶液的制备 取本品粉末约2 9 ，精密称定，置于1 0 0m l 具塞锥形瓶中，精密加入7 0 7 , 醇5 0 m l ，称重，超声处理4 5 分钟，称重，用7 0 乙醇补足减失的重量，摇匀， 滤过，精密吸取续滤液5 m l ，置于2 0 0 m l 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀， 用o 4 5ui n 的微孔滤膜过滤，即得。 2 4 色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇一乙睛o 0 7 磷酸溶液( 1 2 ：2 0 ：6 8 ) 西北大学硕士学位论文 为流动相；检测波长为2 6 0 n m 。理论板数按槐角苷峰计算应不低于2 5 0 0 。 2 5 方法学研究 2 5 1 色谱条件的选择 ( 1 ) 检测波长的选择取槐角苷对照品适量，用甲醇溶解后，在2 0 0 6 0 0 n m 的波长范围内扫描，结果在2 6 0 n m 处有一最大吸收峰，所以选用2 6 0 r i m 为含量 测定的检测波长。见图1 。 w a v e l e n g t hs b a n 1 1 5 0 0 0 , t 0 0 m 图1 槐角苷的紫外光谱扫描图 ( 2 ) 流动相的选择 根据槐角苷的化学性质以及参考现有文献资料，曾拟订系列流动相组 甲醇一水一冰醋酸( 4 0 ：5 7 5 ：2 5 ) 甲醇一水( 3 0 ：7 0 ) 1 4 妒9 后。! 西北大学硕士学位论文 甲醇一乙睛一o 1 磷酸溶液( 1 6 ：2 4 ：6 0 ) 甲醇一乙睛一0 0 7 磷酸溶液( 1 2 ：1 8 ：7 0 ) 甲醇一乙睛一0 0 7 磷酸溶液( 1 2 ：2 0 ：6 8 ) 结果最后一个系统分离效果最好。见图2 。 槐角 方法史件：报告时简l2 0 0 3 _ o 1 2 ：2 1 ：1 8 方 击峦件 a 分析结果衰 h u a i 报告时阀t2 0 0 3 - 0 4 - 1 0 ，1 2 ：3 0 ：2 0 b 分析结果表 西北大学硕士学位论文 图2高效液相色谱图 a 对照品( r e f e r e n c es u b s t a n c e l b 槐角( f r u c t u ss o p h o r a e ) ( 3 ) 色谱柱的理论板数 在选定的条件下，注入槐角苷对照品溶液及供试品溶液，记录色谱图，按槐 角苷峰计算理论板数，前者为4 1 9 0 ，后者为4 5 2 0 ，所以定为不低于2 5 0 0 。见图 2 。 ( 4 ) 分离度在选定的条件下，注入供试品溶液，记录色谱图，计算槐角苷 峰与相邻峰的分离度为1 5 。见图2 中b 图。 2 5 2 槐角样品水分的测定 ( 1 ) 样品：宁夏槐角( 由宁夏药品检验所提供) ( 2 ) 方法 甲苯法：称取本品约1 0 9 ，精密称定，照2 0 0 0 年版中国药典 一部附录甲苯法项下测定水分，结果为1 2 8 。 2 5 1 3 提取溶剂的选择 槐角苷属于异黄酮类，根据其化学成分的性质以及现有资料，先后选用了甲 醇、9 5 z l j 醇、9 0 乙醇、8 0 7 , 醇、7 0 乙醇、6 0 乙醇、5 0 乙醇为提取溶剂， 对样品进行超声处理4 5 分钟，结果见表1 及图3 。 1 6 堕j ! 查兰堡主兰垡丝塞 表1 提取溶剂选择 提取溶剂 取样量( g )峰面积含量( )平均含量( ) r s d ( ) 9 2 5 2 4 5 2 0 0 5 5 4 ，4 9 9 9 0 7 5 8 4 甲醇4 4 6o 8 5 8 9 7 2 7 7 1 9 9 3 74 4 2 3 8 9 3 9 2 4 5 8 8 4 0 2 2 0 0 6 22 。8 8 6 5 8 7 6 4 2 9 5 乙醇 2 9 21 1 7 5 9 0 4 1 4 2 0 0 7 12 9 5 4 6 1 3 9 8 3 7 8 7 7 9 0 2 0 1 0 43 8 7 4 7 9 4 1 7 9 3 7 72 8 4 9 0 乙醇 7 3 7 2 0 7 2 0 0 1 73 6 6 0 7 5 1 0 1 5 9 5 4 5 6 3 2 0 0 1 54 7 3 4 9 7 0 3 0 8 8 0 乙醇 4 7 5o 3 6 9 7 6 8 0 6 2 0 0 5 94 7 6 7 9 6 5 7 9 4 1 0 7 3 3 4 9 2 0 0 3 15 2 7 7 1 0 7 4 0 5 7 7 0 乙醇 5 2 7o 1 0 1 0 7 3 3 0 1 2 0 0 9 65 2 6 7 1 0 7 6 6 4 8 1 7 西北大学硕士学位论文 8 5 8 2 5 4 2 0 0 7 34 2 7 2 8 8 3 7 7 8 6 0 乙醇4 2 70 0 3 8 7 9 8 2 6 2 0 0 0 24 2 7 5 8 5 7 0 7 0 8 2 0 4 6 l 2 0 0 0 94 0 5 3 8 2 7 1 2 9 5 0 乙醇 4 1 21 5 6 8 4 7 3 8 2 2 0 0 1 24 1 8 2 8 5 2 7 0 4 剂。 c b 5 芦 4 骝。 2 l n 爨梦梦梦梦爹 溶剂 图3 不同提取溶剂与槐角苷提出率的关系 结果显示7 0 的乙醇对槐角苷的提出率最高，故选用7 0 的乙醇为提取溶 1 8 西北大学硕士学位论文 2 5 4 提取方法的选择 取宁夏槐角2 9 ，共4 份，每2 份为1 组，精密称定，分别用7 0 的乙醇5 0 m l 超声4 5 分钟，加热回流处理4 5 分钟，结果见表2 。( 注：对照品的峰面积为9 3 3 9 7 1 ， 用作方法学研究的宁夏槐角的水分为1 2 8 。1 表2 提取方法的选择 方法 取样量( g )峰面积槐角苷含量( )平均含量( )r s d ( ) 1 0 5 8 2 4 0 2 0 0 5 55 1 6 9 1 0 4 7 5 4 8 回流 5 0 71 9 0 1 0 0 9 4 9 7 2 0 0 3 74 9 7 6 1 0 1 6 0 7 9 1 0 5 9 0 7 8 2 0 1 5 15 1 2 8 1 0 4 0 2 3 7 超声 5 2 42 1 7 1 0 6 6 6 0 5 2 0 0 9 75 3 5 6 1 1 2 0 0 8 3 结果显示，回流与超声的提出率基本相同，因超声比较方便，且提出液的杂 质也比回流处理的少，故选用超声处理。 2 5 5 提取时间的考察 取宁夏槐角样品2 9 ，共六份，每两份为一组，精密称定，各精密加入7 0 乙醇5 0 m l ，分别超声处理1 5 m i n 、3 0 m i n 、4 5 m i n 、6 0 m i n ，结果见表3 ，图4 。 1 9 西北大学硕士学位论文 表3 提取时间的选择 提取时间( m i n ) 取样量( g ) 峰面积 含量( )平均含量( ) r s d ( ) 6 9 8 0 2 2 2 0 0 5 93 4 8 1 7 2 0 6 0 8 1 53 5 62 1 l 7 4 1 0 3 5 2 0 0 1 l3 6 3 2 7 3 5 2 7 1 8 6 1 8 0 5 2 0 0 9 24 3 1 0 8 9 7 2 7 3 3 04 4 22 6 0 9 2 2 3 8 6 2 0 0 7 44 5 4 0 9 2 8 9 9 4 1 0 7 3 3 4 9 2 0 1 5 35 2 4 5 1 0 7 4 0 5 7 4 55 2 5o 0 8 1 0 7 3 3 0 1 2 0 1 4 45 2 5 4 1 0 7 6 6 4 8 1 0 8 6 4 9 9 2 0 1 0 25 3 3 4 1 0 9 1 8 5 8 6 05 2 81 0 5 1 0 9 0 6 2 7 2 0 1 2 75 2 2 3 1 0 4 5 0 2 6 西