（动物学专业论文）不同罗氏沼虾群体的营养品质及遗传特征初步研究.pdf

学位论文独创性声明 本人所至交的学位论文是我在导师的指导下进行的研究工作及 取得的研究成果据我所知，除文中已经注明引用的内容外，本论文 不包含其他个人已经发表或撰写过的研究成果对本文的研究做出重 要贡献的个人和集体，均已在文中作了明确说明并表示谢意 作者签名：主毽一 学位论文授权使用声明 本人完全了解华东师范大学有关保留、使用学位论文的规定，学 校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论文的电 子版和纸质版有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论 文进入学校图书馆被查阏有权将学位论文的内容编入有关数据库进 行检索有权将学位论文的标题和摘要汇编出版保密的学位论文在 解密后适用本规定 学位论文作者签名：主 慧、 日期：埘6 ，6 f f 导师签名：晰 日期：文归f 占烈 华东师范大学2 0 0 6 届硕士论文 不同罗氏沼虾群体的营养品质及遗传特征初步研究 中文摘要 本论文采用多元统计分析、生化成分测定、p c r 扩增及d n a 测序和毒理学 等方法，对不同遗传背景的罗氏沼虾( 肘i c 阳6 阳c f “mr 删6 e 倒f ) 群体的形态 特征、营养品质、基因变异及幼体的抗逆性等进行了比较的研究。通过综合分析， 较全面和准确地揭示出不同群体之间的形态和营养品质的差异、遗传特征以及幼 体抗逆性与亲体之间的关系。 一、不同罗氏沼虾群体形态差异的比较研究 采用三种多元分析方法，对8 个罗氏沼虾( 胁曲m 曲f h m ，删6 e ，硝) 群 体( 浙江养殖群体，缅甸引进群体子二代及6 个不同组合杂交群体) 的1 2 个 形态比例参数进行比较研究。聚类分析和主成分分析法对雌、雄虾的分析结果 表明：6 个杂交群体的形态较为接近，而与养殖群体和缅甸引进群体子二代的 趋异程度逐渐增加。构建的5 个雌体主成分中，方差贡献率分别为主成分( 1 ) 2 6 1 9 1 、( 2 ) 1 6 0 3 6 、( 3 ) 1 3 3 0 9 、( 4 ) 1 0 7 6 9 、( 5 ) 1 0 1 6 6 ，累积 贡献率为7 6 4 7 1 。相应地，雄体的方差贡献率分别为主成分( 1 ) 2 5 2 0 6 、主 成分( 2 ) 2 0 2 7 7 、主成分( 3 ) 1 6 9 8 5 、主成分( 4 ) 1 3 2 2 2 、主成分( 5 ) 8 9 4 5 ，累积贡献率为8 4 6 3 4 。判别分析结果显示，8 群体之间的形态参数 之间有极显著的差异( p = 0 0 1 ) ；8 群体雌体判别函数的判别准确率p 1 为6 0 0 3 1 0 0 0 0 ，尸2 为3 3 3 0 1 0 0 ，综合判别率为9 2 1 ；雄体判别准确率p 1 为2 0 o o 1 0 0 0 0 ，尸2 为2 0 0 0 1 0 0 ，综合判别率为8 6 4 。其中判 别函数对养殖群体，缅甸引进群体和“南太湖1 号”杂交群体三个群体的判别 准确率较高。综上所述，养殖群体、缅甸引进群体和“南太湖1 号”群体在形 态上已经出现了明显的分化，并独立成为三个不同的种群：其他杂交群体由于 同时综合了养殖群体和引进群体两者的相关性状，形态上没有呈现显著的差异 ( p o 0 5 ) 。 二、罗氏沼虾三群体问肌肉营养成分及消化酶活性比较 试验对三群体罗氏沼虾( 肘i c m 矗r 口c f h m ，翻6 e l 酊f ) 肌肉营养成分以及消 化酶进行了分析，该三群体分别为浙江南太湖养殖群体( a ) 、缅甸引进野生群 体子二代( b ) 和“南太湖1 号”杂交群体( b _ + ) 。结果表明，“南太湖1 号” 华东师范人学2 0 0 6 届硕士论文 杂交群体( b - + ) 粗蛋白含量为( 1 7 5 7 2 1 9 ) ，高于其他两个群体：而本地 养殖群体粗脂肪含量最高，达( 2 0 4 o 1 2 ) ，显著高于缅甸引进种( b ) 和杂 交群体( b - + ) ( p b ( 6 7 6 5 ) 赳6 5 6 7 ) 。消化酶活性总体趋 势为：群体b 、b - + 各种消化酶活性都较高，而群体a 活性较低。经统计分析， 群体b 、b - + 各种消化酶活性都显著高于群体a ( p o 0 5 ) ( 类胰蛋白酶极显著 ( p o 0 5 ) 。 由此可以得出上述三群体中，杂交群体( b - + ) 无论是营养品质还是在消化酶活 性方面都优于其他群体，其次是缅甸野生群体( b ) ，而本地养殖群体( a ) 的各 项指标都较差。 三、罗氏沼虾三群体问线粒体d - l o o p 基因的初步研究 首先从g e n c b a n k 查到的罗氏沼虾线粒体d ，1 0 0 p 基因序列，共有9 3 1 个碱基， 由于d 1 0 0 p 基因序列的特殊性( a + t 含量很高) ，引物设计时从其两侧的基因设 计引物，根据基因序列用p r i i n e r 5 软件设计合成5 对引物，对浙江养殖群体( a ) 、 缅甸野生群体予二代( b ) 和“南太湖1 号”杂交群体( b 斗) d 1 0 0 p 基因进行 p c r 扩增。然后筛选出其中一对扩增效果最好的一对引物，通过优化得到了p c r 扩增的最佳条件：5 0 u l 的反应体系中包括1 0 b u 踟r5 肛l ，模板量2 0 0 码0 0 i l g ， 1 0 m m 姗m l ，2 5 m m m + 5 p 1 0 和me a c h 引物2 和l ，5 ut a q d n a 聚合酶 o 如i ，其余部分用无菌三蒸水补足；循环参数为9 4 预变性4 5 m i ，9 4 变性 1 m i n ，4 0 复性1 m i n ，7 2 延伸9 0 s ，设定4 0 个循环，最后7 2 延伸1 0 m i n 。 研究结果表明，在线粒体d 1 0 0 p 基因序列方面，这三群体的罗氏沼虾并没有出 现明显地分化。提示罗氏沼虾虽然经过多年的人工养殖，但在变异速度较快的线 粒体d 1 0 0 p 基因水平上，与野生群体还没有产生明显的分化。研究同时表明， 野生群体内个体遗传多样性较大，而养殖群体内个体差异较小，同时养殖群体内 的所有个体都有出现了一个碱基缺失。养殖群体的遗传多样性变小，很多研究已 经证明了这一点，是因为长期的人工养殖、近亲繁殖所导致。而碱基出现缺失现 象的原因还有待于进一步研究。 四、罗氏沼虾三群体幼体抗逆性差异的初步研究 华东师范大学2 0 0 6 届硕士论文 本研究分别从幼体的生长、发育、抗逆性三个方面综合评价浙江养殖群体 ( a ) 、缅甸野生群体子二代群体( b ) 和“南太湖1 号”杂交群体( b - + ) 三群 体罗氏沼虾幼体的品质。整个幼体发育过程中，“南太湖1 号”群体生长速度最 快，缅甸野生群体次之，浙江养殖群体最差。从幼体的发育变态情况来看，三群 体幼体发育的同步性没有表现出明显的差异。在幼体的整个发育过程中，三群体 幼体对氨氮( 总氨氮和非离子氨氮) 的2 4 - h 【b o 都是随着发育过程的进行而逐 渐增大，并且三群体幼体发育到第1 6 天( 约期幼体) 时，对非离子氨的耐受 能力均最强。比较而言，缅甸野生群体( b ) 幼体对非离子氨抗逆性最强，养殖 群体( a ) 次之，“南太湖1 号”杂交群体( b - + ) 最差。杂交群体在生长方面 表现出明显的优势，而在幼体抗逆性方面不如野生群体，其原因有待进一步研究。 关键词：罗氏沼虾；群体；营养品质：形态：多元统计分析；d 1 0 0 p 基因；序列 多态性；抗逆性。 生查墅蔓盔兰! ! 堕旦堡主堡兰 一 p r e h m i n a r ys t u d i e so nn h t t i o n a lq u a l i t ya n dg e n e l i c c h a r a c t e n s t i c sa m o n gp o p u l a t i o n so f m ，叼哼p n 6 口r g 村 a b s t r a c t n ei n v e s t i g a t i o no fm o r p h o l o g i cd i v e r s i t y 、n u t r i t i o n a lq u a l i t y 、p o p u l a t i o n g e n e t i c c h a r a c t e r i s t i c sa n dq u a l i t yo fi a r v 锄o n g t l l r e e p o p u l a t i o n s 0 f 肘a c ，0 6 r n 曲l “m ，绷6 p r g “w e f cc o n d u c t e db yu s i n gt h ci n t e g r a t i v em e t h o d s ， i n d u d i n gt l l em u l t i v a r i a t i 叽a n a l y s e s 、p c r 锄ds e q u e n c i n gt e c h i l i q u ea i l d b i o c ：h e m 砌 c o m p o s i t i o na n a l y s i so ft h es l l r i m pm u s d e s t h ep o p l l l a t i o n sa r e 删f i c i a lc u l t u r e d p o p u l a t i o n ( a ) ，p o p u l a t i o no fb u 衄a ( b ) a n dp o p u l a t i o no f t h eh y b r i d i z e db e t w e e n b u m aa n da n i & i a lc i l l t u r e dp o p u l a i t o n ( b - + ) t h er e s u l t sh a v cs h o w e dt i l a tt h e m o r p h o l o g i ca n dn u t r i t i o n a lq u a l i t yd i v e r s i t y g c n c t i cc h a r a c t e r i s t i c sv a r i a t i o na n d q u a l i t yo fl a r v a e 锄o n gt h et h r p o p u l a t i o n s 1 s t u d i e so nd i 丘e r e n c e i i l m o r p h o l o g y d i s c r i m i n a t i o n a m o n gm r e e p o p u l a t i o n so f 埘：，m 删6 e ，g f f b a s e do n1 2 m o r p l l o l o 莓c a lp f o p 瞰i a l c h a r a c t e 俗 o f 肘h c r 0 6 r 口曲f “m ，甜翻6 b ，f ，t h r c e m u l d v a r i a t j o n a n a l y s i sm e t l l o d s ( c l u s c e f 锄a l y s i s ，p 由p i c a l c o m p o n e n ta i l a l y s i s a n dd i s 面m i n 蛆t a n a l y s i s ) w e r ea d o p t e dt o c o m p a r a b l y i n v e s t i g a t et h ei n o f p h o l o 百c a lv a r i a t i o n 锄o n ge i g h tp o p u l a t i o i l s ( 1c u l t i v a t e d ，1w i l d a n d6h y b r i d i z e dp o p u l a t i o n s ) t h er e s u l t so fc l u s t e ra n a l y s i sa n dp r i n d p a lc o m p o n e n t a n a l y s i si n d i c a t e dt h a tt h em o r p h o l o g i c a lc h a r a c t e r sw e r es i m i l a ra m o n gt h e s i x h y b r i d i z e dp o p u l a t i o n s b u tq u i t e d i f f e r e n tf r o mt h a to fc u l t i v a t e d 粕db u r m a i n 呐d u c e dp o p u l a t i o n i nt h e 曲n d p a l m p o c n ta i l a l y s i so ft l l ef e m a l ep 叩u l a t i o n s ， f i v ep r i n d p a lc o m p o n e n t sw e r ec o n s t m c t e d ，t h ec o n 打王b u t o r yr a t i oo ft h ef i r s t p r i n c i p “c o m p o n e n tw a s2 6 1 9 1 ，也es e c o n d ，t h et h i r d ，t h ef o u n ha n dt h ef i f mw a s 1 6 0 3 6 ，1 3 3 0 9 ，1 0 7 9 6 ，a n d1 0 1 6 6 r e s p c c t i v e l y t h ec u m u l a t i v cc o n 砸b u t o r y m t i ow a s7 6 4 7 1 a c c o r d i n 西y ，f o rm em a l ep o p l l l a t i o n s ，f i v ep f i n d p a lc o m p o n e m s w e r ea l s oc o n s t n 】c t e d ，t h e i rc o m 曲u t o r ym t i o sw c r e2 5 2 0 6 ，2 0 2 7 7 ，1 6 9 8 5 ， 1 3 2 2 2 a n d8 9 4 5 r e s p e c t i v e l y ，t l l ec l l r n u l a t i v ec o n t 曲u t o r yr a t i ow a s8 4 6 3 4 t h er c s u l to fd i s c r i m i n a ma n a l y s i sr e v e a l e dt h a tt h e r ew e r es i g n i f i c a n td i e e r e n c e s a m o n gm o s to ft h ee i 曲tp o p u l a t i o n s ( p o 0 5 ) ，w h i l et h a t o fb - + w a sn ”s l i g h t l yh i g l l e r ( 1 7 5 7 2 1 9 ) ， f o l l o w e db yb 蛐da s e q u e n t i a l l y t 1 l ec m d ef a tc d n t e n to fp o p u l a t i o na w a s s i 鲫i 丘c a n t l yh i g l l e r t h 锄m a to fp o p u l a t i 衄b 口 0 0 5 ) b e s i d e s ，t h ec o n t e n t so ft o t a l 锄m oa c i d s ，e s s e n t i a l 枷如oa c i d s ，d d i c i o u s 锄i n oa d d s ，a n de p a + d h ai nt h e m u s c l eo ft h ep o p u l a t i o nb + w e r ct h eh i g h e s t ，a l l dt h ee s s e n t i a la m i n oa c i d si n d e x w a s6 8 0 6 ，w h i c hw a st h ch i 9 1 1 e s to ft h et h r e ep o p u l a t i o i l s 1 1 l ed i g e s t i v ee n z y m e a c t i v i t yo fb + a i l dbw a ss i 印访c a l l t l yh i g h e rt h a na ( p o 0 5 ) ，w h i l et h a to fb i + a n d bw e r en o ts i g n i f i c a n t d 诳色r e n c e si nt h e s ep 盯咖e t e r sd e t e m l i n e dm a r k e dt h e d i 如r e n c e so ft h em u s c l en u t r i t i 衄a 1q u a l i t y 柚dd i g c s t i v ee l l z y 眦a c t i v i t yo fm et h r c e p o p u l a t i o n s a c c o r d i n gt 0t h er e s u l t si nt h ep 磷e n ts t u d y t h em u s d en u t r i t i o nq u a l i t y a n dt l l e d i g e s t i v ee n z y m ea c t i v i t yo fp o p u l a t i o nb + s l l o w e dt h eb e s tp r o f i l ea m o n g 也et h r e ep o p u l a t i o n s ，w h i l e 如a to ft h el o c a lp o p u l a t i o na w a sw o r s tc o m p a r a t i v e l y 3 s t u d i e so nd 1 0 0 pg e n ea m o n g 也r e ep o p u l a t i o n s o f 坛m 朋6 e 曙矗 t h i ss t u d yw a st oi n v e s t i g a t et h eg e n e t i cv a r i a t i o n 锄o n gt h et h r e ep o p u l a t i o n s ( p o p u l a t i o no ft h ec u l t u r e d ，a ；p 0 p u l a t i o no fb u a ，b ；p o p u l a t i o no ft h eh y b f i d i z e d 0 f 出e 柳o ，b - + ) t h r o u g hm i t o c h o n d r i a ld l o 叩g e n eo fmr 删6 e r g l f ，w h i c hw a s 5 兰查堑蔓盔堂! ! 塑旦堡主堡奎 一 e v o l v e dm o r eq u i c l 【l ym a nm eo t h e rm i t o c h o n d r i a lg e n e s1 0 一1 5t i m e sa n dw a sm o r e a p p r o 砸a t et oi n v e s t i g a t er e l a t i 0 璐h 啷o fi n l r a s p e d e s t h eo p t i m u m 锄p l i f i c a t i o n c a n d i t i o no ft h ec o m p l e t em i 0 q c _ h o n d r i dd 1 0 0 pg e n eo fm ，曰s 栅6 e 嚼fw 硒o b t a i n e d h la5 叻lr e a c t i o ns y s t e m ，t i l e r cw e r e1 0 b u 疏r 私l ，3 0 0 4 0 0 n gt e m p l a t e ，1 嘶m d n t p1 m ，2 5 m mm 矿劫l ，o 和mp 曲啉2 釉，5 ut a q d n a 叫舯e r a s co 伽， a n dt l l c r e s tw 镐a d d c db ys t e r i l ed d d h 2 0 t h ec y d ep a r a m e t e r sw e r e p r e d e n a t u r a l i z a t i o na t9 4 f o r5m i n ，3 5c y c l e so fd e a t u r a l i z a t i o na t9 4 f o r1 m i n ， 柚n e a l i n ga t4 0 f o r1m i n ，锄de x t e n s i o a t7 2 f o r2 m i i l ，a n de x t c n s i o na t7 2 f o r1 0 m i nf i n a l l y t h eg e n e t i c 叫舯o r p h i s ma m o n gt h r e ep o p u l 撕o n so f 肘：，伽绷6 喇fw a s e x a m i n e db ym i t o c h o n d r i a ld n aa i l a l y s i s c o m p l e t em i t o c h o i l d r i a ld 1 0 0 pg c n 骼 f r o m6i n d 珀u a l sf 【0 mt h i e ep o p u l a t i o n sw a sa m p l i 如dw i t ht h ep o l y m e r a s ec h a i l l r e a c l i o n ( p c r ) a n ds e q u e n c e d i na d d i t i o nt o 也ee x i s t td - 1 0 0 ps e q u e n c eo ft h e g e n c b a d ko fm 瑚e n 蚰嘣 ( e a s t e mj a v a ，l n d o n e s i a ) ，t l 托r ca r ef o u r 哪l a 虹o n so fm m 朋6 e 删f n eg e n c t i cd i v e 璐i t yo fp o p u l a t i 伽bw a s ”i t cl a r g e ，w l l i l ec u l t i v a t c d p o p u l a t i o na w a sv c i ys m a l l 1 i la d ，t h e r ew a so n en u d e o t i d ea b s e n to fa 1 1 i n d i v i d u a l o fc i l l t i v a t e dp 叩u l a t i o n t h er c a s o nm a yb et h a tt h eg e n e t i cd i v e r s i t y a m o n gt h ei n d i v i m l a lo fc l l l t i v a t c dp o p u 王a t i w a ss m a l l e ra f t e rc u l t i v a t i i l gf o fal o n g t i m e b u tt h em e c h a i l i s mo f0 n en u c l e o t i d ea b s e n c cm i 曲tn c c df l l n i l e rr e s e a r c h 4 p r e l i m i n a r ys t u d i e so nt h eq u a l i t yo f 皿邶翻6 e r g f fl a a co ft h r e ed i 疵r e n t p o p u l a t i o n s t h i ss t i l d yw a st oc o m p a r et h eq u a m yo fmm ，明6 e ，斟fl a n r 扯o f t h r e ed j 咕r e t p o p u l a t i o n s ( p 0 p u l a t i o no ft l l ec i l h u r e d ，a ；p o p u l a t i o n 0 fb u r i i l a ，b ；p o p u l a t i o n0 f t h eh y b r i d i z e db e t w e e a 明db ，b - + ) r e s p e c t i v e l y f m mt h c i rg r o w t h ，d e v e l o p m e n t a n da m m o n i ar e s i s t a i l c e h lt h ev i e wo ft h e i rg r d w t l l ，t h ch y b r i d i z e dp o p u l a t i o n ( b - + ) g r e wt h em o s tr a p i d l y ，f 0 1 l o w e d b yi n d u c e dp o p u l a t i o no fb u 姗a ( b ) ，a n dt h e nu l c c l l n i v a t e dp o p u l a t i o n ( a ) h d w e v e r ，t h e r ew a sn 0s i 弘砸c a n td i 骶r e n c ea m o n gt h 9 s e t h r e el a r v a eo nm e i rd e v e l o p m e n t w 曲t h el a r v a ed c v e l o p i n g t h e2 4 i hu 5 0o f 锄m o n i ar e s i s t a n c ei n 廿e a s e d ，柚dt h et c s i s t 锄c eo fn o n - i o n i s e da m m o n i a ( m gn h 3 r 1 ) r e a c h e dt h e h i 曲e s t w h e n t h e y w e r e 1 6 - d a y 0 l da g e ( d a y sa f l e r h a t c h e d ， a p p m x i m a t e l yp h a s e ) a m o n gt h et l l r e ep o p u l a t i o n s ，t h e 锄m o n i a ( t o t a la 1 1 d n o n i o n i s e d 锄m o n i a ) r e s i s t 强c eo fi 1 1 d u c e dp o p u l a d o no fb u 加a ( b ) w a ss t f o n g e s t ， f b l l o w e db yt h ec u i t i v a t e dp o p u l a 虹o n ( a ) ，f i n a u yt 1 1 eh y b r i d i z e dp o p u l a t i o n ( b - + ) i n 生至塑翌奎兰! ! 唑旦堡苎丝苎 c o n c l u s i o n ，t h eh y b r i d i z e dp o p u l a t i o n ( b - + ) h a st h ep o t e n t i a lo f9 0 0 dg m w t ha n d b a d a m m o n i ar e s i s t a n c e k e y w o r d s ： 胁砒c j l i 啪，明缸俘f ；p o p u l 撕0 n ； n u t r i t i o n a l q u a l i t y ；m o t p h 0 1 0 9 y ； m u l i i v a r i a t i o na n a l y s e s ；d - 1 0 0 pg e n e ；g e n e t i cp o l y m o 咄i s ； s s st 0 l e f a n c e - 7 华东师范大学2 0 0 6 届硕士论文 前言 罗氏沼虾( 肘i c ，d 6 加曲f n m ，删6 e r g “) 为世界上的大型淡水虾类之一，其 肉味鲜美、食性广、生长快，是一种优良的养殖品种，主要分布在东南亚国家a 自1 9 7 6 年引进我国以来，罗氏沼虾养殖已在全国广大养殖地区迅速发展，2 0 0 1 年全国罗氏沼虾总产量达到1 0 万余吨。 近年来，随着水产养殖技术的推广和创新，罗氏沼虾人工养殖得到了前所未 有的发展。但与其他经济虾类养殖相似，养殖的罗氏沼虾均为未经遗传选育的天 然种群，尚未形成养殖品系。同时，由于对天然种群过度捕捞，罗氏沼虾的资源 急剧衰减，养殖中的自繁自育现象又导致其品质严重下降，致使我国罗氏沼虾产 业面临种质衰退的潜在威胁。种质衰退的主要表现有雌虾性成熟提早，经济性状 差，个体大小不均，生长缓慢，饲料系数高，抗逆能力弱，且养殖虾风味不及野 生虾。为了提高罗氏沼虾品质，培育出品质优良、抗逆性强的养殖品种，进行改 虾的遗传多样性和种质研究就成为目前的亟待解决的问题之一。 通过品种改良与优良品种的引进以及杂交育种等人工控制的手段，使经济种 类在产量与质量上取得迅速提高，不仅在农业与畜牧业的发展应用较为广泛，在 水产动物上也已有应用。罗氏沼虾也可通过杂交育种，利用杂交优势，培育出抗 病力强、成活率高新品种，满足日益增长的罗氏沼虾增养殖生产需求。但至今尚 未有系统的理论基础和科学的评价体系作为指导，导致生产中的遗传选育有一定 的盲目性。目前对水生动物种质遗传育种方面的研究主要集中在形态学、营养学 和分子遗传学三个领域，但从毒理学角度对群体品质进行比较研究的较少。 本研究首先对罗氏沼虾野生、养殖及其杂交群体间在形态学、营养学、分子 遗传学三个不同的层次上进行比较分析，以期揭示种质衰退的内在机理，为品质 改良提供基础资料；同时从毒理学的角度，对三群体罗氏沼虾幼体的生长、发育 和抗逆性进行了比较研究，综合评价三群体的品质，为罗氏沼虾的遗传育种工作 提供了种新的研究方法和思路。 华东师范大学2 0 0 6 届硕士论文 第一章罗氏沼虾的研究历史及现状 罗氏沼虾( 如c r d 6 m 曲j “m 砌5 删6 e 恻fd em a n ) 又称马来大虾、淡水长腿大 虾、金线虾( 台湾) ，主要分布于东南亚国家，是淡水虾中个体最大、养殖最广 的虾类之一。近十年来，日本、美国、澳大利亚以及我国相继引种开展了规模化 的养殖。本文拟对罗氏沼虾基础方面的研究做一综述，为以后罗氏沼虾遗传多样 性、种质资源和育种研究提供参考。 1 、形态学研究 有关罗氏沼虾形态学方面的研究国外较为欠缺，国内研究相对较多，外部形 态研究主要是对整体、触角和复眼形态的研究。 1 1 外部形态 y c a i a y d a i ( 1 9 9 9 ) 从形态上描述了西双版纳的1 3 种淡水虾，其中 有几种是新种，并把它们从形态上区分开来，罗氏沼虾就是其中一种。触角形态： 曾增等( 2 0 0 4 ) 应用解剖镜和扫描电子显微镜观察了小触角的表面形态结构，并 发现罗氏沼虾小触角的表面形态迥异于以往报道的十足目甲壳动物小触角，其附 鞭构成嗅觉器官的主体结构，且其本身具有独特的保护化感刚毛之方式。此外， 作者按形态学特征将已报道的十足目甲壳动物小触角分为蟹型、龙虾型、小龙虾 型和对虾型四种类型，而罗氏沼虾小触角则属于另一种类型罗氏沼虾型。复 眼形态：早在1 9 9 8 年姚泊等人已经研究了脉冲y a g 激光照射罗氏沼虾眼柄神经 分泌细胞的电镜观察，研究这些细胞的亚显微结构的变化。接下来姜乃澄等 ( 1 9 9 8 ) ，张慧绮等( 1 9 9 9 ) ，马勇杰等( 2 0 0 2 ) 分别对罗氏沼虾幼体个眼外形及 生长动态，复眼的形态和超微结构以及罗氏沼虾幼体复眼发育超微结构进行了研 究。 1 2 内部形态 主要集中在细胞形态研究，生殖细胞：姜乃澄等( 2 0 0 1 ) 和w a n gy u f e n 2 等分别对罗氏沼虾初级卵母细胞在卵黄形成期超微结构变化和罗氏沼虾精子发 生的超微结构进行了研究。脑细胞：研究主要有秦照萍等( 2 0 0 0 ) 和廖家遗( 2 0 0 1 ) 分别对罗氏沼虾脑的形态和结构和罗氏沼虾脑神经元细胞体群进行了研究。血细 胞：研究主要有龙思思等( 2 0 0 3 ) 和周晖等( 2 0 0 4 ) 。 这些研究只是单纯基础形态学研究，形态学研究开始也己逐步向与应用结合 华东师范大学2 0 0 6 届硕士论文 的方向开始发展。 2 、生理生化研究 关于罗氏沼虾生理生化国内外研究较多，主要从代谢、肌肉营养成分和免疫 学的角度进行研究。 2 1 代谢 林小涛( 1 9 9 8 ) 研究了光周期对罗氏沼虾幼体生长和能量收支的影响。1 9 9 9 年研究了体重与亲虾代谢之间的关系而在2 0 0 0 年又研究了温度与亲虾能量代谢 间的关系，不同体重亲虾的能耗率和能源物质( 代谢底物) 的供能比有显著性的差 异，能耗率随体重的增大而减少，体质量最小的一组亲虾，主要以蛋白质为能源； 但随着体质量的增大，蛋白质所占的比例有减少的趋势，而脂肪的比例增加。体 质量最大的一组亲虾，脂肪取代蛋白质成为最主要的供能特质，两者呈线性负相 关。低温佗o ) 条件下，亲虾主要以脂肪为能源，但随着温度的升高。脂肪所占 的比例有减少的趋势，而蛋白质的比例增加，高温( 3 2 ) 条件下，蛋白质取代脂 肪成为最主要的供能物质。庄承纪( 1 9 9 8 年) 和陈琴( 2 0 0 2 年) 壳多糖对罗氏沼 虾和斑节对虾虾苗生长和抗病性研究和初步测定了罗氏沼虾耗氧率和窒息点。 2 2 肌肉营养成分 r 0 n a l d oo c a v a l l i ( 2 1 ) 研究了雌体罗氏沼虾在性成熟的过程中脂肪含量 以及脂肪酸含量的变化。n b r a g a g n o l o ( 2 0 0 1 ) 对养殖的罗氏沼虾和野生的巴西 对虾和大西洋管对虾等的总脂肪、胆固醇和脂肪酸含量的比较研究。 2 3 免疫学 r o b e n oz e m c n o ( 2 0 0 0 ) 研究了罗氏沼虾凝集素的化学性质及其结构特征。 c 0 n c e p c i o a g l l n d i s ( 2 0 0 0 ) 采用e u s a 技术测定血清凝集素的含量。两a l i p e r e y r a ( 2 0 0 4 ) 又对罗氏沼虾血清凝集素的结构以及凝集过程调控的具体机理。 础。 罗氏沼虾生理生化研究已比较深入，为罗氏沼虾以后的研究奠定了坚实的基 3 、遗传学研究 华东师范大学2 0 0 6 届硕士论文 罗氏沼虾经过累代繁殖和多代养殖，养殖种群种质明显退化，其主要表现为 个体小型化、性早熟、繁殖率下降等。造成种质退化主要有几方面，主要原因是 近交衰退( i n b r e e d i n gd e p r c 龉i o n ) 。甘西等和李明云等都对养殖群体和野生群体 遗传多样性凡廿d 的比较分析，发现养殖群体变异明显小于野生种群，这可能 是由于长期的近亲间或小群体内繁殖所导致，这与史建华等( 2 0 0 1 ) 观点一致； 其次为杂交和遗传渐渗，杂交是指不同品系个体之间的交配，杂交的结果使得基 因从一个基因库带到另一个基因库中去，发生遗传渐渗，因而使两个群体在遗传 上变得越来越相似；此外，不良环境的负选择也造成了罗氏沼虾种质的退化。罗 氏沼虾种质退化的另一突出表现是，在养殖过程中疾病多，且发生频繁、难根治。 当务之急，必须充分认识这一问题的严重性，并尽快把种质优化、改良工作摆上 研究日程，迅速开展种质提纯、复壮工作，以扼制种质退化给生产带来的冲击。 目前国内外对罗氏沼虾遗传和种质方面的研究主要有以下几个方面。 3 1 生化遗传 对于罗氏沼虾生化遗传方面的研究主要是对同工酶的研究，卢建平等( 2 0 0 0 ) ， 李广丽等( 2 0 0 1 ) 分别对罗氏沼虾胚胎发育过程中和个体发育早期的同工酶进行 研究，都是采用聚丙烯酰胺梯度凝胶电泳技术，对罗氏沼虾几个同工酶进行分析 研究，结果都发现随着发育过程的进行，酶谱都渐趋复杂。张海琪等利用聚丙烯 酰胺凝胶电泳技术，对罗氏沼虾( 如c 枷m c m 历，e 抛曙越) 肌肉中的a d h ，l d h ， g 6 p d h ，s o d ，g d h ，e s t ，a k p ，a c p 等8 种同工酶进行分析，以期为其种质 资源保护和开发以及遗传育种等方面的研究提供基础资料。结果表明：8 种同工 酶由1 7 个基因位点所编码，其中g 6 p d h 1 ，g d l l 1 和e s t 3 等3 个基因位点具有多态 现象，多态位点比侈l j 为1 7 6 。因此这3 个基因位点可作为检测种群种质特性的生 化遗传标记。接下来张海琪( 2 0 0 4 ) 又应用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对罗氏沼虾浙 江养殖群体和缅甸新引进的野生群体的1 1 种同工酶进行生化遗传分析。结果表 明；缅甸新引进的野生群体的多态基因座位比例( 1 6 ) 和群体平均杂合度( o 0 5 0 1 ) 都明显高于浙江养殖群体n 2 和o 0 4 3 1 ) 。 3 2 细胞遗传学 关于罗氏沼虾细胞遗传学的研究较少，目前仅见张天澍等( 2 0 0 3 1 从罗氏沼虾 处于囊胚期和原肠期的胚胎细胞中提取中期染色体进行细胞遗传学研究。染色体 制片分析表明，罗氏沼虾二倍体染色体数目2 n = 1 1 8 ， 但是也有一些细胞具有 1 0 0 1 0 9 条染色体。以外，还有一些细胞具有与单倍体染色体数相近的染色体 数，为以后罗氏沼虾遗传学奠定了基础。 华东师范大学2 0 0 6 届硕士论文 3 3 分子遗传学 彭巧玲等( 2 0 q 5 ) 采用简并p c r 技术，扩增了罗氏沼虾( 肘h c r 0 6 r 口曲f h m ，明6 e 曙f 1 ) d m n 基因的d m 结构域。d m n 基因家族是一个与性别决定相关的 基因家族。经序列分析，获得了d m f t 基因家族的3 个成员，其编码序列分别与 人d m r l 2 、d m r t 3 、d m r t 4 基因d m 结构域编码序列的相似性分别为9 3 、 8 0 和9 5 。与其他动物相关的d m r t 基因进行聚类分析，结果表明，不同进化 地位动物的d m n 基因d m 域编码序列存在高度的同源性，显示d m n 基因在系统 进化上高度保守，序列上的相似性可能暗示着它们在功能上的保守性。) 【i a o j i n g z l l u ( 2 0 0 5 ) 研究了罗氏沼虾肌动蛋白基因序列的分析，并对其结构特征进行了 分析，以及它们胚胎发育过程中在不同组织中的表达。高风英等( 2 0 0 5 ) 制备了 罗氏沼虾1 8 s r r n a 基因生物素标记探针并且能有效地检测到溶菌酶在不同组织 中的表达情况。而分子遗传学在种质遗传方面的研究较多，其中较早的研究是甘 西( 2 0 0 0 ) 采用r a p d 技术，对2 0 世纪7 0 年代从马来西亚引进的7 对罗氏沼虾后 代的养殖群体( 简称n y ) 和9 0 年代从新加坡引进的天然群体的f 1 与养殖群体交 配繁殖的后代( 简称n x ) 的遗传多样性进行了研究。研究结果表明：n y 群体的 变异度明显小于n x 群体1 这可能与n y 群体长时期的近亲间或在小群体内繁殖 导致种群退化有关。m a r kd eb m y n ( 2 0 0 4 ) 利用线粒体1 6 s r n a 片段研究了罗氏 沼虾的系统发生，研究结果表明：罗氏沼虾大致可以有两个分支，分别为 “e a s t 哪”和“w e s t e m ”李明云等( 2 0 0 4 ) 和张海琪等( 2 0 0 4 ) 都研究了罗氏沼虾浙 江养殖群体和缅甸野生群体的遗传差异，他们分别采用了随机扩增多态性 ( 黜谨d ) 和形态学、同工酶和d n a 分析方法研究了两群体之间的差异，研究结 果都表明了野生群体遗传多样性明显高于养殖群体，说明人工养殖会导致罗氏沼 虾遗传多样性下降。 目前罗氏沼虾遗传学的研究已比较深入，并且作为种质资源和遗传育种研究 的手段已越来越被人们重视。 4 、抗逆性研究 关于罗氏沼虾抗逆性的研究较为广泛，主要研究的抗逆因子是温度、盐度、 氨氮、光照、离子等。 4 1 温度 温度对罗氏沼虾影响的研究较多，国外的研究有f e m a n d 0d i a zh e c r a 等 ( 1 9