临床医学检验红细胞的检查以及临床意义ppt课件.ppt

红细胞检查,1,红细胞（redbloodcell,RBC;erythrocyte）,血液中数量最多的有形成分主要成分：血红蛋白主要功能：呼吸载体直径：6.79.5um，平均7.2um形状：双凹圆盘状,2,RBC,3,4,5,6,红细胞的生成,StemcellEpo原始红细胞早幼红细胞中幼红细胞晚幼红细胞网织红细胞成熟红细胞释放入血,72h,48h,平均寿命120d,7,红细胞计数（redbloodcellcount，RBC）,定义：单位体积（每升）血液内的红细胞数量原理：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池，于显微镜下计数一定体积范围的红细胞数，并换算得每升血液中红细胞数(/L),8,红细胞稀释液,稀释液：保护计数细胞，破坏非计数细胞，同时抗凝，要求不含杂质红细胞稀释液：Hayem液，由氯化钠、结晶硫酸钠、氯化高汞组成作用：氯化钠调节渗透压，结晶硫酸钠防止细胞粘连，氯化高汞防腐,9,计数方法,手工法：取样稀释计数计算仪器法：电阻抗分析或激光分析,10,手工法,10uL末梢血+2ml稀释液混匀稀释充池计数计算,11,成年男性（4.0-5.5）1012/L成年女性（3.5-5.0）1012/L初生儿（6.0-7.0）1012/L,外周血红细胞参考值,12,思考,手工法VS仪器法？,13,血红蛋白测定,（hemoglobin，Hb）,14,血红蛋白的组成,珠蛋白（globin）（4条肽链）,亚铁血红素（heme）（1个）,血红蛋白,15,珠蛋白具有种属特异性，含有两条链和两条非链正常成人的Hb包括：HbA22（90%以上）HbA222（23%）HbF22（2%以下；新生儿占70%）,16,受激素调节红细胞生成素：直接雄激素：直接和间接自身调节血红素过多氧化为高铁血红素,负反馈,血红蛋白的合成,17,血红蛋白的代谢,珠蛋白氨基酸血红素胆色素（胆绿素、胆红素、胆素原及胆素）,血红蛋白,18,还原血红蛋白（reducedhemoglobin，Hbred）氧合血红蛋白（oxyhemoglobin，HbO2）高铁血红蛋白（hemiglobin，Hi）碳氧血红蛋白（HbCO）硫化血红蛋白（SHb）,血红蛋白的种类,19,血红蛋白的测定,定义指单位体积血液中所含血红蛋白的量参考值成年男性：120-160g/L成年女性：110-150g/L初生儿：170-200g/L,20,Hb测定方法,分光光度计比色氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN）（国际标准参考方法）十二烷基硫酸钠血红蛋白测定法（SDS-Hb）（次选方法）叠氮高铁血红蛋白测定法（HiN3）碱羟血红蛋白测定法（AHD575）目视比色沙利法、测铁法、测氧法、比重法、折射仪法、光谱分析法仪器法,21,氰化高铁血红蛋白测定法（HiCN）,为国际标准参考方法步骤：取样加转化液（溶血、转化）比色,22,原理：血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各血红蛋白均可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白，通过比色根据吸光度测得血红蛋白的浓度。,23,方法：,计算：有三种方法求得Hb浓度1.A367.72.得A值后，在标准曲线上直接查找3.AKKHb/A,转化液5ml+血20ul(5min)，比色读吸光度（A）(540nm),24,标准曲线的绘制,用一组已知浓度的HiCN参考液，在分光光度计上分别测定A值，以A为纵座标，血红蛋白参考值为横座标，绘制标准曲线。例如：HiCN参考品Hbg/L：50100150200A：0.140.270.410.54如果标本A为0.32，则标本Hb=0.32370.37=118.52（g/L）,KHb/A=370.37,25,优点操作简单呈色快且稳定除SHb外均可检测根据吸光度直接定值,方法学评价,缺点KCN有剧毒HbCO转化较慢高WBC和高球蛋白血症可致溶液浑浊,26,红细胞计数与血红蛋白测定的临床意义,27,生理变化,年龄与性别新生儿：RBC高，两周后下降，6-7岁最低男性：25-30岁高峰女性：13岁-15岁达高值，21岁-35岁低水平，以后渐渐增高,28,精神因素肾上腺素RBC剧烈体力劳动或运动相对缺氧EpoRBC气压降低缺氧代偿性RBC妊娠中后期血液稀释RBC老年人造血功能减退RBC,29,病理变化,红细胞和血红蛋白增多相对增多：血浆中水分丢失，血液浓缩所致，如呕吐、腹泻绝对增多：原发性真性红细胞增多继发性低氧血症Epo（如心血管病、肺疾病、异常血红蛋白病）肾上腺皮质功能亢进,30,红细胞生成素代偿性增加,生理性：新生儿高原居民病理性：严重慢性心、肺疾患、异常血红蛋白病红细胞生成素非代偿性增加：某些肿瘤或肾脏疾患,31,32,红细胞和血红蛋白量减少,主要见于贫血：由于各种原因引起的全身血循环中红细胞总数、血红蛋白和红细胞比积减少，低于该地区、该年龄及性别组的参考范围低限时称贫血。,贫血病因,生成减少破坏过多失血过多,33,1）骨髓造血功能减退药物、物理因素、慢性肾衰、再障、白血病、恶性肿瘤骨髓转移2）造血原料不足缺铁（缺铁性贫血）、缺乏VitB12或叶酸（巨幼细胞性贫血）3）红细胞破坏增加溶血性贫血（输血不合、蚕豆病、遗传性球形细胞增多症）4）红细胞丢失过多各种原因的失血（如消化性溃疡、痔疮、钩虫病）,34,35,注意问题,Hb测定对贫血程度的判断优于RBC计数在某些病理情况下，Hb和RBC的浓度不一定能正确反映全身红细胞的总容量，如：急性失血、水潴留、失水等发生大细胞贫血或小细胞低色素贫血时，RBC计数与Hb浓度不成比例,36,红细胞形态检查,37,红细胞形态观察,大小及均匀程度红细胞形状血红蛋白含量细胞内结构,38,红细胞大小改变,直径例如小红细胞10um巨幼细胞贫血巨红细胞15um巨幼细胞贫血大小不均增生性贫血,39,A,C,B,A：normalB：megalocyteC：anisocytosis,40,红细胞形状改变,球形红细胞遗传性或获得性椭圆形红细胞遗传性靶形红细胞珠蛋白生成障碍性贫血、HbC病口形红细胞遗传性镰形红细胞异常血红蛋白S（HbS）棘形红细胞遗传性或获得性-脂蛋白缺乏症新月形红细胞阵发性睡眠性血红蛋白尿症泪滴形红细胞贫血、骨髓纤维化症缗钱状形成纤维蛋白原和球蛋白增高裂红细胞DIC、微血管病性溶血性贫血红细胞形态不整巨幼细胞性贫血,41,spherocyte,42,Elliptocyte,43,人为假椭圆红细胞,44,Targetcell,45,stomatocyte,46,Sicklecell,47,镰形红细胞,48,acanthocyte,49,50,meniscocyte,51,Teardropcell,52,Rouleauxformation,53,schistocyte,54,poikilocytosis,55,血红蛋白含量改变,正常色素性急性失血、再障、白血病低色素性缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血高色素性巨幼细胞性贫血嗜多色性溶血性或急性失血性贫血细胞着色不一铁粒幼红细胞性贫血,56,normochromic,hypochromic,hyperchromic,polychromatic,57,人为面包圈红细胞,58,铁粒幼红细胞性贫血,59,细胞内的异常结构,嗜碱性点彩红细胞：RNA，铅中毒染色质小体（豪焦小体）：核残余物，巨幼细胞贫血、脾切除后卡波环：脂蛋白变性，巨幼细胞贫血、铅中毒寄生虫：疟原虫、微丝蚴、杜利什曼原虫有核红细胞：溶血性贫血、造血系统恶性疾患或骨髓转移性肿瘤、慢性骨髓增生性疾病、脾切除后,60,Basophilicstipplingcell,61,HowellJollysbody,62,Cabotring,63,疟原虫（malarialparasite）,64,有核红细胞,65,66,红细胞的各种改变,67,红细胞比容测定（Hematocrit，HCT）,定义：抗凝血在一定条件下离心沉淀，求出单位体积血液中红细胞占的体积百分比（L/L）。与红细胞数量以及红细胞大小有关,68,温氏法（常量，中速离心）微量法首选常规方法放射性核素法参考方法折射计法、黏度法、比重法、电阻抗法（仪器）,测定方法,69,参考值,温氏法：男性0.40.54女性0.370.47微量法：男性0.420.52女性0.370.48仪器法：男性0.400.52女性0.370.48,70,离心法,EDTA抗凝离心PlasmPLTWBCRBC-redRBC-O2,71,诊断贫血并判断其严重程度，结合有关指数变化可推断贫血病因，并对贫血进行分类；评估血浆容量有无增减或稀释浓缩程度，有助于补液量的控制。增高：血液浓缩、原发性或继发性红细胞增多症降低：贫血、稀释血症（充血性心力衰竭、妊娠、输液过多）,临床意义,72,红细胞平均指数,通过RBC计数、Hb测定、HCT测定可计算出红细胞平均指数,73,定义：每个红细胞的平均体积。以飞升（fL）为单位计算：MCV=HCT/RBC例如：RBC为3.501012/L，Hct为0.36，则：MCV=0.363.501012/L=103fL参考值：手工法8092fL仪器法80100fL,红细胞平均容积（meancorpuscularvolume,MCV）,74,红细胞平均血红蛋白量（meancorpuscularhemoglobin，MCH）,定义：每个红细胞内所含平均血红蛋白的量，以皮克（pg）为单位计算：MCH=Hb/RBC例如：RBC为3.501012/L，Hb为120g/L，则：MCH=120g/L3.501012/L=34.20pg参考值：手工法2731pg仪器法2734pg,75,红细胞平均血红蛋白浓度(meancorpuscularhemoglobinconcentration,MCHC）,定义：单位容积红细胞的平均血红蛋白浓度，以g/L为单位计算：MCHC=Hb/Hct例如：Hb为120g/L，Hct为0.36，则：MCHC=120g/L0.36=333g/L参考值：320360g/L,76,临床意义,MCV、MCH、MCHC可从不同侧面反映红细胞的病理变化，有利于分析病人红细胞形态特征，进行贫血分类、诊断和鉴别诊断。,77,贫血的红细胞形态学分类,78,红细胞体积分布宽度（RBCVolumeDistributionWidth，RDW）,定义红细胞体积分布宽度是由血液分析仪根据红细胞体积的直方图导出，反映周围血红细胞体积异质性的参数，是反映红细胞大小均一程度的客观指标，常用变异系数（CV）或标准差（S）表示。,79,临床意义,与MCV结合进行贫血分类：这种分类法更能反映贫血的病理变化，对贫血的鉴别诊断有一定的价值。诊断缺铁性贫血：IDA的病人95%以上RDW增高，可与-珠蛋白生成障碍性贫血（88%RDW正常）鉴别。,80,贫血类型常见疾病大细胞均一性部分再障大细胞不均一性巨幼细胞性贫血正细胞均一性急性失血正细胞不均一性再障、部分溶贫小细胞均一性地中海贫血小细胞不均一性缺铁性贫血,81,思考,某女性病人，测得红细胞为2.8*1012/L，血红蛋白为65g/L，血细胞比积0.20。计算：MCV、MCH、MCHC该病人属于哪种类型的贫血下一步检测的方向,82,网织红细胞计数（reticulocyte，Ret）,83,Ret是介于晚幼红细胞和成熟红细胞之间尚未完全成熟的红细胞，其胞质中残存嗜碱性物质（核糖体和RNA），可被某些染料（如煌焦油蓝等）活体染色呈蓝色网状或颗粒状结构，故而得名。,直径：89.5um骨髓中网织红细胞数比外周血高约3倍,定义,84,根据Ret的形态特征和成熟程度分为五型：0型（花冠型）：有核网织红细胞型（丝球型）：红细胞几乎被网织物充满型（网型）：红细胞中央线团样结构开始松散型（破网型）：网织结构稀小，呈不规则枝点状排列型（点粒型）：呈分散的细颗粒、短丝状ICSH将网织红细胞分为IIV型,85,86,87,88,方法学选择,手工法（manual）染料：新亚甲蓝、煌焦油蓝等新亚甲蓝对Ret染色力强且稳定，为WHO推荐染料。煌焦油蓝应用历史长，但易产生沉淀。,89,原理：RNA带负电荷，与带正电荷的染料形成复合物，呈深染的颗粒状或彼此连缀成网状结构。凡含两个以上的深染颗粒或具有线网状结构的无核红细胞，即为Ret。,90,玻片法,10g/L煌焦油蓝乙醇溶液加染液加血液制备涂片观察，计算混合血液中水分易蒸发，染色时间短，染料沉渣干扰，计数结果不准确。,91,试管法,10g/L煌焦油蓝生理盐水溶液染液+血液（等量），混匀，置室温1520分钟制备涂片观察、计算重复性好，染色时间长。,92,Miller窥盘计数法,将Miller窥盘置于接目镜内，选择红细胞散在且分布均匀的部位计数。,93,计算1.网织红细胞%=1002.绝对值计算：（109/L）,大格网织红细胞总数,小格红细胞总数9,94,仪器法,染料：荧光染料（吖啶橙等）原理：荧光染色，激光测量。方法：流式细胞仪网织红细胞计数仪,95,可同时将Ret分为高荧光强度（HFR）、中荧光强度（MFR）、低荧光强度（LFR）测量细胞多，避免主观因素的影响，方法易于标准化如遇NRBC、Howell-Jolly小体、巨大血小板可呈假阳性,96,Referencevalue,成人：0.0080.022575109/L新生儿：0.020.06,97,临床意义,正常外周血中网织红细胞多为型（0.20.3）和型（0.70.8）判断骨髓红细胞生成情况观察贫血疗效的重要指标骨髓移植后监测其造血功能放/化疗时骨髓功能监测,98,网织红细胞其它参数,Reticulocytematurityindex（RMI）RMI=（HFR+MFR）/LFR100增高：溶贫、ITP、CLL、AL、PV、AA、MM降低：骨髓衰竭、无效造血，如巨幼贫,99,Reticulocyteproductionindex（RPI）,被测Hct,正常人Hct,表示网织红细胞的生成相当于正常人的多少倍,Ret成熟天数,1,RPI=Ret%,100,LFR和HFR作为鉴别诊断的初筛指标溶贫：Ret、LFR和HFR升高肾性贫血：HFR升高、LFR降低、Ret正常IRF（Immaturereticulocytefraction）未成熟网织红细胞比率IRF=MFR+HFR估计骨髓移植后造血恢复的早期指标,101,点彩红细胞计数（Basiphilicstipplingcount）,红细胞在发育过程中受到损害，胞质中残存的嗜碱性物质RNA变性沉淀，瑞氏染色时呈现粗细不等的蓝黑色颗粒。,102,103,104,参考值：0.01%临床意义：重金属及硝基苯、苯胺中毒、贫血,点彩红细胞（%）=,50个视野内点彩红细胞数,5个视野内红细胞总数10,105,红细胞沉降率（Erythrocytesedimentationrate，ESR）,定义单位时间内红细胞在一定条件下沉降的速度，以mm/h表示,106,红细胞与血浆的密度差离体抗凝血逐渐