梅毒的实验室诊断.ppt

梅毒的实验室诊断,程枫,一、概述-梅毒病原体,（一）、名词由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性全身性性传播疾病是我国卫生部规定的8种重点防治性病之一中华人民共和国传染病防治法规定的乙类传染病世界卫生组织列为世界上最常见的50种传染病之一梅毒螺旋体（Treponemapallidum，TP）是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体,（二）、生物学特性小而纤细的螺旋状微生物长520m，粗细0.2m有612个规则的螺旋基本结构为一原生质的圆柱体，为两层膜所围绕行动缓慢而有规律-围绕其长轴旋转中前后移动-伸缩其圈间之距离而移动-全身弯曲如蛇行,（三）、繁殖繁殖方式与其生活环境有关近年来电子显微镜观察，在培养条件下或在体内适宜环境中为横断分裂，分裂时将躯干分裂成长短两段分裂增代时间为3033小时当条件不利时，以分芽子繁殖生活发育周期:颗粒期、球形体期及螺旋体期，与所致疾病周期、隐伏发作及慢性病程有关,(四）、生存条件厌氧寄生物，在人体内可长期生存，体外不易生存干燥、肥皂水及一般消毒剂如1：1000苯酚、新洁尔灭、稀酒精均可于短时间将其杀死在血液中4经3日可死亡，故在血库冰箱冷藏3日以上的血液就无传染性温度的影响：41-42时可生活1-2小时，在48仅半小时即失去感染力，100立即死亡。对寒冷抵抗力大，在0时，可生活48小时，如将梅毒病损标本置于冰箱内，经1周仍可致病。在低温（-78）保存数年，仍可保持其形态、活动及毒性在封存的生理盐水稀释的组织液中可生活10小时左右在潮湿的器具或湿毛巾中，亦可生存数小时在干燥环境中可见迅速死亡。,（五）、宿主梅毒螺旋体只感染人类人是梅毒的唯一传染源,（六）、致病性由于其表面有赖以生存的荚膜样的粘多糖，荚膜中含有的N-乙酰-D-半乳糖胺，不能自行合成，须从宿主细胞获得其粘多糖酶吸附含粘多糖的组织细胞表面的粘多糖受体上，分解宿主细胞的粘多糖、获取合成荚膜所需的物质由于粘多糖是宿主组织和血管支架的重要基质成分，粘多糖被梅毒螺旋体分解后，组织受到损伤破坏，从而引起血管的塌陷，血供受阻，造成管腔闭合性动脉内膜炎，动脉周围炎及坏死，溃疡等病变,（七）、梅毒的免疫性人类对梅毒无先天免疫性，尚无疫苗接种进行人工免疫，仅能在受感染后产生感染性免疫。已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染感染梅毒后，首先产生IgM型抗梅毒螺旋体抗体，感染2周后即可测出，早期梅毒抗梅治疗39个月后或晚期梅毒治疗2年后，大部分病人IgM可转阴性，再感染时又出现阳性，故IgM型抗体的存在是活动性梅毒的表现感染梅毒4周左右产生IgG型抗梅毒螺旋体抗体，即使经足量抗梅治疗，梅毒螺旋体抗原消失后很长时间，IgG抗体仍可通过记忆细胞的作用继续产生，甚至终生在血清中可测出,梅毒的免疫性另一种具有抗体性质的物质叫反应素（reagin），是梅毒螺旋体破坏人体组织过程中释放出的一种抗原性心磷脂刺激机体所产生的抗体。反应素一般在感染后57周（或下疳出现后23周）产生。经正规治疗后可逐渐消失胎儿在宫内感染梅毒螺旋体后，胚胎晚期（69个月）已能合成IgM型抗体，出生后第3个月开始形成IgG型抗体；IgM抗体不能通过胎盘，而IgG抗体能通过胎盘，如在患儿血清中检侧出IgM抗梅毒螺旋体抗体是诊断先天性梅毒的有力证据（但IgM阴性并不能排除先天性梅毒）,梅毒的分期,一期梅毒：主要表现为单个、无痛性的硬下疳，通常在感染梅毒螺旋体后34周出现二期梅毒：一期梅毒不经治疗，梅毒螺旋体在几周至几个月后会播散至血液中，引起二期梅毒。二期梅毒的临床表现多种多样，常见的有发热、淋巴结病、弥漫性皮疹、生殖道或会阴湿疣等。一、二期梅毒统称为早期梅毒三期或晚期梅毒：一般在最初感染的数年至十数年后发生，可累及任何器官，常见的有梅毒瘤性梅毒、心血管梅毒及神经梅毒隐性梅毒：无症状但梅毒血清学试验呈阳性。分为早期隐性梅毒（病程一年以内）和晚期隐性梅毒（病程一年以上）,暗视野显微镜检查法：主要的梅毒病原学诊断方法。是最特异的一期梅毒检测方法。取材部位以硬下疳为主，亦可从宫颈、阴道、淋巴结等处取材。阳性可确诊，阴性不能排除梅毒（须在3周内不同的3天采样检测，才能得出阴性结果）。暗视野显微镜法诊断的准确性受操作者的经验、病灶中活螺旋体的数量及口腔、肛门破损处存在的非致病性螺旋体等因素影响镀银染色法：与暗视野检查法的临床意义基本相同。利用梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶液染成棕黑色，再通过普通高倍显微镜进行观察直接免疫荧光法（DFA)：是目前国外采用较多的方法，其特异性及敏感性均优于暗视野检查法。将特异性的抗梅毒螺旋体单克隆抗体用荧光素标记，如标本中存在梅毒螺旋体，则通过抗原抗体特异性结合，在荧光显微镜下可见到发苹果绿色的梅毒螺旋体。此法可区分梅毒螺旋体和其他非致病性或条件致病性螺旋体核酸检测，敏感性较高，易出现假阴性,检测方法-梅毒螺旋体病原学检测,暗视野显微镜法直接镜检图像（1000）,间接免疫荧光法镜检图像（1000）,镀银染色,检测方法-血清学检测,根据检测所用抗原不同，临床血清试验分为两大类：1.非梅毒螺旋体抗原血清试验2.梅毒螺旋体抗原血清试验,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,性病研究实验室试验（VDRL）不加热血清反应素试验（USR）血浆反应素环状卡片试验（RPR、TRUST）,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本成分都一样,其基本成分是心磷脂、卵磷脂和胆固醇抗原抗体结合形成复合物凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见上述方法的敏感性和特异性都基本相似,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,RPR试验特点：在USR试剂成分的基础上加入黑色碳颗粒作为沉淀的指示物用白色的硬纸片替代玻片血清不需要灭活不需要显微镜观测结果可作定量试验有现成的试剂盒携带方便操作简单价格便宜,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,甲苯胺红试验(TRUST)特点：其原理和成分与RPR试验相同用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒其余的特点均与RPR相同,非梅毒螺旋体血清试验原理示意图,RPR结果,TRUST结果,检测方法非梅毒螺旋体血清试验临床意义,非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验特点,前带现象指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现象称为前带现象。,非梅毒螺旋体抗原血清试验的缺陷1、特异性：在多种疾病，如急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、肿瘤、静脉吸毒者、老年人以及怀孕妇女中均可出现反应素，所以此类试验有时会出现假阳性反应2、敏感性：感染梅毒后反应素的出现时间晚于特异性梅毒螺旋体抗体，因此非梅毒螺旋体抗原血清试验对一期梅毒的漏检率较高。RPR或TRUST有时出现弱阳性或阴性结果，而临床上又像二期梅毒，此时应将此血清稀释后做定量试验，如出现阳性结果，则为抗体过量引起的“钩状效应”，12的二期梅毒病人可出现此现象而发生假阴性反应。此外，晚期梅毒反应素转阴率高，再加上这类试验对隐性梅毒也不太敏感，因此用此类试验进行梅毒筛查时，存在着相当数量的漏检非梅毒螺旋体抗原血清试验的优点1、非梅毒螺旋体抗原血清试验阳性的患者往往是梅毒现症感染者，临床上即可开展治疗2、非梅毒螺旋体抗原血清试验表现为滴度随成功的治疗而逐渐下降，故可以作为疗效观察的指标3、此类方法价格低廉,非特异性梅毒血清学试验特点,测定非梅毒螺旋体抗原血清试验的滴度进行疗效观察1、治疗成功：早期梅毒患者在治疗后6个月内症状消失且非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度有至少4倍的下降。晚期梅毒或隐性梅毒患者在治疗后1224个月内非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度有至少4倍的下降2、治疗失败：治疗后症状持续或重新出现；治疗后非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度反而上升了4倍或以上；非梅毒螺旋体抗原血清试验初始滴度较高（1:32或以上）但在六个月内没有达到4倍的下降。抗梅毒治疗失败的病人应考虑合并HIV感染及神经梅毒的可能性3、血清固定：经正规治疗后，梅毒患者非梅毒螺旋体抗原血清试验一般都会转为阴性，但有13%的病人即使经足量抗梅治疗，非梅毒螺旋体抗原血清试验滴度仍持续呈低滴度阳性，这种现象称为血清固定，其原因尚不明了。血清固定患者的滴度重又上升则提示再次感染梅毒,非特异性梅毒血清学试验特点,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,梅毒螺旋体抗原血清试验：用梅毒螺旋体作为抗原检测血清中的抗螺旋体IgM和/或IgG抗体，梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）梅毒螺旋体明胶凝集试验（TPPA)梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）梅毒螺旋体化学发光免疫测定（TP-CLIA)梅毒螺旋体快速诊断试验（TP-RT）,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,TPPA(血清学金标准）TPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶粒子为洋红色，在操作部步上也较为方便，出结果较快。,+,Sheepredcell,T.pallidum,+,Sensitisedcell,Sensitisedcell,SpecificAntibody,Hemagglutination,TPPA/TPHA,TPPA凝集图像,检测方法-梅毒螺旋体血清试验的临床意义,作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验,其敏感性和特异性均高于非梅毒螺旋体抗原血清试验梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA试验仍可阳性，故TPPA试验阳