（海洋生物学专业论文）野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和agnors的研究.pdf

野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a g n o r s 的研究 摘要 本文以越南( 北部湾西岸) 、厦门( 九龙江口) 、霞浦( 福宁湾) 3 个野生群 体和1 个养殖群体( 东山岛) 的中华乌塘鳢为研究对象，运用p h a 一肾细胞体内 培养法、常规g i e m s a 核型分析法和a g n o r s 银染技术，对中华乌塘鳢 ( b o s t r i c h t h y ss i n e n s i s ) 的染色体核型和a g - n o r s 进行了研究，所得结果 与结论如下： 3 个野生群体和1 个养殖群体中华乌塘鳢的染色体核型公式均为：2 n = 4 6 ， 4 6 t ，n f = 4 6 ，各群体及不同性别的中华乌塘鳢染色体中均未发现次缢痕、随体或 性染色体等标志性结构。 不同地理群体及同一群体不同性别的中华乌塘鳢的中期分裂相a g - n o r s 存 在一定多态性，表现在a g n o r s 的大小、数目和位置位点3 方面。位于同源染色 体或非同源染色体的中期分裂相a g - n o r s 有等大和不等大2 种情况。4 个群体中 期分裂相a g n o r s 数目的平均值接近2 ，各群体之间无显著差异( p o 0 5 ) ，但 不同群体以及同一群体不同性别的中期分裂相a g - n o r s 数目的最大值存在差异。 按照表型可以将中华乌塘鳢中期分裂相a g - n o r s 分为4 种类型：i 具有1 对位 于臂端的a g n o r s ，其位置出现在最大1 对染色体、较大1 对染色体或较小1 对 染色体；i i 具有1 对位于着丝粒端的a g - n o r s ，其位置出现在最大1 对染色体 或较大l 对染色体；u 1 具有2 对位于臂端的a g - n o r s ，其位置出现在最大l 对 和较大l 对染色体、最大l 对和较小1 对染色体、较大1 对和较小1 对染色体； 具有2 对位于着丝粒端的a g n o r s ，其位置出现在最大l 对和较小1 对染色 体。 在养殖中华乌塘鳢雌雄同体个体的中期分裂相中发现了1 种特殊的a g - n o r s 表型，即在较小1 条染色体上出现全臂a g - n o r s 。这种全臂a g - n o r s 是首次发现。 野生和养殖群体中华乌塘鳢的间期核中，不同群体及不同性别个体的核仁数 目最多均为4 个，具有2 个核仁的间期核数量最多，不同群体之间的间期核核仁 平均数有些差异，而同一群体中不同性别之间则差别不大或相同。 关键词：中华乌塘鳢；染色体核型；a g - n o r s v 野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a g n o r s 的研究 a b s t r a c t i nt h i sp a p e r , t h ek a r y o t y p ea n db a n d i n gp a t t e r no f b o t hw i l da n dc u l t u r e dc h i n e s e b l a c ks l e e p e r s ( b o s t r i c h t h y ss i n e n s i s ) w e r es t u d i e du s i n gt h em e t h o d so f g i e m s a s t a i n i n ga n da g - n o r st e c h n i q u e s t h ew i l dc h i n e s eb l a c ks l e e p e r sw e r e o b t a i n e df i o mt h ew e s tc o a s to fb e i b ub a y , j i u l o n gr i v e re s t u a r ya n df u r r i n gb a y t h e c u l t u r e dc h i n e s eb l a c ks l e e p e r sw e r ec a u g h tf r o md o n g s h a ni s l a n d t h em a i nr e s u l t s a n dc o n c l u s i o n sa r ea sf o l l o w s ： t h et h r e ew i l dp o p u l a t i o n sa n do n ec u l t u r e dp o p u l a t i o ns a m p l e sp r e s e n t e d u n i f o r md i p l o i dn u m b e r s ( 2 n = 4 6 ) a n dt h es a m ek a r y o t y p i cf o r m u l a e ：2 n = 4 6 ，4 6 t ， n f = 4 6 n o tc h a r a c t e r i s t i cf e a t u r e s ，s u c ha ss e c o n d a r yc o n s t r i c t i o n ，s a t e l l i t e so rs e x c h r o m o s o m e sw e r eo b s e r v e di na l ls a m p l e si n c l u d i n gw i l da n dc u l t u r e dp o p u l a t i o n s p o l y m o r p h i s m sw e r ef o u n di nt h ed i v i s i o np h a s e sa g - n o r si nc h i n e s eb l a c k s l e e p e ro fd i f f e r e n tp o p u l a t i o n sa n dd i f f e r e n ts e x e s ，i n c l u d i n gt h es i z e s ，n u m b e r sa n d p o s i t i o n s t h ea g - n o r sl o c a t e d i n h o m o l o g o u s c h r o m o s o m e so rb e t w e e n h o m o l o g o u sc h r o m o s o m e sc o u l db et h es a m eo rd i f f e r e n ti ns i z e s t h e r ew e r en o s i g n i f i c a n td i f f e r e n c e si nt h ea g - n o r sn u m b e ro fd i v i s i o np h a s e sb e t w e e ne a c ht w o p o p u l a t i o n s 俨 o 0 5 ) ，b u tt h e r ee x i s t e ds o m ed i f f e r e n c e si nt h em a x i m u mn u m b e ro f a g - n o r sb e t w e e nd i f f e r e n tp o p u l a t i o n sa n ds e x e s f o u rk i n do fd i v i s i o np h a s e so f a g - n o r sc o u l db ec l a s s i f i c a t e da c c o r d i n gt ot l l e i rp h e n o t y p e s ：i o n ep a i r o f a g - n o r se x i s t e di nt h et e r m i n a lo fo n ep a i ro fc h r o m o s o m e s ，w h i c hc o u l db ei nt h e b i g g e s to n e so rt h eb i g g e ro n e so rt h es m a l l e ro n e s ；i i o n ep a i ro fa g - n o r s e x i s t e d i nt h ec e n t r o m e r eo fo n e p a i ro ft h eb i g g e s tc h r o m o s o m e so rt h eb i g g e rc h r o m o s o m e s ； t w op a i ro fa g - n o r se x i s t e di nt h et e r m i n a lo ft w op a i ro fc h r o m o s o m e s ，t h e a g - n o r sc o u l db eo nt h eb i g g e s tp a i ra n dt h eb i g g e rp 础t h eb i g g e s tp a i ra n dt h e s m a l l e rp a i r , a n dt h eb i g g e rp a i ra n dt h es m a l l e rp a i r ；i v t w op a i ro fa g n o r s e x i s t e di nt h ee e n t r o m e r eo ft h eb i g g e s tp a i ra n das m a l l e rp a i ro fc h r o m o s o m e s as p e c i a lp h e n o t y p eo fd i v i s i o n p h a s e sa g - n o r sw a so b s e r v e di n c u l t u r e d h e r m a p h r o d i t e ，w h i c hi sd i s t r i b u t e di nw h o l ea r n lo fas m a l l e rc h r o m o s o m e t h i s s p e c i a lw h o l ea r ma g - n o r sw a sr e p o r t e df i r s ti nt h ep r e s e n ts t u d y v i 野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a g - n o r s 的研究 t h em a x i m u mn u m b e = 1 - o fn u c l e o l u si ni n t e r p h a s en u c l e u so fb o t h w i l da n d c u l t u r e dc h i n e s eb l a c ks l e e p e rw a s4 ，m o s to ft h ei n t e r p h a s en u c l e u s e sh a d2n u c l e o l i t h em e a nd i f f e r e n c eo fn o r sn u m b e r se x i s t e db e t w e e ne a c ht w op o p u l a t i o n s ，b u tt h e m e a nn 啪b e r so fo fn u c l e o l u sw e r ea l m o s tt h es a m eb e t w e e nd i f f e r e n ts e x e si na p o p u l a t i o n k e yw o r d s ：b o s t r i c h t h y ss i n e n s i s ；c h r o m o s o m a lk a r y o t y p e s ；a g - n o r s v 厦门大学学位论文原创性声明 兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立完成的研究成果。本人在论文 写作中参考的其他个人或集体的研究成果，均在文中以明确方式标明。本人依法 享有和承担由此论文产生的权利和责任。 獗旧 戈汐揶_ ： 月名莎签年 0嚼 人 队沙 声 厦门大学学位论文著作权使用声明 本人完全了解厦门大学有关保留、使用学位论文的规定。厦门大学有权保留 并向国家主管部门或其指定机构送交论文的纸质版和电子版，有权将学位论文用 于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的 内容编入有关数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘要汇编出版。保密的 学位论文在解密后适用本规定。 本学位论文属于 1 保密( ) ，在年解密后适用本授权书。 2 不保密( ) ( 请在以上相应括号内打“ ) 作者签名：戍微日期：沙孑年g 月 日 导师签名：蜊日期：加肛6 月如日 野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a g n o r s 的研究 前言 鱼类在脊索动物门中是最为低等的脊椎动物类群，同时也是世界上分布最 广、种类最多、最为丰富的脊椎动物类群。全世界共有鱼类2 4 6 1 8 种，隶属于 5 7 个目4 8 2 科4 2 5 8 属，占脊椎动物种类总数的一半以上，其中海水鱼类约为 1 3 0 0 0 种【1 1 。鱼类在脊椎动物进化中处于承先启后的地位，有着长久的进化历史 和繁多的演化分枝。鱼类在进化过程中表现出各种趋同性、趋异性和保守性，变 化纷繁，物种进化异常活跃。鱼类不仅具有重大的经济价值，而且还具有多种多 样的生物学特性，例如鱼类在性别决定中具有多种表现形式，有些鱼类为雌雄同 体，有些鱼类则具有性逆转现象。在染色体水平，鱼类具有多种多样的染色体性 别决定机制，许多鱼类没有特定的性染色体，控制性别的基因分散在常染色体上 【2 】；一些鱼类具有性染色体，且有多种表现形式，如x x x y ，z z z w ， x 1 x l x 2 x 2 ) ( 1 x 2 y ，x x x y l y 2 和z 批乙w l w 2 等都有报道【3 1 。可见，许多鱼类可为 物种的发生与进化、近缘种的鉴定、性染色体的发生等问题的研究提供大量多种 多样且具有相应生物学特性的优质研究材料，因此对鱼类进行系统的研究具有重 要的理论意义。 中华乌塘鳢( b o s t r i c h t h y ss i n e n s i s ) 隶属于鲈形目( p e r c i f o r m e s ) ，缎虎鱼亚目 ( g o b i o i d e i ) ，塘鳢科( e l e o t r i d a e ) ，乌塘鳢属( b o s t r i c h t h y s ) 。分布于印度洋北部 沿岸，东至太平洋美拉尼西亚和波利尼西亚，北至日本，南至印尼。在我国产于 南海、北部湾、台湾海峡和东海。中华乌塘鳢为凶猛性肉食性鱼类，幼鱼和成鱼 摄食虾类、蟹类等底栖无脊椎动物和其它小型鱼类【4 】。中华乌塘鳢肉质细腻、味 道鲜美、营养丰富、具有药用价值，且具有生命力强、生长快、易饲养等特点， 是一种优良的养殖种类。 染色体是生物遗传物质的主要载体，染色体的数目、形态、减数分裂过程的 行为状态以及染色体带型特点都具有种特异性，而且记载了生物进化的历史。遗 传物质许多微小变异的积累就可能引起物种的分化，并影响到与进化有关的许多 过程。而染色体的畸变、重组和染色体数目的改变牵涉到大量的基因，因此染色 体水平上的变异可能会导致生物形态和生物学特性的变异，甚至是成种事件的发 生。通过对鱼类染色体的研究不仅能了解生物的遗传组成、遗传变异规律和发育 野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a g n o r s 的研究 机制，而且有助于近缘物种的鉴定和系统进化等有关问题的研究，同时对种间杂 交和多倍体育种结果的鉴定等诸多问题都具有重要的意义。考察鱼类染色体，对 于研究鱼类的遗传、变异、分类、系统演化、性别决定、杂交育种以及对于环境 污染的监测等都具有重要意义。 目前国内外有关中华乌塘鳢的研究主要集中在人工繁殖和种苗培育、早期发 育、幼体实验生态、成鱼养殖技术、精子的低温冷冻保存、雌雄同体以及性信息 素诱导产卵等方面【5 1 1 1 。国内外有关中华乌塘鳢核型特征的研究只有极少数的报 道，且均为核型分析【1 2 d 4 】，而利用染色体显带技术对中华乌塘鳢染色体的核型特 征研究的还未见报道。综合利用多种技术方法对中华乌塘鳢的染色体核型特征进 行描述及比较研究，了解其遗传组成，可为系统进化及不同地理群体染色体变异 进化提供基础资料和理论依据。本文以中华鸟塘鳢3 个野生地理群体及1 个养殖 群体为对象，侧重研究了其染色体核型和a g n o r s 特征，并结合已有的其他地 理群体野生中华乌塘鳢的染色体研究结果，分析其系统进化和性别差异等有关问 题。 2 野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a g n o r s 的研究 第一章文献综述 1 鱼类染色体核型研究进展 鱼类的核型研究，不仅对于鱼类分类和系统演化的探讨具有不可忽视的作 用，而且对于鱼类的遗传、变异和杂交育种等方面的研究，无论在理论上或是实 际应用上都具有重要意义【1 5 】。 。 鱼类染色体个体较小，数目偏多，研究工作的难度较大，早期由于方法上的 限制进展缓慢。虽然早在2 0 世纪初就有鱼类染色体数目的报道，但直到1 9 6 6 年o j i m a 等首次采用空气干燥法成功地研究了鱼类的染色体核型后，鱼类染色体 的研究才得到较快的发展，秋水仙素活体注射方法在鱼类染色体研究中也日益普 及【1 5 1 。1 9 世纪7 0 年代初，细胞培养技术用于鱼类，先后建立了鱼类的外周血短 期培养、上皮细胞培养和肾细胞p h a 短期培养等方法，提高了鱼类染色体分析 的精确度和可靠性。迄今为止，世界上进行过细胞遗传学分析的鱼类已经超过 1 7 0 0 种【16 】，但还不到鱼类总数的1 0 ，且在所研究的鱼类中，大多数为淡水鱼 类，已做过核型研究的海水鱼类约6 0 0 余种【1 7 1 。 1 9 世纪7 0 年代初，国内开始进行鱼类染色体的研究。1 9 7 5 年长江水产研究 所和武汉大学最先报道用压片法观察了几种经济鱼类的染色体数引1 8 】。随后， 咎瑞光等采用低渗空气干燥法制备胚胎细胞染色体标本【1 9 1 。2 0 世纪8 0 年代初， 刘凌云、吴政安、周暾等同时采用外周血培养或肾细胞p h a 短期培养方法制备 鱼类染色体【2 0 。2 2 】。此后，肾细胞p h a 活体注射，白细胞p h a 活体培养等方法 相继用于鱼类染色体标本制备，使鱼类染色体研究得到了迅速发展【2 3 2 4 1 。据不 完全统计，到2 0 0 6 年底，我国报道已研究过染色体的淡水鱼类为3 0 0 余种，约 为我国淡水鱼种类总数的3 0 0 。我国海水鱼类的染色体核型研究起步较晚，1 9 8 7 年才有报道。据不完全统计，到2 0 0 8 年初国内已研究过的海水鱼类共8 目2 6 科约8 2 种，不到我国海洋鱼类总数的3 ( 见表1 ) 。 3 野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a g - n o r s 的研究 表i i 我国海水鱼类染色体核型 t a b l e1 1k a r y o t y p e so fm a r i n ef i s h e sr e p o r t e di nc h i n a 种类2 n 核型公式 文献 鲱 鲱科青鳞小沙丁鱼s a r d i n e l l az u n a s i4 84 8 t 【2 5 】 形 目 斑鲦c l u p a n o d o np u n c t a t u s 4 82 m + 4 6 t 【2 5 】 鳗 康吉鳗科 星康吉鳗c l n g e rm y r i a s t e r 3 88 m + 1 0 s t n + 2 0 t 2 6 鲡 3 81 4 m + 4 s r n + 2 0 t 【2 7 】 目 海鳝科 匀斑裸胸鳝g y m n o t h o r a x 聊c 嚣f4 23 4 m ，s m + 8 t 【2 8 】 海鳗m u r a e n e s o xc i n e r e u s3 81 2 瑚十4 s i n + 6 s t + l6 t 2 9 鲻 鲻科 鲻鱼m u g i lc e p h a l u s 4 84 8 t 2 6 ，3 0 形 目 梭鱼l i z ah a e m a t o c h e i l a4 84 8 t 3 q 鲈 鳍科花鲈l a t e o l a b r a xj a p o n i c u s4 84 8 t 【2 5 ，2 6 形 褐点石斑鱼e p i n e p h e l u sf u s c o g u t t a t u s 4 82 鲫+ 4 6 t 【3 2 目 赤点石斑鱼e a k a a r a4 8 5 s t + 4 3 t 【3 3 】 斑带石斑鱼e f a s c i a t o m a c u l o s u s 4 84 8 t 【3 4 】 黑边石斑鱼e f a s c i a t u s 4 84 8 t 【3 4 4 84 8 t 【3 5 点带石斑鱼em a l a b a n c u s4 84 8 t 【3 5 4 84 8 t 【3 6 六带石斑鱼es e x f a s c t u s4 82 s m + 4 6 t 【3 刀 鲑点石斑鱼e y 缸r i o 4 84 i n + 6 s i n + 4 s t + 3 4 s t 【3 5 】 4 8 1 4 m ，s m + 3 4 s t , t【3 8 】 青石斑鱼ea w o a r a4 84 8 t 【3 9 蜂巢石斑鱼em e r r a 4 84 m + 6 s m + 4 s t + 3 4 s t 【3 5 】 云纹石斑e m o a r a4 84 8 t 【4 0 】 斜带石斑ec o i o i d e s 4 82 s m + 4 6 t 【4 1 】 宽额鲈p r o m i c r o p sk a b c e i k a t y s 4 84 s t + 4 4 t 【4 2 石首鱼科皮i 毛n t t 姑鱼j o h n i u sb e l e n g e r i 4 84 8 t 2 5 】 黄姑鱼n i b e aa l b i f l o r a 4 84 8 t 【2 5 ，2 6 小黄鱼p s e u d o s c i a e n a p o l y a c t i s 4 8 4 8 t 【2 5 】 美国红鱼s c i a e n o p so c e l l a t u s 4 84 8 t 【4 3 双棘黄姑鱼n i b e ad i a c a n t h u s 4 84 8 t 【4 4 娩状黄姑鱼m i i c h t h e o i d e s4 8 4 8 t 【4 5 大黄鱼p s e u d o s c i a e n ac r o c e a 4 82 s t + 4 6 t 【4 6 】 4 野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a g - n o r s 的研究 4 84 8 t 【4 7 】 4 8 6 s t + 4 2 t ( 闽粤东)【4 8 1 6 m + 6 s m + 3 6 t ( 岱镭) 笛鲷科红鳍笛鲷l u t i a n u se r y t h o p t e r u s4 84 8 t 【4 9 】 紫红笛鲷l u t i a n u sa r g e n t i m a c u l a t u s4 84 8 t 【4 9 】 白斑笛鲷l u t i a n u sb o h a r4 84 8 t 【4 9 约氏笛鲷l u t j a n u s j o h n i 4 84 8 t 5 0 1 勒氏笛鲷厶r u s s e l l ib l e e k e r4 84 8 t 【5 0 画眉笛鲷缸和删sv i t t a 4 84 8 t 5 0 】 鲷科 真鲷p a g r o s m u sm a j o r 4 82 s t + 4 6 t 【5 l 】 黑鲷s p a r u sm a c r o c e p h a l u s 4 84 m + 4 s m + 2 s t + 3 8 t 【5 2 1 6 m + 4 s m + 3 8 t 【5 1 】 黄鳍鲷s l a n u s4 84 m + 2 s m + 4 s 什3 8 t 5 3 1 裸颊鲷科星斑裸颊鲷l e t h r i n u sn e b u l o s u s4 84 8 t 【5 4 】 石鲈科花尾胡椒鲷p l e c t o r h i n c h u sc i n c t u s4 64 6 t 5 5 1 4 84 8 t 5 6 】 胡椒鲷p l e c t r o r h i n c h u s p i c t u s 4 84 8 t 【5 7 】 横带髭鲷h a p a l o g e n y sm u c r o n a t u s 4 82 m 广卜8 s m + 1 4 s t + 2 4 t 5 8 1 斜带髭鲷hn i e n s4 82 m + 8 s m + 2 s t + 3 6 t 5 8 】 锦鲥科云鲥e n c d r i a sn e l m l o s u s2 62 6 m 5 9 1 绵鲥z o a r c e se l o n g a t e sl “盯4 83 0 m + l4 s m + 4 t 【6 0 】 线鲥科鸡冠鳙a l e c t r i a sb e n j a m i n i4 818 加r 卜l5 s m + 1 2 t 【6 1 】 六线蝌e m o 耵a m m u sh e x a g r a m m u s 4 84 8 t 【6 2 】 短颌小绵鲥z o a r c h i a sm i c r o s t o m u s2 82 4 m + 4 t 【6 0 】 缝鲥a z u m ae m m n i o n 5 66 m + l o s n l + 4 0 t 6 0 金枪鱼科长鳍金枪鱼t h u n n u sa l a l u n g a4 8 6 m ，s m + 4 2 s t , t 6 3 1 黄鲳金枪鱼zl a l b a c a r e s4 8 6 m , s m + 4 2 s t , t【6 2 鲣k a t s u w o n u sp e l a n i s4 8 4 8 s t , t 6 3 塘鳢科 中华乌塘鳢b o s t r i c h t h y ss i n e n s i s 4 64 6 t 1 2 4 8 4 s m + 2 s t + 4 2 t 【1 3 】 弹涂鱼科 大弹涂鱼b o l e o p h t h a l m u s p e c t i n i m t r i s 4 62 s t + 4 4 t 【1 3 1 锻虎鱼科纹缟鳜虎鱼t r i d e n t i n e rt r i g o n c e p h a l u s“10 m + 2 8 锄+ 2 s t + 4 t 【1 3 】 4 42 0 m + 1 2 s 件1 2 t 【6 4 竿鲤虎鱼l u c i o g o b i u sg u t t a t u s 4 41 4 m + 1 4 锄l + 16 t 【1 3 】 矛尾嘏虎鱼s y n e c h o g o b i u so l i v a c e u s 4 4 2 m + 4 2 s t 、t 【2 6 1 5 野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a i g n o r s 的研究 黄鳍剌缎虎鱼a c a n t h o g o b i u s f l a v i m a n u s 4 44 4 t 2 5 】 短颌小绵鲥z o a r c h i a sm i c r o s t o m u s 2 82 4 m + 4 t 【6 0 项斑舌缎虎鱼g l o s s o g o b i u so l i c a c e l 船 4 616 s m + 6 s t + 2 4 t 【1 3 】 尾纹裸头锻虎鱼c h a e n o g o b i u sa n n u l a n s 4 4 2 0 m 一- 2 2 s t + 2 t 6 5 斑尾复鼹虎鱼so m m a t l i r u 8r 4 42 m 十2 s m + 4 s t + 3 4 t + x y 6 6 项斑锻虎鱼gf a s c i a t o p u n c t a t u s4 61 6 s r n + 6 s t + 2 4 t 1 3 】 红狼牙缎虎o d o n t a m b l y o p u sr a b i c u n d u s 3 8 2 0 m + l8 s m 【6 0 军营鱼科 军曹鱼r a c h y c e n t r o nc a n a d u m 4 84 8 t 6 7 纳 鲇科许氏平纳s e b a s t e ss c h l e g e l i4 82 m + 4 6 t 6 8 形 4 82 瑚r 卜2 s m + 4 4 t 【6 9 目 褐菖蚰s e b a s t e sm a r m o r a t u s4 82 m + 4 6 t 7 0 铠平纳& h u b b s i 4 83 m + 2 s t + 4 3 t ( 雌) 【7 1 黑平纳( 黑鲳) sn i g r i c a n s4 8 2 i n + 4 6 t 【7 2 1 鲡科 鲡p l a t y c e p h m u si n d i c u s 4 82 i n + 8 s i n + 2 s t + 3 6 t 【7 3 六线鱼科 欧氏六线鱼h e x a g r a m m u s o t a k i i4 86 m + 8 s m + 12 s 什2 2 t 【6 9 4 86 m + 2 0 s m + 1 6 s t + 6 t 【6 8 斑头鱼a g r a m m u sa g r a m m u s 4 8 8 m + 3 2 s m + 8 s t ( 雌1【7 4 7 m + 3 3 s m + 8 s t ( 雄1 杜父鱼科 绒杜父鱼h e m i t n p t e r u sv i l l o s u s 4 62 0 m + 1 6 锄+ lo t 【6 0 鲽 牙鲆科 牙鲆p a r a l i c h u h y so l i v a c e u s 4 8 4 8 t 【7 5 】 形 桂皮斑鲆p s e u d o r h o m b u sc i n n a m o m e u s4 84 8 t 2 6 目 鲽科 木叶鲽p l e u r o n i c h t h y sc o r n u t u 8 4 8 12 m r 卜2 s i n + 3 4 t 【2 6 黄盖鲽p y o k o h a m a e 4 84 8 t 2 6 石鲽k a r e i u sb i c o l o r a t u s 4 84 8 t 【2 6 油鲽m i c r o s t o m u sa c h n e4 84 8 t 2 6 舌鳎科 半滑舌鳎c v n o g l o s s u ss e m i l a e v i s 4 24 2 t 【7 6 革钝科 丝背细鳞童屯s e p h a n o l p i sc i r r h i f e r 3 3l l n + 3 2 t 【7 0 纯 绿鳍马面喜屯n a v o d o ns e p t e n t r i o n a l i s 4 04 0 t 【7 7 形 壹屯科 红鲡东方纯f u g ur u b i p e s 4 41 2 m + 6 s m + 2 6 t 【7 7 目 4 4 2 0 m , s m + 2 4 s t ，t 2 6 】 暗纹东方喜屯t a k i f u g u o b s c u r u s4 44 4 t 【7 8 】 国内研究过染色体的3 0 1 种鱼类中，染色体数目变化幅度较大。染色体数目 最少的是鲶形目钝头虢科的白缘( 鱼央) ( l e i o b a g r u sm a r g i n a t u s ) 和合鳃目合鳃 6 野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a g n o r s 的研究 科的黄鳝( m o n o p t e r u sa l b u s ) ，均为2 n = 2 4 ，其次是鲈形目锦鲥科的云鲥( e n e d r i a s n e b u l o s u s ) ，2 n = 2 6 ；染色体数最多的是鲤形科裂腹鱼亚科的双须重唇鱼 ( d i p o , c h t t s d i p o g o n ) ，2 n - - - 4 4 6 ，其次是鲟形目科的中华鲟( a c i p e n s e r s i n e n s i s ) ， 2 n = 2 6 4 。尽管鱼类的染色体数目变异很大，但多数在2 n = 4 0 6 0 的范围内，尤以 2 n = 4 8 或2 n = 5 0 的鱼类为最多，占总数的6 1 8 7 9 - 8 1 】。 2 鱼类染色体a g - n o r s 研究进展 2 0 世纪6 0 年代末兴起的染色体显带这一细胞学技术，是通过对染色体标本 进行酸、碱、酶等处理，并用特定的染料染色后，使染色体在其长轴上显示出一 条条明暗交替或深浅不同的横纹，这些横纹即为染色体的带。每条染色体都显示 出不同的特定带纹，其带纹的数目、位置、宽窄与深浅具有相对的稳定性，因此 是一种用来描述染色体形态及特征的有效方法。由于显带方法多种多样，各种方 法所显示的带纹揭示的内容不尽相同，既可以揭示染色体在成分和结构上的差 别，同时也可以对染色体的行为和功能等方面进行检测。因此，染色体显带技术 在细胞学、遗传学、细胞分类学、染色体工程、遗传育种等基础理论和应用科学 方面都有广泛应用。 在脊椎动物中，与哺乳动物染色体相比，鱼类染色体长度较短，染色体数目 偏多，染色体组组成中绝大多数染色体为端部着丝粒染色体，并且大小差异较小， 呈连续性分布。哺乳类染色体研究中的各种卓有成效的显带技术，只有c 带和 a g - n o r s 带技术在鱼类染色体的研究中得到较广泛应用外，其它显带技术研究 进展缓慢。因此国内外在常规的鱼类染色体研究上仍偏重于核型分析，以及c 带和a g - n o r s 分析。 银染法是由g o o d p a s t u t e 和b l o o m 首创的核仁组织区( n u c l e o l u so r g a n i z i n g r e g i o n s ，n o r s ) 的染色方法【8 2 1 可特异地将核仁组织区染成黑色，银染阳性的核 仁组织区称为a g - n o r s 。a g - n o r s 是基因组中1 8 s r r n a 和2 8 s r r n a 所在且具 有转录活性的r r n a 基因位点。具有转录活性的r r n a 基因部分有丰富的酸性蛋 白，或者已转录过的r r n a 基因上仍有参与的酸性蛋白，它们易被银染着色， a g + 被还原为a g 颗粒而呈现黑色，没有转录活性的r r n a 基因部分则不着色。 a g - n o r s 的r r n a 基因活性不同，转录出的r r n a 的数量有多有少，结合的酸 7 野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a g - n o r s 的研究 性蛋白质量也不同，导致银染区大小不一。a g - n o r s 转录活性越强则银染越强， 染色面积越大。种间a g n o 黜绝对数目及其在染色体上的分布模式不同，是一 种种特异性标记【8 3 5 1 。种内不同种群间或群体间a g - n o r s 的大小和数目不同， 又是一种可用于遗传结构分析的遗传标记【8 每8 8 1 。因此，自创建以来，a g n o r s 法已被广泛地应用于动植物染色体研究中，获得了可靠的结果，并以此作为研究 物种间的亲缘关系和染色体进化的一个指标【8 9 - 9 2 。另外a g o n o r s 多态性也可以 作为核型进化的指标来探讨近缘物种间或物种内不同地理种群间关系【9 3 1 。 自从1 9 7 7 年k l i n g e r m a n 等最早对鱼类的a 乎n o 黜进行研究以来【9 4 1 ，银染 已在鱼类染色体研究中得到了广泛的应用。如1 9 9 0 年a m e m i y a 和g o l d 等就分 析了5 0 种北美鲤科鱼a g - n o r s 的变异【9 5 】；任修海等也在1 9 9 6 对我国3 6 种鲤 科鱼类的核仁组织区进行了比较分析【8 4 1 。但是我国海水鱼类的a p n o 黜的研究 报道较少，到现在仅对7 个种类进行了研究，仅占已研究核型的海水鱼类的8 9 ，它们包括斑带石斑鱼e p e n i p h e l u s f a s c i a t o m a c u l o s u s 【3 4 】、黑边石斑鱼e f a s c i a t u s 3 4 1 、鲡p l a t y c e p h a l u si n d i c u s 【7 3 】、真鲷p a g r o s o m u sm a j o rt 5 2 1 、黑鲷s p a r u s m a c r o c e p h a l u s 【5 2 1 、点带石斑鱼em a l a b a r i c u s1 3 6 和半滑舌鳎c y n o g l o s s u s s 仑m i l a e v i s 【9 6 1 。 2 1 酬o r s 在鱼类系统进化研究中的应用 不同物种间a g - n o r s 在染色体上的绝对数目和在染色体上的位置不同。一 些物种二倍体中期分裂相中仅能检测到1 个a g - n o r s ，如黑斑原姚 ( g l y p t o s t e r n u mm a c u l a t u m ) ，其a g - n o r s 为单倍性，也就是说在其二倍体基因 组中，仅有1 个a g - n o r s t 9 7 】；而一些物种则有多达十几对，多数为2 - 4 个。 a g - n o r s 可以作为一种较好的种特异性标记来区分物种，同时染色体 a g - n o r s 变异与物种分化相关，因此可以用来对生物的系统进化进行研究。 早在1 9 9 0 年，a m e m i y a 和g o l d 等系统分析了北美鲤科5 0 种鱼类a g o n o r s 的变异【9 5 】。任修海等也于1 9 9 6 年对中国已研究过核仁组织区的3 6 种鲤科鱼类 进行研究【洲，并与a m e m i y a 对北美鲤科鱼类的研究结果进行比较。比较后认为： 中国鲤科鱼类大多数具有较特化的a g - n o r s 表型，a g - n o r s 变异远较北美鲤科 鱼类剧烈；染色体a g - n o r s 变异与物种分化相关，全面系统的a g - n o r s 分析 野生和养殖中华乌塘鳢染色体核型和a g n o r s 的研究 可用于探讨鱼类的起源与演化；a g - n o r s 具有十分清楚的生理功能，可在细胞 水平上观察，是研究染色体进化与基因结构与进化、调控的良好模型。常重杰等 于1 9 9 7 年对鲤科鱼类7 种鲐亚科鱼类的a g n o r s 进行了比较研究，发现鲐亚科 鱼类在进化过程中，a g n o r s 数目有增加的趋势【9 8 1 。 2 2a 酬o r s 在鱼类群体遗传结构研究中的应用 a g - n o r s 在种内具有多态性，也就是种内不同个体间，其a g - n o r s 具有大 小和数目的变化。在一些物种中，这种多态性表现在不同群体间。因此可以用来 研究群体遗传结构。 s o l a 等( 2 0 0 0 ) 对3 个采样地点：s a r d i n i a ，c e n t r a lt h y r r e n i a ns e a ( s e m ) 、 s o u t ht h y r r e n i a ns e a ( m e m ) 和a f r i c a nc o n t i n e n t a ls h e l f , m e d i t e r r a n e a ns e a ( l e m ) 的东大西洋石斑鱼( em a r g i a n t u s ) 的染色体核型特征进行了研究，发现3 地的 东大西洋石斑鱼a g - n o r s 在数目上存在差异【8 8 】。3 个群体在第2 4 对染色体上都 具有1 对a g - n o r s ，但是在s e m 群体，在第2 对染色体的端粒位置还有1 对 a g - n o r s ，也就是该群体具有2 对a g - n o r s 。f e r r o 等于2 0 0 1 年对粗鳍丽脂鲤 a s o , a n a xa c a b r i p i n n i s 的核型特征进行了研究，并与以前的研究结果进行比较分 析，发现其a g - n o r s 数量与样品采集地点的海拔高度具有一定的关系【蚓。来自 于海拔1 8 0 0 m 和1 9 2 0 m 的样品，仅有1 对a g - n o r s ，而来自于海拔7 0 0 m 的样 品，其a g - n o r s 则可多达9 个，样品采集地点海拔高度在上述二者之间的，其 a g - n o r s 数量为2 9 个。 2 3c i l a - n o r s 与 酬o r s 的联