（参考课件）梅毒的实验室诊断.ppt

梅毒的实验室诊断,1,一、概述-梅毒病原体,（一）、名词由梅毒螺旋体感染引起的一种慢性全身性性传播疾病是我国卫生部规定的8种重点防治性病之一中华人民共和国传染病防治法规定的乙类传染病世界卫生组织列为世界上最常见的50种传染病之一梅毒螺旋体（Treponemapallidum，TP）是梅毒的病原体，因其透明，不易着色，故又称苍白螺旋体,2,（二）、生物学特性小而纤细的螺旋状微生物长520m，粗细0.2m有612个规则的螺旋基本结构为一原生质的圆柱体，为两层膜所围绕行动缓慢而有规律-围绕其长轴旋转中前后移动-伸缩其圈间之距离而移动-全身弯曲如蛇行,3,（三）、繁殖繁殖方式与其生活环境有关近年来电子显微镜观察，在培养条件下或在体内适宜环境中为横断分裂，分裂时将躯干分裂成长短两段分裂增代时间为3033小时当条件不利时，以分芽子繁殖生活发育周期:颗粒期、球形体期及螺旋体期，与所致疾病周期、隐伏发作及慢性病程有关,4,（四）、培养一般不能人工培养Nichols株（有毒株）能接种在家兔睾丸中或眼前房内繁殖，能保持毒力转种至加有多种氨基酸的兔睾丸组织碎片的特殊培养基中，25厌氧环境下能使螺旋体保持运动能力4-7天1981年Fieldsteel等采用棉尾兔单层上皮细胞在1.5%氧的大气环境进行培养，经9-12天孵育后，螺旋体数比接种数平均增加49倍，对兔仍保持毒力Reiter株能生长繁殖，已丧失致病力Nichols株和Reiter株已广泛用作多种梅毒血清学的诊断抗原,5,(五）、生存条件厌氧寄生物，在人体内可长期生存，体外不易生存干燥、肥皂水及一般消毒剂如1：1000苯酚、新洁尔灭、稀酒精均可于短时间将其杀死在血液中4经3日可死亡，故在血库冰箱冷藏3日以上的血液就无传染性温度的影响：41-42时可生活1-2小时，在48仅半小时即失去感染力，100立即死亡。对寒冷抵抗力大，在0时，可生活48小时，如将梅毒病损标本置于冰箱内，经1周仍可致病。在低温（-78）保存数年，仍可保持其形态、活动及毒性在封存的生理盐水稀释的组织液中可生活10小时左右在潮湿的器具或湿毛巾中，亦可生存数小时在干燥环境中可见迅速死亡。,6,（六）、宿主梅毒螺旋体只感染人类人是梅毒的唯一传染源,7,（七）、毒力因子目前未证明具有内毒素或外毒素粘多糖和粘多糖酶是其主要毒力因子荚膜样的粘多糖能保护菌体免受环境中不良因素的伤害，在体内可阻止大分子物质（如抗体）穿透，从而保护菌体，还有抗吞噬作用粘多糖酶与对组织细胞的吸附，对组织基质的分解和荚膜的合成有密切关系,8,（八）、致病性由于其表面有赖以生存的荚膜样的粘多糖，荚膜中含有的N-乙酰-D-半乳糖胺，不能自行合成，须从宿主细胞获得其粘多糖酶吸附含粘多糖的组织细胞表面的粘多糖受体上，分解宿主细胞的粘多糖、获取合成荚膜所需的物质由于粘多糖是宿主组织和血管支架的重要基质成分，粘多糖被梅毒螺旋体分解后，组织受到损伤破坏，从而引起血管的塌陷，血供受阻，造成管腔闭合性动脉内膜炎，动脉周围炎及坏死，溃疡等病变,9,（九）、抗原1表面特异性抗原：刺激机体产生特异凝集抗体及密螺旋体制动或溶解抗体，后者加补体可溶解螺旋体2螺旋体内类属抗原：可产生补体结合抗体，与非病原性螺旋体有交叉反应3，螺旋体与宿主组织磷脂形成的复合抗原：当螺旋体侵入组织后，组织中的磷脂可粘附在螺旋体上，形成复合抗原，此种复合抗原可刺激机体产生抗磷脂的自身免疫抗体，称为反应素（Aegagin），可与牛心肌或其他正常动物心肌提取的类脂质抗原起沉淀反应（康氏试验）或补体结合反应（华氏试验）,10,(十）、免疫以细胞免疫为主，体液免疫只有一定的辅助防御作用当螺旋体从体内清除后可再感染，而且仍可出现一期梅毒症状此病周期性潜伏与再发的原因可能与体内产生的免疫力有关机体免疫力强，螺旋体能变成颗粒形或球形，在体内一些部位潜伏起来，一旦机体免疫力下降，螺旋体又可侵犯体内某些部位而复发。,11,二、检测方法-病原体检查,梅毒螺旋体检查是诊断早期梅毒的最佳方法。诊断一期梅毒、二期梅毒时，可取患者的渗出液或淋巴结穿刺术得到的组织液，在暗视野显微镜下观察螺旋体的特征性形态和运动方式.病原学检查的主要方法有暗视显微镜检查、镀银染色法和直接荧光法,12,暗视野显微镜检查、镀银染色和荧光抗梅毒螺旋体单克隆抗体等检查方法，直接镜检到梅毒螺旋体，在临床可确诊梅毒，且具有快速、方便、易操作的特点。暗视野显微镜检查已被世界卫生组织指定为性病实验室必备项目之一。螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最佳方法，对于患者的早期诊断、及时治疗、预后和尽早切断传染源都有十分重要的意义。如未见到梅毒螺旋体，并不能排除患梅毒的可能性，,13,14,暗视野显微镜检查,15,镀银染色,16,检测方法-血清学检测,根据检测所用抗原不同，临床血清试验分为两大类：1.非梅毒螺旋体抗原血清试验2.梅毒螺旋体抗原血清试验,17,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,性病研究实验室试验（VDRL）不加热血清反应素试验（USR）血浆反应素环状卡片试验（RPR、TRUST）,18,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,所有的非梅毒螺旋体血清试验的抗原基本成分都一样,其基本成分是心磷脂、卵磷脂和胆固醇抗原抗体结合形成复合物凝集成网状沉淀颗粒被肉眼所见上述方法的敏感性和特异性都基本相似,19,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,RPR试验特点：在USR试剂成分的基础上加入黑色碳颗粒作为沉淀的指示物用白色的硬纸片替代玻片血清不需要灭活不需要显微镜观测结果可作定量试验有现成的试剂盒携带方便操作简单价格便宜试验的结果可长期保存,20,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验,甲苯胺红试验(TRUST)特点：其原理和成分与RPR试验相同用红色的甲苯胺红替代了碳颗粒其余的特点均与RPR相同,21,非梅毒螺旋体血清试验原理示意图,22,RPR结果,23,TRUST结果,24,检测方法非梅毒螺旋体血清试验临床意义,非梅毒螺旋体抗原血清试验方法简单、快速、敏感性和特异性较好。适用于大量人群的筛查。早期梅毒硬下疳出现1周-2周后，血清可呈阳性。经治疗后血清滴度可下降并阴性，故可作为疗效观察、判愈、复发或再感染的指征。,25,检测方法-非梅毒螺旋体血清试验特点,前带现象指非梅毒螺旋体抗原血清试验中，有时血清中存在高浓度的抗体时出现的弱阳性、不典型或阴性反应的结果，而临床上又象二期梅毒，此时将血清稀释后再进行试验，出现了阳性的结果，该现象称为前带现象。,26,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,采用梅毒螺旋体作抗原，是特异性的抗原体反应。梅毒螺旋体血球凝集试验（TPHA）梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TP-PA）荧光梅毒螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）、梅毒螺旋体抗体酶联免疫试验（ELSA-TP）梅毒螺旋体蛋白印迹试验（WB-Test）,27,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,TPPATPPA试验原理与TPHA试验基本相同。TPPA试验用梅毒螺旋体致敏明胶颗粒替代TPHA试验中致敏羊红细胞，此致敏颗粒与人血清中的抗梅毒螺旋体抗体结合，产生可见的凝集反应，具有较高的敏感性。明胶粒子为洋红色，在操作部步上也较为方便，出结果较快。,28,检测方法-梅毒螺旋体血清试验,FTA-ABSFTA-ABS试验是检测梅毒的“金标准”试验。其原理是将有完整形态的梅毒螺旋体作为抗原，加上经吸收剂（用Reiter螺旋体制备而成）吸收过的梅毒患者血清形成抗原抗体复合物，再加入荧光素（FTIC）标记的抗人免疫球蛋白，与抗梅毒螺旋体抗体结合，形成荧光的抗原抗体复合物。在荧光显微镜下，螺旋体显出苹果绿色的荧光，即为阳性反应。,29,+,Sheepredcell,T.pallidum,+,Sensitisedcell,Sensitisedcell,SpecificAntibody,Hemagglutination,TPPA/TPHA,30,检测方法-梅毒螺旋体血清试验的临床意义,作为非梅毒螺旋体抗原血清试验(如RPR等)初筛阳性标本的确证试验。梅毒患者经过抗梅治疗后，TPPA试验仍可阳性，故TPPA试验阳性不能作为疗效观察的指标。TPPA阳性不能区分既往感染和现症感染，应结合非梅毒螺旋体抗原血清试验结果进行诊断。,31,非梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图,早期,晚期,一期,二期,早期潜伏,晚期潜伏,三期,治疗前治疗后,阳性,阴性,32,梅毒螺旋体抗原血清学试验结果解释示意图,早期,一期,二期,早期潜伏,晚期,晚期潜伏,三期,治疗前治疗后,阳性,阴性,33,梅毒血清学试验结果的临床意义总汇,USRTPHA意义RPRTPPAVDRLFTA-ABS_排除梅毒一期梅毒的早期艾兹病患者合并梅毒+现症梅毒(梅毒孕妇所生的婴儿除外)+-生物学假阳性-+早期梅毒经治疗后,34,梅毒血清假阳性反应,技术性假阳性反应：如实验室操作错误，标本溶血等，如重复试验，无梅毒患者血清试验成为阴性。生物学假阳性反应：因非螺旋体抗原血清试验是非特异性的，在其它一些疾病，尤以感染性疾病，也可释放心拟脂至血液中，产生反应素，如麻风、麻疹、疟疾、传染性肝炎、病毒性肺炎、传染性单核细胞增多症，系统性红斑狼疮，非典型性肺炎、甚至妊娠都可出现阳性，但这类患者血清反应滴度低，很少超过1：8。而且半年内渐转成阴性。另外可用特异性的梅毒血清反应证实。如用FTAABS试验,35,假阴性反应,在梅毒螺旋体感染后12周内可呈阴性反应梅毒螺旋体感染不久即开始治疗晚期梅毒患者的血清中反应素含量低，敏感性低的梅毒血清试验易出现阴性反应在二期梅毒时RPR试验也可出现阴性反应，前带现象(proz