（有机化学专业论文）几种滥用药物代谢产物及有机氯农药的检测研究.pdf

广西大学学位论文原创性声明和学位论文使二冀黜 学位论文原创性声明 本人声明：所呈交的学位论文是在导师指导下完成的，研究工作所取得的成果和相 关知识产权属广西大学所有。除己注明部分外，论文中不包含其他人已经发表过的研究 成果，也不包含本人为获得其它学位而使用过的内容。对本文的研究工作提供过重要帮 助的个人和集体，均已在论文中明确说明并致谢。 论文作者签名： 龇出臣 伽f o 年莎月勿日 学位论文使用授权说明 本人完全了解广西大学关于收集、保存、使用学位论文的规定，即： 本人保证不以其它单位为第一署名单位发表或使用本论文的研究内容； 按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本； 学校有权保存学位论文的印刷本和电子版，并提供目录检索与阅览服务； 学校可以采用影印、缩印、数字化或其它复制手段保存论文； 在不以赢利为目的的前提下，学校可以公布论文的部分或全部内容。 请选择发布时间： 囤即时发布口解密后发布 ( 保密论文需注明，并在解密后遵守此规定) 论文作者签名：舡以臣导师签名：移颦骺2 小年石月2 z 日 几种滥用药物代谢产物及有机氯农药的检测研究 摘要 滥用药物是指长期使用有关精神活性物质或性能增强的非治疗性或非 医疗作用的药物。滥用这些药物严重危害人体健康，严重损害人的大脑和 中枢神经系统，引发各种疾病，并导致抢劫盗窃，坑蒙拐骗等犯罪行为， 严重危害社会安全，甚至出现利用滥用药物进行刑事犯罪的行为。药物的 代谢即药物在有机体内的生物转化过程。滥用药物在生物体内代谢广泛， 半衰期短，故在生物检材中检出原体药物的可能性很小。因此研究滥用药 物在生物体内的代谢，推测鉴定其代谢产物，推断药物体内的代谢途径， 对法庭科学具有重要的意义。代谢物的合成研究则可以为检测提供标准， 使检测鉴定更加快速，准确及稳定。 有机氯农药曾在世界范围内大量应用，毒性大，难分解，但因其良好 杀虫效果仍保留了一些在环境中较易分解的有机氯农药，这些农药在农业 生产领域应用广泛，对鱼、虾类等水生动物高毒，因而鱼、虾类等水生动 物中毒事件常有发生，且利用这类农药进行投毒的案件时有发生。因此建 立一种快速、高效的水中有机氯农药的样品前处理及检测方法，对监测水 中有机氯的污染现状及打击相关的投毒案件具有重要的意义。 本论文利用气相色谱质谱联用及高效液相色谱等先进分析技术，对氯 硝安定、唑吡坦、 定各个滥用药物的 丙诺啡及其代谢物 代谢物进行合成， 用搅拌棒吸附子技 本论文所建立的代 定量方法可以为理 关键词：滥用药物 a bs t r a c t d r u ga b u s eh a s ab r o a dr a n g eo fd e f i n i t i o n sr e l a t e dt ot h eu s eo f p s y c h o a c t i v ed r u go rp e r f o r m a n c ee n h a n c i n gd r u gf o r an o n t h e r a p e u t i co r n o n m e d i c a le f f e c t t h eh e a l t h ，t h eh u m a nb r a i na n dc e n t r a ln e r v o u ss y s t e m w o u l db eh a r m e ds e r i o u s l ya n dal o to fd i s e a s e sw o u l db et r i g g e r e df o rd r u g a b u s e a n dt h ew o r s tw a st h a ti tl e dt os e r i o u st h r e a tt os o c i a ls e c u r i t ys u c ha s r o b b e r y , t h e f t ，e v e nf r a u dc r i m i n a la c t s t h eb i o t r a n s f o r m a t i o nw a st h ed r u g m e t a b o l i s m a sd r u ga b u s ew a se x t e n s i v e l ym e t a b o l i z e da n dt h ee l i m i n a t i o n h a l f - l i f ew a ss h o r t ，t h e r ew a sv e r yl i t t l ec h a n c eo fd e t e c t i n gt h ep a r e n td r u gi n t h eb i o l o g i c a ls a m p l e s s ot h es t u d yo ft h ev i v om e t a b o l i s m ，i d e n t i f i c a t i o no ft h e m e t a b o l i t e sa n dt h em e t a b o l i cp a t h w a y so fd r u g sa b u s ew e r ei m p o r t a n tt ot h e f o r e n s i cs c i e n c e a st h es y n t h e s i so fm e t a b o l i t e sc o u l dp r o v i d eas t a n d a r dt ot h e d e t e c t i o n ，t h ed e t e r m i n a t i o nm e t h o da n di d e n t i f i c a t i o nw a sm o r er a p i d ，a c c u r a t e a n ds t a b l e t h eo r g a n o c h l o r i n ep e s t i c i d e sw e r eu s e de x t e n s i v e l yi nt h ep a r ty e a r s b u t m o s tw a sf o r b i d d e nt ou s eb e c a u s eo fi t st o x i c i t ya n dr e f r a c t o r y t h o u g hi tw a s t o x i ct ot h ef i s h ，s h r i m pa n do t h e ra q u a t i ca n i m a l s ，s o m eo ft h eo r g a n o c h l o r i n e i i i p e s t i c i d e sh a de x c e l l e n ti n s e c t i c i d a le f f e c ta n dw e r ee a s yt od e c o m p o s ei nt h e e n v i r o n m e n ts ot h e yw e r es t i l lw i d e l yu s e di na g r i c u l t u r a lp r o d u c t i o n a st h e p o i s o n i n gc a s e sh a p p e n e df r o mt i m et ot i m e ，ar a p i da n da c c u r a t em e t h o df o r d e t e r m i n i n gp e s t i c i d e sw a s c a l l e df o r , w h i c hw a si m p o r t a n tt ot h em o n i t o r i n go f t h ep o l l u t i o no fw a t e ra n dt h ec o m b a t i n gt ot h er e l a t e dp o i s o n i n gc a s e s i nt h i st h e s i s ，t h ev i v om e t a b o l i s mo fa b u s ed r u g ss u c ha sc l o n a z e p a m ， z o l p i d e m ，p r o m e t h a z i n e a n d d i a z e p a m w a ss t u d i e dw i t h g a s c h r o m a t o g r a p h y m a s s s p e c t r o m e t r y a n d h i 曲p e r f o r m a n c el i q u i d c h r o m a t o g r a p h y t h e i rm a j o r m e t a b o l i t e sw e r ei d e n t i f i e da n dt h e i rm a j o r m e t a b o l i cp a t h w a y sw e r ei n f e r r e d a n dt h em e t h o dw a sd e v e l o p e df o r s i m u l t a n e o u s q u a n t i f y i n gb u p r e n o r p h i n e i t sm e t a b o l i t e t h et w om a i n m e t a b o l i t e so fn i t r a z e p a mw e r es y n t h e s i z e db ym i c r o w a v ei r r a d i a t i o n t h e r e s p o n s es u r f a c ea n a l y s i sm e t h o dw a sf o rt h eo p t i m i z a t i o n a n da tl a s t ，t h e n e wm e t h o df o rt h es i m u l t a n e o u s l yd e t e r m i n a t i o no ft w e n t yo r g a n o c h l o r i n e p e s t i c i d e si nw a t e rs a m p l e sw a sd e v e l o p e db ys t i rb a rs o r p t i v ee x t r a c t i o n ( s bs e ) c o u p l e d w i t h g a sc h r o m a t o g r a p h y m a s ss p e c t r o m e t r y t h e d a t a b a s eo f 一 一一 一 一 m e t a b o l i t e sa n dt h em e t h o d si nt h i sp a p e rc a nb eu s e di nr e a lc a s e k e y w o r d s ：d r u ga b u s e ；m e t a b o l i s m ；m e t a b o l i t e s ；g a sc h r o m a t o g r a p h y m a s s s p e c t r o m e t r y ；o r g a n o c h l o r i n ep e s t i c i d e s i v 目录 摘要i a b s t r a c t i i i 第一章绪论1 1 1 引言1 1 2 药物的代谢1 1 3 药物代谢研究方法2 1 4 药物代谢给药剂量确定2 1 5 样品的处理方法3 1 6 药物代谢实验分析技术4 1 6 1 色谱分析法4 1 6 2 免疫分析法4 1 6 3 光谱分析法4 1 6 4 生物效应法4 1 7 课题研究目的与意义5 1 8 研究内容及思路5 第二章g c m s 分析鉴定大鼠尿液中的氯硝安定及其代谢物6 2 1 前言6 2 2 实验仪器与试剂6 2 2 1 实验仪器6 2 2 2 实验试剂6 2 3 实验内容7 2 3 1g c m s 分析条件7 2 3 2 样本采集7 2 3 3 样品处理7 2 4 实验结果与讨论8 2 4 1 大鼠阳性尿液中氯硝安定代谢物的确定8 2 4 2 氯硝安定在生物体内的代谢9 2 5 结论1 0 第三章g c m s 分析鉴定大鼠尿液中的唑吡坦及其代谢物ll 3 1 前言1 l v 第 第 5 2 1 实验仪器2 4 5 2 2 实验试剂2 4 5 3 实验内容2 4 5 3 1 色谱条件2 4 5 3 2 溶液的配制2 4 5 3 3 试验方法2 5 5 4 结果与讨论2 5 5 4 1 色谱条件优化2 5 5 4 2 内标物选择2 5 5 4 3 衍生化时间的考察2 5 5 4 4 洗脱液的考察2 6 5 4 5p h 值对提取的影响2 6 5 4 6 回归方程及线性范围2 6 5 4 7 回收率试验2 6 5 4 8 样品分析2 6 5 5 结论2 7 第六章“1 + 1 ”毒品主要成分安定的代谢研究2 8 6 1 前言2 8 6 2 实验仪器与试剂2 8 6 2 1 实验仪器2 8 6 2 2 实验试剂2 9 6 3 实验内容2 9 6 3 1 仪器条件2 9 6 3 2 样品的采集2 9 6 3 - 3 样品的预处理2 9 6 4 结果与讨论2 9 6 4 1g c m s 分析结果2 9 6 4 2 安定及其代谢的鉴定3 2 6 5 结论3 3 第七章“1 + 1 ”毒品主要成分异丙嗪的代谢研究3 4 7 1 前言3 4 7 2 实验仪器与试剂3 4 7 2 1 实验仪器3 4 7 2 2 实验试剂3 5 7 3 实验内容3 5 v i i 7 3 1g c m s 测定条件3 5 7 3 2 样品采集3 5 7 3 3 样品样品处理。3 5 7 4 实验结果与讨论3 5 7 4 1g c m s 分析结果。3 5 7 4 2 大鼠尿液中异丙嗪及其代谢物的鉴定3 6 7 4 3 讨论3 9 第八章硝基安定的两个主要代谢物的合成4 1 8 1 前言4 1 8 2 实验仪器与试剂，4 1 8 2 1 实验仪器4 1 8 2 2 实验试剂4 1 8 3 实验内容4 1 8 3 17 氨基硝基安定的合成原理一4 1 8 3 27 氨基硝基安定的鉴定4 2 8 3 37 氨基硝基安定的合成条件的优化设计一4 3 8 3 4 实验步骤及数据处理4 4 8 3 57 - 乙酰氨基硝基安定的合成4 5 8 4 实验结果与讨论4 6 第九章搅拌棒吸附萃取技术在检测水中有机氯农药的应用研究4 9 9 1 前言4 9 9 2 实验仪器与试剂4 9 9 2 1 实验仪器4 9 9 2 2 实验试剂5 0 9 3 实验内容5 0 9 3 1 标准溶液的配制5 0 9 3 2 实验方法5 0 9 3 3 色谱与质谱条件5 0 9 4 实验结果与讨论5 1 9 4 1 色谱条件优化5 1 9 4 2 萃取条件的优化5 1 9 4 3 线性关系与检出限- 5 2 9 4 4 方法的回收率及精密度5 2 第十章结果与展望5 4 参考文献5 5 v i i i 致谢。 攻读硕士 几种滥用药物代谢产物及有机氮农药的检锕9 研究 1 1 引言 第一章绪论 滥用药物是指长期使用有关精神活性物质或性能增强的非治疗性或非医疗作用的 药物，能够使中枢神经系统产生兴奋或者抑郁，从而产生各种幻觉并使人的思维、情绪、 行为等不受控制。滥用药物包含非法和合法两大类，非法滥用药物即为我国刑法第 3 5 7 条的规定所称的“毒品 ，包括能够使人形成瘾癖的麻醉药品和精神药品。 从2 0 世纪6 0 年代起，滥用药物进入多元化时代，有传统的毒品如天然产品鸦片、半 合成品海洛因、大麻等，也有由人工化学合成的冰毒、摇头丸等新型毒品。值得注意的 是，由于对毒品的严厉打击，犯罪分子开始把目标转向那些没有被列入管制或被列入管 制不久的，容易通过合法渠道得到的医用药物，导致某些医用药物出现滥用的趋势，并 出现多种药物混合制成的毒品。例如俗称为“1 + 1 ” 1 - 2 j 的毒品，是由丁丙诺啡、东莨菪 碱及异丙嗪等医用药物混合而成。使用毒品的方式也由传统的吸食转变为口服、抽吸、 鼻吸或注射等多种方式。 滥用药物严重危害人体健康，严重损害人的大脑和中枢神经系统，引发各种疾病， 并导致抢劫盗窃，坑蒙拐骗等犯罪行为，严重危害社会安全，甚至出现利用滥用药物进 行刑事犯罪的行为。随着全球化经济的发展，药物滥用逐渐成为全球性的社会问题，给 公安部门的毒物分析提出了新的任务和要求，推动了体内滥用药物分析鉴定的发展，并 逐渐成为毒物分析的主要内容。滥用药物一般在生物体内代谢广泛，半衰期短，故在生 物检材中检出原体药物的可能性很小。因此研究滥用药物在生物体内的代谢，推测鉴定 其代谢产物，推断药物体内的代谢途径，建立相应的数据库，对法庭科学具有重要的指 导意义。代谢物的合成研究则可以为检测提供标准，使检测鉴定更加快速，准确及稳定。 有机氯农药曾在世界范围内大量使用，毒性大，难分解，但因其良好杀虫效果仍保 留了一些在环境中较易分解的有机氯农药。这些农药在农业生产领域应用广泛，对鱼、 虾类等水生动物高毒，因而鱼、虾类等水生动物中毒事件常有发生，且利用这类农药进 行投毒的案件时有发生，有机氯农药可以通过食物途径进入人体，危害人类健康1 3 j 。因 此建立一种快速、高效的水中有机氯农药的样品前处理及检测方法，对监测水中有机氯 的污染现状及打击相关的投毒案件具有重要的意义。 1 2 药物的代谢 1 8 4 1 年，i 扫a l e x a n d e ru 进行第一个人体药物代谢实验开始，到1 9 世纪，药物的主要 代谢途径基本被阐明。现代药物代谢研究e 臼w i l l i a m srt 开始，他明确提出了药物代谢 几种滥用药物代谢产物及有机氯农药的检预u 研究 经历了两个阶段：一相代谢( p h a s ei ) 和二相代谢( p h a s e i i ) 【4 】。药物的代谢( m e t a b o l i s m ) 即药物在有机体内的生物转化过程。生物转化就是药物作为外源物质在生物体内温和的 条件下，在生物酶的作用下，进行生物化学反应形成新的化合物的过程，分为两相反应。 i 相是在肝药酶及其他酶的作用下，药物分子经过氧化、还原及水解等反应，在其结构 中引入或者暴露出极性基团，产生羟基、氨基及羧基等；i i 相主要由谷胱甘肽s 转移酶、 n 乙酰基转移酶及磺基转移酶等作用下，使药物分子结构中的极性基团与体内的化学成 分如甘氨酸、牛磺酸及葡萄糖醛酸等结合，生成水溶性强、极性高的代谢物【卯。 1 3 药物代谢研究方法 国内外研究药物代谢的方法主要有两种：一、体内研究方法，在动物或者人等生物 模型上给予一定剂量的药物，在一段时间内收集尿液、血液、胆汁及动物的组织器官等 生物样品，然后分析样品中药物及药物的代谢产物；二、体外研究方法，主要利用肝细 胞体外温孵法、肝微粒体温孵法、肝脏灌流技术及肝组织切片法等研究药物代谢的方法 6 1 。体内研究方法能够真实地反应各种体内因素对药物的影响，全面地反映药物代谢的 体内整体特征；体外代谢研究方法具有代谢时间短，代谢体系干净，代谢物含量大等特 点，能够快速地解决一些复杂药物的代谢问题，但是不能全面反映生物体内的综合代谢 情况。 1 4 药物代谢给药剂量确定 药理实验中药物剂量的确定通常使用以下三种方法 7 1 ：一、通过预实验确定使用剂 量：二、根据以往的经验或文献资料确定使用剂量；三、通过动物与人、动物与动物之 间的剂量换算确定使用剂量。其中剂量换算法又分为经验法、经验公式换算法、体重换 算法和体表面积换算法。 ( 1 ) 经验法，动物的耐受性一般比人大，假定人用药量为l ，则小白鼠、大白鼠为 2 5 - - 5 0 ，兔、豚鼠为1 5 - - - 2 0 ，狗、猫为5 - - 1 0 。 ( 2 ) 体重换算法，已知a 种动物的体重剂量，估算b 种动物的体重剂量，可先查表 1 1 ，找出折算系数( w ) ，再按式1 1 计算： 表1 1 动物与人的体重剂量折算系数( w ) 表 t a b l e1 1t h ec o n v e r s i o nc o e f f i c i e n to f b o d yw e i g h td o s eo f a n i m a la n dh u m a n b = w a( 1 1 ) 1 1 式中：b 为b 种动物的剂量，a 为a 种动物的剂量，剂量的单位为m g k g 一。 2 广西大学硕士学位论文 几种滥用药物代谢产物及有机氯农药的检澳q 研究 ( 3 ) 体表面积换算法，根据不同种属动物体内的血药浓度和药物作用与动物体表 面积成平行关系。体表面积不易直接测定，一般根据体重和动物体型由式1 2 近似计算： a = r w 2 3 ( 1 2 ) 1 2 式中：a 为动物体表面积( m 2 ) ；w 是体重( b ) ；r 为动物的体型系数，见表1 2 。 表1 - 2 不同动物的体型系数( r ) t a b l e1 - 2t h eb o d yc o e f f i c i e n to fd i f f e r e n ta n i m a l s 动物之间进行折算，可采用以下比例，见式1 3 ： + = 2 名：，。 3 ， 1 3 式中，d l 、9 2 为不同动物的给药剂量( m g k g d ) ；a 1 、a 2 为不同动物体表面积( m 2 ) ； 、加为不同动物体型系数。 本论文研究的是滥用药物的代谢情况，为法庭科学服务，一般滥用服药剂量会大大 超过正常的剂量，故根据实际情况，在实验当中，大鼠的给药剂量会大于正常药物剂量。 1 5 样品的处理方法 现代分析化学仪器迅猛发展给体内代谢研究带来广阔的空间。但是药物在生物体内 的分布广，代谢转化多样，故药物及其代谢产物在体内的浓度很低，给原体药物及其代 谢产物的检测带来相当大的难度。为了能够准确定性及定量分析实际的生物样品，必须 依赖样品前处理技术的发展。样品的前处理方法分别有传统的液液提取法( l i q u i d 1 i q u i d e x t r a c t i o n ，l l e ) 、固相提取( s o l i dp h a s ee x t r a c t i o n ，s p e ) 和固相微萃取( s o l i dp h a s em i c r o e x t r a c t i o n ，s p m e ) 及搅拌棒吸附萃取( s t i rb a rs o r p t i v ee x t r a c t i o n ，s b s e ) 等。 1 9 世纪开始l l e 就应用于萃取水中的目标化合物，其具有操作简单等优点，至今还 被广泛应用到前处理上。但该法提取效率较低，提高萃取效率的有效方法就是不断增加 有机萃取剂的用量，操作过程容易发生乳化，繁琐、费时，不适合快速分析要求。大量 地使用有机溶剂，不仅使分析成本过高，还易对环境造成污染，危害分析者的健康 8 - 9 。 操作人员对l l e 的熟练程度对萃取结果影响很大，不同的操作人员，在同一分析条件下， 得到的结果可能相差很大。 1 9 6 2 年，a n t o nah 等人首次对固相萃取技术进行了研究。2 0 世纪7 0 年代，s p e 技术 真正开始引起人们的关注。1 9 7 7 年，第一次在市场上出现商品化的一次性s p e 装置i lo j 。 到现在，s p e 发展迅速，各种新型的固相萃取材料不断出现，越来越多的实验室使用s p e 作为前处理手段。相比于l l e ，s p e 技术【1 卜1 2 】具有有机溶剂使用少，方法灵敏，检材用 量少的特点，选择性将检材中的目标分析物吸附在柱中，利用合适的洗脱液将目标分析 物洗脱下来，挥干、溶解后、进样分析。可以说，s p e 技术恰好弥；i i l l e 技术的不足， 操作简便，对于不同的操作人员，比较容易得到重现的结果；操作过程，使用有机溶剂 3 广西大掌硕士学位论文几种滥用药物代谢产物及有机氯农药的检测研究 l 匕l l e 少得多，一个样品仅需几毫升，既节约分析成本，又减少操作人员接触有机溶剂 的机会，大大减少分析过程有机溶剂对身体的伤害。 2 0 世纪9 0 年代开始，s p m e t l 3 】被深入研究，相对s p e ，其检材用量更少，将采集、 提取、浓缩、进样及分析集中于一体，分析的时间更少，实现分析的无溶剂化，大大减 少分析对分析者的伤害，但是其使用过程中易被损坏，使用成本较高。 s b s e 是近年来发展起来的一种新型样品预分离富集技术，s b s e 萃取原理与s p m e 相同，区别主要是s b s e 搅拌棒上的聚二甲基硅氧烷体积( p o l y d i m e t h y l s i l o x a n e ，p d m s ， 5 5 - - - 2 5 0r t l ) l i s s p m e 萃取头的p d m s 体积( 0 5 1 此) 大得多，由于s b s e 具有比s p m e 小得多的相比( 水相体积p d m s 相体积) ，因此s b s e 与s p m e 相比，可获得更高的萃取量、 更低的检测限、更优的重现性，更适合于样品中痕量组分的分析【1 4 15 1 。目前，s b s e 技 术被用来测定挥发性和半挥发性有机物，包括不同样品中的农药残留 1 6 - 1 8 1 ，生物体液中 的微量物质【1 9 2 1 】。 每一种样品前处理方法，都有其优点及不足，在分析过程需要分析者根据实际的需 要选择合适的前处理技术。本论文检测的主要是生物检材，故主要采取s p e 为前处理手 段。 1 6 药物代谢实验分析技术 研究生物体内药物代谢一般要求在复杂生物样品基质中进行痕量分析。先进的分析 条件给药物代谢带来便利。以下是药物代谢常用的检测方法。 1 6 1 色谱分析法 色谱分析具有准确、灵敏及高选择性，故被广泛应用于药物代谢研究中。常用的色 谱方法有：高效液相色谱法( h i g hp e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ，h p l c ) 、液相色 谱质谱联用法( l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y m a s ss p e c t r o m e t r y ，l c m s ) 、串联质谱法( t a n d e m m a s ss p e c t r o m e t r y ，m s m s ) 、气相色谱法( g a sc h r o m a t o g r a p h y ，g c ) 、气相色谱质谱 联用色谱法( g a sc h r o m a t o g r a p h y m a s ss p e c t r o m e t r y ，g c m s ) 、液相色谱核磁共振法 ( l i q u i dc h r o m a t o g r a p h y n u c l e a rm a g n e t i cr e s o n a n c e ，l c n m r ) 1 4 1 。 1 6 2 免疫分析法 利用抗原抗体结合反应进行分析的方法。常用的免疫分析方法有放射免疫分析、 酶免疫分析及荧光免疫分析( 4 1 。 1 6 3 光谱分析法 2 0 世纪6 0 、7 0 年代，比色、紫外及荧光分析是我国药物代谢研究的主要方法【4 】。 1 6 4 生物效应法 主要用于中药的药代动力学研究，常用的方法有药物累积法、药理效应法及微生物 4 几种滥用药物代谢产物及有机氢农药的检钡9 研究 法【4 1 。 1 7 课题研究目的与意义 药物代谢广义包括药物吸收、分布、代谢和排泄过程。狭义是指药物的化学结构改 变，即药物的生物转化。药物代谢反应是指药物在生物体内发生的生物转化反应，其产 物为代谢产物。药物代谢在大多数药物的药理及毒理特性方面起重要作用。研究药物代 谢具有重要的意义，可以了解药物在体内的过程预测人体内代谢特征；研究体内药物相 互作用的机制从代谢产物中发现和寻找新药；研究药物体内代谢的立体选择性。 目前我国关于滥用药物代谢检测研究的报道不多，新型滥用药物的代谢研究报道更 少，故就法庭科学而言，系统地研究滥用药物的生物体内代谢，鉴定体内代谢产物，建 立相应的代谢物数据库，可以为公安部门开展相关滥用药物代谢物检验鉴定提供技术支 持，为判明检验对象是否吸毒、吸毒种类、吸毒程度和吸毒史，以及吸毒和死亡的关系， 以及涉毒案件的侦破及处理提供科学证据。 生物体内滥用药物代谢物检验鉴定，我国还处于较低的水平，主要因为我国技术部 门对这些药物的代谢研究投入不够，研究不深，更为重要的是国内因为没有这些药物代 谢物对照品出售，所以，国内绝大多数理化检验鉴定实验室至今无法开展对一些滥用药 物代谢物的鉴定业务，与新形势下的要求存在较大的差距。据了解，国外仅有少量代谢 物对照品出售，价格昂贵且禁止出口中国。因此，在国内开展滥用药物代谢物的合成研 究，可以为公安部门提供对照品，对拓展我国公安毒物分析鉴定项目，提高检验鉴定水 平，更好地服务于侦察破案和法庭诉讼乃至维护社会的稳定都具有重要的现实意义。 对于有机氯农药，建立一种快速、高效的提取水中有机氯农药样品及其定性定量方 法，对监测水中有机氯的污染现状及打击相关的投毒案件具有重要的意义。 本论文立足于利用g c m s 及h p l c 等现代先进的分析手段，对氯硝安定、唑吡坦及 “1 + 1 ”混合滥用药物的主要成分进行代谢研究，鉴定它们各自的代谢物，建立相应的 数据库，并建立相应的检测方法，为法庭科学提供参考。利用微波辐射合成硝基安定两 个主要代谢物，为药品鉴定提供对照品，更重要的是打破国内对滥用药物的代谢物检测 缺乏对照品的局面，为鉴定提供新的思路。 1 8 研究内容及思路 ( 1 ) 以大鼠为动物模型，研究氯硝安定、唑吡坦及“1 + 1 混合滥用药物的主要成 分的体内代谢。 ( 2 ) 建立唑吡坦及其主要代谢物和丁丙诺啡及其代谢物的定性定量方法。 ( 3 ) 研究硝基安定的两个主要代谢产物的合成方法。 ( 4 ) 建立快速检测水中有机氯农药的方法。 5 广西大学硕士掌位论文 几种滥用药物代谢产物及有机氯农药的检测研究 第二章g c m s 分析鉴定大鼠尿液中的氯硝安定及其代谢物 2 1 前言 氯硝安定又名氯硝西泮( c l o n a z e p a m ，c l o z ) ，具有抗焦虑、抗抑郁、镇静、催h 民 和解痉作用，是临床上常用的精神药物之一，因该药有较强的催眠作用，常被作为麻醉 药物用于麻醉犯罪案件中【2 2 】。氯硝安定在生物体内容易代谢，主要以7 氨基氯硝安定 ( 7 - a m i n o c l o n a z e p a m ，7 - a c l o z ) 代谢物从尿中排泄 2 4 - 2 6 】。研究表明，人体单独服用3 m g 的c l o z ，6h 后，在尿液中未能检出c l o z ，却可以在2 8d 后仍能在尿液中检测出 7 - a c l o z 2 7 1 。故研究c l o z 的体内代谢，鉴定出其主要代谢物对法庭科学具有重要的意 义。国外有关氯硝安定及其主要代谢物的报道不多，主要是一些检测方法，有h p l c 法1 2 4 1 定量分析血液中的c l o z 、7 - a c l o z 及7 乙酰氨基氯硝安定( 7 - a c e t a m i d o c l o n a z e p a m ， 7 - a a c l o z ) ，g c e c d 检测尿液中的c l o z t 2 引，g c m s 分析头发中l 2 3 】和血液中【2 5 】的c l o z 及7 a c l o z ，l c m s m s 法检测体液中 拘c l o z 及7 a c l o z 四j 等。国内还未对氯硝安定 代谢进行研究，主要停留在氯硝安定原药的检测层面，有h p l c m s 法测定血中氯硝安定 【3 0 】，h p l c 法测定氯硝安定在中毒家兔体内的分布【3 1 】等。 前期实验室对硝基安定和尼美西泮两种药物进行了生物体内代谢研究【3 2 3 4 1 ，在此基 础上进一步对与硝基安定、尼美西泮结构相似的氯硝安定进行生物体内代谢研究，重点 对口服氯硝安定的志愿者尿液以及口服氯硝安定大鼠的尿液、血液、肝组织等进行氯硝 安定及其代谢物的检测，推测了氯硝安定在生物体内的代谢物及主要代谢途径，为氯硝 安定用于麻醉犯罪案件的毒物检验提供方向和依据。 2 2 实验仪器与试剂 2 2 1 实验仪器 q p 2 0 1 0 气相色谱质谱联用仪( 日本岛津公司) ，配电子电离轰击源( e i ) ，正化学 源( p c i ) ；j & wd b 5 m s 石英毛细柱( 3 0m 0 2 5m l n 0 2 5 “m ) ；3 1 8 r 高速冷冻离心 机( 美国t o m o s 公司) ；固相萃取仪( 美国s u p e l c o 公司) ；o a s i s h l b 3 c c 固相萃取 柱( 美国w a t e r s 公司) ；t t l d c 型氮吹仪( 北京同泰联科技发展有限公司) 。 2 2 2 实验试剂 氯硝安定( 中国药品生物制品检定所，批号：1 7 1 2 2 7 2 0 0 3 0 2 ，1 0 0 ) ；j 9 葡萄糖 醛酸酶( 美国s i g m a 公司，批号：0 9 3 k 8 6 0 0 ，2 2m g ，1 1 3 4 6 0 0u g d ) ，临用时用p h4 8 的 乙酸乙酸钠缓冲溶液配制成5 0 0 0u m l ；碱性蛋白水解酶( 广西庞博生物工程有限公 司) ；t r i s 试剂( 三羟甲基氨基甲烷试剂) 、乙醚、甲醇等其他试剂( a r ，成都科龙试剂 6 广西大学硕士学位论文几种滥用药物代谢产物及有机氯农垂 白勺检翱q 研究 化工厂) 。 2 3 实验内容 2 3 1g c m s 分析条件 g c 条件初始温度：1 2 0 ，保持1m i n ；升温速率：1 5 m i n 1 ；最终温度：2 8 0 ， 保持3 5m i n ；进样口温度：2 8 0 ；载气( h e ) 流速：1 3 3m l m i n l ；进样方式：不分 流进样；进样量：1p l 。 m s 条件离子化方式：e i 及p c i 源；电子能量：7 0e v ；倍增器电压：0 9 5k v ；传输 线温度：2 5 0 ；离子源温度：2 0 0 ；扫描方式：( 1 ) 全扫描( s c a n ) ，质量范围 m z4 0 - - - 4 0 0u ；( 2 ) 选择离子监测( s i m ) ，氯硝安定( 2 4 0 、2 8 0 、2 8 6 、3 1 4 ) 、7 氨基 硝基安定( 2 2 0 、2 5 0 、2 5 6 、2 8 5 ) 、7 乙酰氨基硝基安定( 2 5 6 、2 9 2 、2 9 9 、3 2 7 ) 。正化 学电离源( p c i ) 反应气：c h 4 ；扫描方式：全扫描( s c a n ) ，质量范围m z1 0 0 - 4 0 0u 。 2 3 2 样本采集 志愿者阳性尿液：3 名男性志愿者