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武汉工业学院硕 士 学 位 论 文白杨无性系茎尖培养及体细胞胚胎发生技术研究论文作者：指导教师：教授学科专业：粮食、油脂及植物蛋白工程所在院系：食品科学与工程学院2007年6月分类号 密 级 U D C 学校代码 10496 武汉工业学院硕 士 学 位 论 文白杨无性系茎尖培养及体细胞胚胎发生技术研究Shoot Culture and SomaticEmbryogenesis in Aspen Clones论文作者 指导教师 教授 学科专业 粮食、油脂及植物蛋白工程 论文提交日期 论文答辩日期 答辩委员会主席 评阅人 2007年6月论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得 武汉工业学院 或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人或集体均已在文中作了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律责任和法律后果由本人承担。论文作者签名：签字日期： 年 月 日论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解 武汉工业学院 有关保留、使用学位论文的规定，特授权 武汉工业学院 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或其他复制手段保存、汇编，以供查阅和借阅。同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复本和电子文件。（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）论文作者签名： 导师签名：签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日摘 要“摘要”字样用三号黑体，1.25倍行距，居中；下空一行（“摘要”二字之间用二个字符空格分开）本论文采用茎尖培养三步法，首次对引入我国表现优良的8个白杨无性系，进行了微体快繁，为今后系统的苗期测定及田间试验提供了材料。同时，选用了5个无性系，以水培苗或组培无菌苗为材料，进行愈伤组织诱导或对其发育状态调控及体细胞胚胎发生研究，为建立稳定的杨树体细胞胚胎发生体系奠定了基础。试验结果表明，以水培苗带芽茎段为茎尖培养材料，银白杨与大齿杨杂种AG和美洲山杨与欧洲山杨杂种3#芽分化率显著低于其余6个无性系；垂直接种可显著提高水培苗腋芽分化率；玉米素浓度对芽分化率影响不明显，但影响材料的离体器官发生表现；8个无性系皆易诱导生根，其中银白杨与大齿杨杂种AG和灰杨Ca较其它无性系更易，选用根数作为评定生根效果指标更合适。4-D高浓度悬浮培养下，成功的将美洲山杨与欧洲山杨杂种3#叶柄愈伤组织调节为胚性状态，通过细胞悬浮培养，获得了大量的球形胚，并首次观察到灰杨Ca茎尖白色愈伤组织内起源的子叶胚形成，得到了完整植株。基因型和4-D浓度对愈伤组织状态调节，至为关键。温度变化可影响茎尖形态发生。愈伤组织达到胚性状态时，表面特征不一致，但有产生胚性细胞能力强弱之分。正文用小四号宋体，1.25倍行距，两端对齐，每段首行缩进四个字符空格，标点符号用全角关键词：白杨，茎尖培养，体细胞胚胎发生，悬浮培养，微体繁殖“关键词”字样用小四号宋体、加粗，关键词用小四号宋体，每一关键词之间用逗号（全角）分开，最后一个关键词后不打标点符号；均为1.5倍行距，左对齐ABSTRACT“ABSTRACT”字样用Times New Roman三号，1.25倍行距，居中；下空一行In this paper, a three-step micropropagation was successfully employed for 8 selected genotypes of aspen. At the same time, through the induction of embryogenic callus, Somatic embryogenesis was studied. It would be beneficial to establish a stable system of embryogenesis in poplar.The results of study on aspen shoot culture using node as explant show that percent bud regeneration of AG and 3# was lower than that of the other clones. Percentage of bud regeneration could be improved at vertical cutting. With the increasing of zeatin concentration, in vitro organogenesis was different. All clones were easy to induce rooting, especially AG and Ca, and number of roots was fit to estimate the effect on rooting of plantlet.Supplemented with 10mg/L 4-D, suspension cultures initiated from callus derived from petiole of aspen hybrid 3# produced embryogenic callus and a highest number of globular-shaped embryos, and cotyledonary-stage embryos originated from white callus of grey aspen Ca shoot were first observed and embling were obtained. Genotypes and concentration of 4-D was critical to induce embryogenic and somatic embryogenesis. Morphogenesis of shoot was affected by culture temperature. Characteristic of callus produced embryogenic cell was heterogeneous, but potential ability to produce embryogenic cell was different.正文用Times New Roman小四号，1.25倍行距，两端对齐，每段首行缩进四个字符空格，标点符号用全角Key words: aspen clones, shoot culture, somatic embryogenesis, callus, cell culture“Key words”字样用Times New Roman小四号、加粗，关键词用Times New Roman小四号，每一关键词之间用逗号（全角）分开，最后一个关键词后不打标点符号；均为1.25倍行距，左对齐目 录“目录”字样用三号黑体、1.25倍行距，居中；下空两行（“目录”二字之间用二个字符空格分开）页脚：自独创性声明开始，到目录，采用大写罗马数字编排页码；页码一律采用小五号宋体，单倍行距，底端居中。第1章 绪论1一级（章）标题用四号黑体，1.25倍行距，分散对齐（序号与标题内容之间用一个字符空格分开）1.1 杨树茎尖培养研究进展1二级（节）标题用小四号宋体，1.25倍行距，分散对齐，左边留二个字符空格（序号与标题内容之间用一个字符空格分开） 1.1.1 杨树茎尖培养概述3 1.1.2 杨树茎尖技术研究51.2 杨树体细胞胚胎发生研究进展7 1.2.1 杨树体细胞胚胎发生技术概述7 1.2.2 杨树体细胞胚胎发生技术研究9三级（小节）标题用小四号宋体，1.25倍行距，分散对齐，左边留四个字符空格（序号与小标题内容之间用一个字符空格分开）第2章 18参考文献61致谢66附录67攻读学位期间的研究成果68格式同“一级（章）标题”第3章 白杨无性系体细胞胚胎发生技术研究一级（章）标题用三号黑体，1.25倍行距，居中（序号与标题内容之间用二个字符空格分开），段前0.5行，段后0.5行3.1 材料与方法二级（节）标题用小三号黑体，1.25倍行距，左对齐（序号与标题内容之间用二个字符空格分开），段前0.5行，段后0.5行页眉：从第一章开始，每一章开始页的页眉书写章的名称，其它页的页眉书写“武汉工业学院硕士学位论文”字样；采用小五号宋体，单倍行距，居中排列（在页眉之下可划1条或2条横线）体细胞胚胎发生，在植物生长发育学理论研究和实际应用中，是合子胚和器官发生无法比拟的，是人们梦寐以求的离体形态发生方式。杨树作为林木生物学研究的模式树种之一，体细胞胚胎发生技术相对要落后的多。在离体培养形态发生中，杨树体细胞胚胎发生成功率和重复率比较低，有必要进一步研究。3.1.1 愈伤组织诱导三级（小节）标题用四号黑体，1.25倍行距，左对齐（序号与标题内容之间用二个字符空格分开），段前0.5行，段后0.5行（1）基因型与激素对愈伤组织诱导的影响正文中标题层次一律不宜超过三级，三级不够时，可在三级调（1）、（2）、选取灰杨Ca、银白杨与大齿杨杂种AG、欧洲山杨Ta、美洲山杨与欧洲山杨杂种3#及欧洲山杨与美洲山杨杂种TaT，5个无性系水培苗叶柄，用0.1%氯化汞浸约3min，无菌水冲洗3次，接种于含有ZT（0，0.05，0.5 mg/L）三个浓度水平和4-D（0.5，5mg/L）二个浓度水平的MS30培养基中，进行愈伤组织诱导。30d统计接种外植体数、死亡数及产生愈伤组织数，并计算愈伤组织诱导率(产生愈伤组织数/外植体数)和死亡率(死亡数/外植体数)。培养条件同2.1.1，下同。正文文字段落中：中文用小四号宋体，英文用Times New Roman小四号，1.25倍行距，左对齐，每段首行缩进四个字符空格，标点符号用全角（以下略）页脚：自正文开始，到学位论文的最后一页，采用阿拉伯数字编排页码；页码一律采用小五号宋体，单倍行距，底端居中。页眉：其它页的页眉书写“武汉工业学院硕士学位论文”字样；采用小五号宋体，单倍行距，居中排列（在页眉之下可划1条或2条横线）（2）材料类型对愈伤组织诱导的影响取欧洲山杨Ta、欧洲山杨与美洲山杨杂种TaT、美洲山杨与欧洲山杨杂种3#及灰杨Ca，4个无性系水培苗叶柄、茎段、叶片，三种材料接种于MS30+ZT0.05mg/L+4-D（0.5，5mg/L）培养基中，进行愈伤组织诱导。同时取银白杨与大齿杨杂种AG考虑四种材料，接种于相同培养基中，见表3.1，调查方法同2.1.2。表3.1 愈伤组织诱导试验接种水培苗材料类型Tab 3.1 Type of explant on callus induction of 5 aspen clones表题连同表序号在表的上一行居中标出（1.25倍行距），表题与表序号之间空两格；表题可用中、英任一种文字，亦可中英文对照；中文用五号宋体，英文用Times New Roman五号，且第一个英文单词的首字母大写无性系叶柄叶片茎段*茎尖AG+Ca+NTTaT+NTTa+NT3#+NT表内字：中文用五号宋体，英文用Times New Roman五号，1.25倍行距论文中的表格一律采用三线表格式，顶线和底线为粗线，栏目线为细线。注a：*-茎段长1-2cm不区分是否带芽；注b：+-进行试验的材料。图、表中的标注写在图或表的下方（采用英文小写字母顺序编号），中文用五号宋体，英文用Times New Roman五号，1.25倍行距（以下略）（3）光照对愈伤组织诱导的影响取银白杨与大齿杨杂种AG和欧洲山杨Ta水培苗叶片及叶柄接种于MS30+ZT0.05mg/L+4-D（0.5，5mg/L）培养基中，进行愈伤组织诱导，光照强度分为三个水平：1000-2000lux、20lux（弱光）、完全黑暗，实验结果如图3.1所示。图3.1 白杨无性系1/2MS20+IBA0.5mg/L20d生根情况Fig 3.1 Effect of genotype on rooting after 20 days cultured on 1/2MS20+IBA0.5mg/L图题连同图序号在图的下一行居中标出（1.25倍行距），图题与图序号之间空两格；图题可用中、英任一种文字，亦可中英文对照；中文用五号宋体，英文用Times New Roman五号，且第一个英文单词的首字母大写泡沫的膨胀比的计算公式为： （3.1）公式书写应在文中另起一行（位置尽可能居中），采用1.25倍行距；公式序号标注于该式所在行（当有续行时，应标注于最后一行）的最右边，上下式尽可能在“=”处排列整齐；对于较长的公式，可另起一行居中书写，只可在符号处（如：+、-、*、/、等）转行（以下略）参考文献“参考文献”字样用三号黑体，1.25倍行距，居中；下空一行1排列顺序：参考文献按论文中引用出现的先后顺序用阿拉伯数字连续编号，将序号置于方括号内。在论文引用处，视具体情况将序号或作为上角标，或作为文字段落的组成部分。如：“周1对此作了研究，数学模型见文献2。2作者姓名：只有3位及以内作者的，其姓名全部列上，中外作者一律姓前名后，外国人的名可用第一个字母的大写代替，如：William E.(名) Johns（姓）在参考文献中应写为Johns W.E.；有3位以上作者的，只列前3位，其后加“，等”或“，et al”。3“参考文献”字样采用三号黑体，1.25倍行距，居中打印；下空一行打印参考文献的内容。4参考文献内容采用小四号宋体（英文参考文献采用小四号Times New Roman字体），1.25倍行距，左对齐打印（标点符号用全角）。5参考文献著录格式（1）期刊：序号 作者.题名.刊名，出版年份，卷号（期号）：起-止页码（2）专（译）著：序号 作者.书名(，译者).版本（第一版不标注），出版地：出版单位，出版年.起-止页码（3）论文集：序号 作者.题名.见(in)：主编，编(eds).论文集名.出版地：出版单位，出版年：起-止页码（4）学位论文：序号 作者.题名：博士或硕士学位论文(Dissertation).保存地点：授予单位，年份（5）专利：序号 专利申请者.专利名.国别，专利文献种类，专利号，发布日期（6）报纸：序号 作者.报纸名，出版日期（版次）（7）技术标准：序号 发布单位.技术标准代号.技术标准名称.出版地：出版者，出版日期致 谢“致谢”字样用三号黑体，1.5倍行距，居中；下空两行（“致谢”二字之间用二个字符空格分开）说明：1、对给予各类资助、指导和协助完成研究工作以及提供各种对论文工作有利条件的单位及个人表示感谢。2、致谢应实事求是，切忌浮夸与庸俗之词。致谢中一般不用第一人称，结束时不签研究生姓名。3、致谢内容限1页以内；采用小四号宋体，1.25倍行距，两端对齐，每段首行缩进四个字符空格，标点符号用全角。附录A“附录A”字样用三号黑体，1.25倍行距，居中；下空一行附录题名附录的题名用三号黑体，1.25倍行距，居中；下空一行说明：1、主要包括论文使用的主要符号、意义、单位，正文内不便列出的冗长公式推导，供他人查阅方便所需的辅助性数学工具或表格，重复性数据图表，计算机程序及说明等。2、附录作为学位论文主体的补充部分，并不是必要的。3、论文的附录依次为“附录A”，“附录B”，“附录C”等编号。如果只有一个附录，也写成“附录A”。4、