188 Re┐HAb18F（ab）2 在荷瘤鼠体内的药代动力学.doc

188ReHAb18F（ab）2在荷瘤鼠体内的药代动力学【关键词】188,Re关键词:188Re；药代动力学；裸小鼠；单克隆抗体；肝癌摘要:目的研究188Re标记的肝癌单抗片段HAb18F（ab）2在荷肝癌裸鼠体内的药代动力学，求取药代动力学参数，建立药代动力学模型.方法5组裸鼠经尾静脉注入1.85MBq188Re-HAb18F（ab）2，在不同时间点处死裸鼠，测量血及各脏器放射性计数.用3P97药代动力学软件处理188Re-HAb18F（ab）2给药后荷瘤鼠各时间点的血液放射性浓度及各主要脏器的放射性浓度，计算药代参数.结果188Re-HAb18F（ab）2在裸鼠体内药代动力学参数分别为T1/22.29h，Vd1.49L，AUC20.49109Bq・；h・；L-1，CL0.4510-3L・；h-1.188Re-HAb18F（ab）2特异性聚集于肿瘤中，在瘤体中以较高水平维持较长时间，在正常组织中代谢较快，主要从肾脏中排泄.结论188Re-HAb18F（ab）2在荷肝癌裸鼠体内药代动力学符合线性一室模型.Keywords:188Re；pharmacokinetics；nudemice；monoclonalantibody；hepatomaAbstract:AIMToestablishthepharmacokineticmodelof188Re-HAb18F（ab）2andtoevaluateitspharmacokineticparameters.METHODSThemicewassacrificedatdifferenttimeafter188Re-HAb18F（ab）2i.v.injectedintohepatoma-bearingnudemice.Thebloodandorgansradioactivityweremeasured.Theconcentrationsof188Re-HAb18F（ab）2wereevaluatedwithapharmacokinetic3P97software.RESULTSParametersof188Re-HAb18F（ab）2wereT1/22.29h，Vd1.49L，AUC20.49109Bq・；h・；L-1，CL0.4510-3L・；h-1.188Re-HAb18F（ab）2waslocatedspeciallyinhepatomawithhighselectivereactivityofHAb18F（ab）2.188Re-HAb18F（ab）2wasmainlyeliminatedbykidney.CONCLUSIONPharmacokineticsof188Re-HAb18F（ab）2conformstoal-compartmentmodel.0引言188Re是一种新型放射性核素，其良好的核物理性质使其有望成为一种新的治疗性核素.现对188Re-HAb18F（ab）2在荷瘤鼠体内的药代动力学进行研究1，证明其是否选择性在瘤体内聚集，建立药代动力学模型，获取药代动力学参数，为188Re-HAb18F（ab）2临床治疗提供依据.1材料和方法1.1肿瘤动物模型选5周龄BALB/c裸鼠（由本校实验动物中心提供），于其右下肢根部sc人HCC（hepatocellularcarcinoma，肝细胞肝癌，由中科院上海细胞所细胞库提供）细胞1107（0.2mL），肿瘤长至直径1cm左右时待用.1.2McAb及放射性核素标记HAb18为鼠源性抗人肝细胞瘤McAb，IgG1亚型.HAb18IgG用胃蛋白酶消化法消化，经Phenyl-sepharoseHP柱（Amershampharmacia）纯化，即得纯度大于95%的F（ab）2，SDS-PAGE鉴定其相对分子质量约为11104.采取188Re直接法标记F（ab）22，即F（ab）2经2-硫基乙醇还原后，加入含有稳定剂葡庚糖酸钠的亚锡和188ReO4-，37反应23h.纸层析法测定标记率>；90%.1.3荷瘤鼠体内分布研究荷瘤裸鼠15只，随机分为5组，每组3只，每只鼠尾静脉给188Re-HAb18F（ab）21.85MBq，分别于1，4，18，24和48h各处死1组，取血及各主要脏器，称重，用-放射免疫计数仪（国营262厂医用核仪器分厂）测定单位重量各脏器中每分钟闪烁数值（cpm），求取肿瘤与非肿瘤脏器单位重量的cpm比值（T/NT）及每克脏器中摄入放射性占给药量的百分比（%ID・；g-1）.1.4药代动力学研究用3P97药代动力学软件计算血及各脏器药物浓度值，求取药代动力学参数，建立药代动力学模型.2实验结果Tab1示各时间点药物浓度值，表明其生物学分布.血药浓度经3P97软件计算，显示其符合线性一室模型，在初值拟合曲线也反映一室模型的拟合效果满意，Fig1为药代动力学曲线.血药动力学参数见Tab2.各组织半衰期（h）是:肿瘤（32.99），血（2.29），肺（5.67），骨（11.76），肌肉（9.22），小肠（7.47），大肠（15.08），胃（11.49），心脏（2.29），肝（5.67），脾（19.76），肾（11.53）.3讨论188Re发射2110kev射线，155kev射线，半衰期17h，具有良好的核物理性能，有望成为新的治疗性核素.188Re从188W-188Re发生器得到，来源方便，具有很高的放射性比活度，利于单抗标记.动物实验证实，188Re标记的肝癌单抗片段HAb18F（ab）2具有明显的抑癌效应.而有关188Re-HAb18F（ab）2在动物体内的药代动力学研究未见全面报道3，4.从Tab1中可见，188Re-HAb18F（ab）2在肿瘤中放射性以较高水平维持较长，在18h仍维持较高水平.从T/NT值中可看出，除肾脏外，其余T/NT值均较高，说明其特异性地集中于肿瘤细胞，在其他脏器中代谢较快，有利于减少其对正常组织的损伤.瘤/血比值在48h达到最高，瘤/肝比值在18h达到最高.从Tab1中还可见，肿瘤在给药后1，4和24h的放射性分别占3.83%，6.48%和9.47%，肝脏的放射性分别占1.64%，2.59%和3.19%，肾脏放射性分别占76.2%，78.8%和76.3%，这提示抗体片段及其代谢物主要经过肾脏排泄，胃、肌肉、肺、脾等分布较少5-8.188Re-HAb18F（ab）2在肿瘤组织的半衰期达32.99h，均比其他组织的半衰期长，说明188Re-HAb18F（ab）2选择性地在肿瘤部位浓聚，且衰减速度慢.这也说明单克隆抗体对肿瘤组织的特异性结合，而对正常组织的毒副作用小.血药浓度经3P97软件计算及从Fig1中可见，188Re-HAb18F（ab）2在血中代谢为线性一室模型，说明188Re-HAb18F（ab）2瞬间分布至全身，且药物浓度保持动态平衡，药物恒比规律从消除器官中消除，血液中药物浓度与消除速度成正比，药物的血浆半衰期不变.药物浓度越高，消除速度越快，药物浓度越低，消除速度越小9-12.表1188Re-HAb18F（ab）2在1，4，18，24和48h在荷肝癌裸鼠体内分布略表2188Re-HAb18F（ab）2在荷瘤鼠体内药代动力学参数略图1略188Re-HAb18F（ab）2在血液中的半衰期为2.99h，而在肿瘤中的半衰期为32.99h，放射性在肿瘤组织中减少之前，已从血中代谢一部分，使全身血液循环血中放射性减少.同时188Re-HAb18F（ab）2血液半衰期为2.29h也远小于188Re物理半衰期17h，这样188Re-HAb18F（ab）2可在体内经血液迅速消除，具有良好的临床应用价值13-15.参考文献:1JvweidM，SharkeyRM，SwayneLC.Pharmacokinetics，dosimetryandtoxicityofrhenium-188-labeledanti-carcinoem-bryonicantigenmonoclonedantibody.MN-14，ingastroin-testinalcancerJ.JNuclMed，1998；39:34-42.2BianHJ，ChenZN，LouC，MiL，WangJ，YueXL.188Re-la-beledHAb18F（ab）2ofhepatomaradioimmunoimagingJ.Zhongliu（Tumor），2000；20（3）:181-183.3Iznaga-EscobarN.188Re-directlabelingofmonoclonalantibodyforradioimmunotherapyofsolidtumors:Biodistrobution，nor-malorgandosimetry，andtoxicologyJ.NuclMedBiol，1998；25:441-447.4OlivaJ，PimentelG，PeraltaR.RadioimmunoscintigraphyofcolorectalcancerusingtheantiCEAmonoclonalantibodyBW431/26.FinalresultsJ.RevEspMedNucl，1999；18:5-15.5LanQ，HuangQ，ZhuangDL，WuYF，SunZF.StudyonthepharmacokineticsofimmunoradiotherapeuticagentS-MAbSZ39inglioma-bearingnudemiceJ.ZhongguoYaoxueZazhi（ChinPharmJ），1999；34（10）:683-686.6GeZH，LiH，LiuCH，RuanJX.Pharmacokineticsoftricyclop-inatehydrochlorideinmiceJ.ZhongguoYaolixueTongbao（ChinPharmacologicalBulletin），1998；14（4）:322-325.7FritzbergAR.Antibodypretargetedradiotherapy:Anewap-proachandasecondchanceJ.JNuclMed，1998；39:20N-36N.8DuanXD，ChenZN，BianHJ，WenAD，FengQ.Pharma-cokineticsoftechnetium-99mlabeledanti-hepatomamonoclonalantibodyHAb18anditsF（ab）2fragmentinmiceJ.Zhong-guoYaoxueZazhi（ChinPharmJ），2000；35（7）:465-467.9DickmanS.AntibodiesstageacomebackincancertreatmentJ.Science，1998；280:1196-1197.10DeNardoSJ，KukisDL，MiersLA.Yttrium-90-DOTA-peptide-chimericL6radioimmunoconjugate:Efficacyandtoxicityinmicebearingp53mutanthumanbreastcancerxenograftJ.JNuclMed，1998；39:842-849.11KairemoKJ，StrbergS，NikulaTK.Expressioinprofileofvas-clularcelladhesionmolecule-1（CD106）ininflammatoryfocius-ingrhenium-188labeledmonoclonalantibodyinmiceJ.CellAdhesCommum，1998；54:325-333.12SchmidtPF，SmithSV，BundesenPG.188ReDD-3B6/22Fabforuseintherapyofovariancancer:LabelingandanimalstudiesJ.NuclMedBiol，1998；25:639-649.13HosonoMN，HosonoM，ZamoraPO.Localizationofcolorectalcarcinomabyrhenium-188-labeledB72.3antibodyinxenograftmiceJ.AnnNuclMed，1998；12:83-88.14KramerA，AlbertoR，EgliA.Derivativesof1，3，5-triamino-1，3，5-trideox-ycis-inositolasvers