梅毒ppt课件

实验五 梅毒螺旋体抗体检测,1,实验目的,1.掌握临床 常用检测梅毒 感染的方法及 操作程序,3.了解多 种方法联合 检测梅毒 感染的 临床意义,2.熟悉两种 方法的特点,2,梅毒螺旋体感染的常用检测方法,TRUST （检测非特异抗体）,TPPA(检测特异性抗体）,ELISA (检测特异性抗体）,现症梅毒的主要指标同时是判断治疗效果、复发的指标,特异性强，准确性高，但无法判断是否为现症梅毒,敏感性高，有一定的假阳性率,不同方法具有各自的特点,梅毒感染检测,3,（一） TRUST实验,实验原理 凝集法-检测非特异性抗体,+,抗心类脂抗原,反应卡滴加血清,产生凝集现象,抗原中加入了甲苯胺红染料，因甲苯胺红颗粒均匀，结果易于观察,4,实验试剂及器材,1.实验试剂 甲苯胺红溶液重悬的类脂抗原、阳性对照血清、阴性对照血清， 2.实验器材 滴管、反应纸卡,5,操作步骤,一、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 1.试剂及待检血清室温下平衡10min 2.在样本圈内加入待检血清及阴性、阳性血清，每圈50l，尽量将血清铺匀涂满但不要超出卡圈 3.垂直向血清中心加入抗原1滴 4.旋转摇动卡片8分钟后立即观察结果,6,7,结果分析,甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 阴性：呈现粉红色均匀分散的沉淀物 阳性：出现粉红色凝集块，根据凝集块大小可以分为4个阳性级别（1+4+）,阴性,阳性,弱阳性,8,实验注意事项,稀释血清应准确及避免交叉污染 及时观察实验结果 抗体浓度过高可能发生前带现象而致假阴性,若TPPA或ELISA检测结果为阳性或弱阳性，需生理盐水稀释样本后重复实验。,9,临床意义,1.TRUST实验为梅毒螺旋体感染的血清学过筛试验，阴性不可排除感染，阳性需用特异性抗体的检测方法进行确认。 2.TRUST实验对现症梅毒的诊断具有较高价值，通过连续监测抗体滴度能够动态反映病程，此法在一期、二期梅毒的阳性率较高，与ELISA或TPPA检测结果综合分析能够更准确的诊断疾病。,10,（二） TPPA法-检测特异性抗体,明胶颗粒间接凝集实验（TPPA法),11,实验试剂及器材,1.实验试剂 血清稀释液、致敏粒子、未致敏粒子以及其相应的溶解液，阳性对照血清 2.实验器材 专用滴管、反应板、微量加样器、微量加样器吸头、移液管,12,1 2 3 4 5,未致敏颗粒,致敏颗粒,倍比稀释血清,TPPA法操作步骤,13,结果分析,TPPA间接凝集实验： 1）反应图像的判定 阴性（-）： 粒子集中于孔底呈纽扣状，呈现外周边缘均匀平滑的圆圈 弱阳性（+）：粒子形成小环状，呈现外周边缘均匀平滑的圆圈 阳性（+）：粒子环明显变大，其外周边缘不均匀且杂乱地凝集在周围。 强阳性（+）：产生均匀的凝集，凝集粒子在底部整体上呈膜状延展。,14,2）最终判定基准：未致敏粒子的反应图像应为阴性。致敏粒子（最终稀释度1:80及以上）反应图像为阳性，最终应判定为阳性。反应图像为阳性的最终稀释倍数作为抗体效价。,1:40 1:80,未致敏颗粒阴性,致敏颗粒 阳性,阳性对照,最终判断： 阳性,待检血清,15,注意事项,1.试剂及检测样品应充分混匀，及时更换加样吸头避免交叉污染。 2.实验中不能随意移动反应板，否则容易造成假阳性。 3.保证足够的反应时间、及时观察结果。 4.阳性结果用另一种方法如ELISA法复查。,16,临床意义,梅毒螺旋体感染后2周左右患者血清中即可出现特异性IgM抗体，4周左右即可检测出特异性IgG抗体，TPPA法为检测 特异性IgG抗体的较好方法之一，其阳性可以提示曾经或现 在感染梅毒，与TRUST法的检测结果综合分析对梅毒的诊断、分期及治疗效果评价具有重要价值。,17,实验讨论,梅毒血清学的联合应用对梅毒诊断有何意义？,？,18,实验讨论,TRUST法检测非特异性抗体，是现症梅毒患者实验室诊断的重要指标，但初期或晚期梅毒病人抗体浓度较低可出现假阴性，抗体浓度过高时出现前带现象也可出现假阴性，而某些疾病如自身免疫性疾病则可出现假阳性。 TRUST检测的非特异性抗体在感染1-2周即可出现，如滴度14，又具有典型的临床表现，则现症梅毒的可能性较大。 需注意TRUST检测结果阳性需谨慎对待，低滴度(14)除可能为生物学造成的假阳性外，还有可能是发病初期或使用抗生素延长了阳性血清出现的潜伏期。 TRUST滴度与病情活动呈正相关，并且可作为判定复发或再感染指征,对于高滴度者(18)应考虑为现症梅毒病人，并结合临床症状给予适当治疗。,？,19,实验讨论,ELISA检测梅毒抗体具有较高的敏感性，并可用全自动酶标仪进行批量初筛，但特异性稍差，有一定的假阳性率，采用ELISA两步法可在一定程度上提高检测结果的敏感性和可靠性。 TPPA法特异性及敏感性均较高，可作为ELISA法及TRUST法筛查的确证实验。但该方法操作复杂费时。 ELISA和TPPA两种方法检测的梅毒抗体均为特异性抗体，该抗体即使经治疗后也可终生阳性，因此不能作为评价治疗效果，复发或再感染的指标。,？,