生物学常用试剂配制.doc

常用试剂 储存注意事项：储存于阴凉、通风的地方；远离火种、热源。避免光照。室温不 超过30，相对湿度不超过80。包装必须密封，切勿受潮。应与易（可）燃物、还原剂、碱类、醇类、食用化学品分开存放，切忌混储，储区应备有合适的材料收容泄漏物。 操作注意事项：尽量在通风橱操作，加强通风，避免粉尘扩散。远离易燃、可燃物，避免与还原剂、碱类、醇类接触，防止包装及容器损坏。0.5M EDTA（PH 8.0） 组分浓度: 0.5 mol/L EDTA（MW：372.24） 配制量: 500ml 配制方法: 1称取93g Na2EDTA2H2O置于500ml蓝盖瓶中。 2加入400ml的去离子水，置于磁力搅拌器上充分搅拌。 3用NaOH调节调节pH值至8.0（约需加入20g固体NaOH），当pH 接近8.0时， EDTA方可完全溶解，加入去离子水定容至1L。 4高温高压灭菌后，室温保存半年。5M NaCl 组份浓度： 5mol/L NaCl (MW：58.5) 配制量： 1L 配制方法： 1.准确称取氯化钠292.5g，置于1L的蓝盖瓶中。 2.用去离子水溶解并稀释至1L。 3.高温高压灭菌后，常温保存。2.5M CaCl2 组份浓度：2.5mol/L CaCl2 (MW：110.98) 配制量： 50ml 配制方法: 1.准确称取氯化钙 g于50ml的conical tube中。 2.用去离子水溶解并稀释至500ml，用0.22m滤膜过滤除菌滤膜过 滤除菌到进口的conical tube。 3.贮存于4。50% 甘油 组分浓度： 50%(V/V) glycerol 配制量： 100ml 配制方法: 1. 量取下列试剂，置于250ml蓝盖瓶 中： 100% glycerol 50ml 2.加入50ml去离子水，充分搅拌溶解。 3.高温高压灭菌，4保存。 4.使用时，到超净台分装。Amp-氨苄青霉素（钠盐） 放置：置于4C冰箱 配方及配法： 配成200mg/ml的1000*溶液储存(40g溶于200ml蒸馏水中)， 溶解后在超净台用注射器过滤灭菌分装，置于-20C冰箱第二层， 以1*的终浓度（200ug/ml）加入培养基。 Kan-卡那霉素（硫酸根） 放置：置于试剂柜 配方及配法： 配成20mg/ml的1000*溶液储存(4g溶于200ml蒸馏水中)， 溶解后在超净台用注射器过滤灭菌分装，置于-20C冰箱第二层， 以1*的终浓度（20ug/ml）加入培养基。DTT（二硫苏糖醇） 放置：置于-20C冰箱顶层 配方及配法： 1M DTT的配制：溶解7.7g IPTG 于50 mL水中， 溶解后分装成1。5ml管，置于-20C冰箱第二层 使用浓度为1-10MmPMSF（苯甲基磺酰氟） 放置：试剂柜 0.1M PMSF的配制： 分子量 174.19 保存 室温保存，配成PMSF溶液后需-20保存。 配制 溶解0.87g的PMSF于足量的异丙醇中，定容到50ml。分成小份贮存于20。 工作浓度 1mM 注意：有毒，对呼吸道粘膜、眼睛和皮肤有很强的危害性，配制时请在通风橱进行，并穿实验服及戴一次性手套。10TE Buffer（pH 8.0） 组份浓度: 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA 配制量: 1L 配置方法 1. 量取下列溶液，置于1L蓝盖瓶中。 1.0M Tris-HCl Buffer（pH8.0） 100mL 0.5M EDTA（pH8.0） 20mL 2. 向蓝盖瓶中加入约800mL的去离子水，均匀混合。 3. 将溶液定容至1L，高温高压灭菌。 4. 室温保存半年。 注意：此为贮存液，使用时稀释100倍，用于PCR纯化和质粒提取后产物保存。0.5M PIPES （PH 6.7） 配制量：10 ml（MW:302.4） 配制方法： 1. 称取1.5g，加入到15 ml塑料离心管内。 2. 加8 ml的水，搅拌溶解。 3. 用5M KOH 调PH至6.7 4. 0.22um滤膜过滤，-20 保存。1.5M Tris-HCl（pH8.8） 组份浓度: 1.5 mol/L Tris-HCl 配制量: 1L 配制方法: 1.称取181.7g的Tris-base（MW：121.14）置于1L蓝盖瓶中。 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 用浓盐酸调pH值至8.8。 4. 将溶液定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，室温保存半年。1.0M Tris-HCl（pH8.0） 组分浓度: 1.0 mol/L Tris-HCL 配制量: 1L 配制方法: 1.称取121g的Tris-base（MW：121.14）于1L蓝盖瓶中， 2.加入900ml的去离子水，充分搅拌均匀， 3. 用浓盐酸调pH值至8.0，每升约需40-50ml浓盐酸，用水调整终体积至1L。如需其他PH的Tris，根据所要求的pH（25下）加一定量的浓盐酸。 4.高温高压灭菌后，室温保存半年。 注意：测PH时需使用温度补偿电极，因为温度变化对Tris的PH有很大影响。浓盐酸的体积（ml）8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 pH 9.0 8.8 8.6 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.210SDS 组份浓度: 10（W/V）SDS 配制量： 500mL 配置方法 1.称量50g高纯度的SDS置于500mL蓝盖瓶中，加入约400mL的 去离子水，68加热溶解。 2.滴加数滴浓盐酸调节pH值至7.2。 3.将溶液定容至500mL后，室温保存。 注意： SDS为固体粉末状，吸入会对肺造成损害，应在通风橱中称取SDS。 溶解时，SDS易产生气泡，不要剧烈搅拌。30APS （过硫酸铵） 组份浓度： 30（W/V）APS 配制量： 1mL 配制方法： 1.准确称取0.3g APS。 2.加入0.8mL的去离子水溶解。 3.贮存于4。 注意：30的过硫酸胺溶液在4保存时间可使用2周左右，超过期限会失去 催化作用。10SDS-PAGE Running Buffer 配制量： 1L 配制方法：1称量下列试剂,置于1L蓝盖瓶中。 Tris 20g; Glycine 144 g; 10% SDS 100 ml 2加入约700 ml的去离子水搅拌溶解。 3定容至1L，混匀，室温保存。50X TAE Buffer （pH8.5） 组分浓度：2M Tris-base，100mM EDTA, 1M冰乙酸 配制量： 1L 配制方法：1、称取下列试剂，置于1L蓝盖瓶中： Tris-base 242.2g; 0.5M EDTA(PH8.0) 200ml 2加入约600ml的去离子水，充分搅拌溶解，再加入57.1ml的冰乙 酸，混合均匀。 3、加去离子水将溶液定容至1L。 4、高温高压灭菌后，室温保存半年。6X DNA Loading Buffer（Agarose） 组分浓度：0.09（W/V）溴酚蓝 0.09（W/V）xylene cyanol FF, 60% glycerol, 60mM EDTA配制量： 50ml 配制方法：1.称取下列试剂，置于50ml离心管中： 溴酚兰 0.125g 2.向离心管中30ml去离子水，加热充分溶解。 3.加入15ml甘油，最终用去离子水定容至50ml，混匀，室温保存。 4.使用时，分装1ml一管，加入 ,4保存。5X loading buffer (蛋白) 1 称量下列试剂置于10ml 塑料离心管中。1