肺气肿胶囊中的槲皮素和山柰素的含量测定.doc

肺气肿胶囊中的槲皮素和山柰素的含量测定肺气肿胶囊中的槲皮素和山柰素的含量测定作者：袁斌， 欧阳臻 ，缪亚东 ，江涛涛 ，沈绛英【关键词】 肺气肿胶囊；高效液相色谱法；槲皮素；山柰素摘要：目的建立肺气肿胶囊中槲皮素和山柰素含量测定方法 。方法采用高效液相色谱法，使用C18柱，流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液（6040），检测波长为370 nm，流速为0.6 ml/min。结果槲皮素和山柰素分别在0.0080.06 g和0.006 880.0516 g范围内呈良好线性关系，平均回收率分别为97.34%和97.72%，RSD分别为2.4%和1.3%（n=5）结论该方法灵敏准确，重现性好，专属性强，可作为肺气肿胶囊的质量控制。关键词：肺气肿胶囊； 高效液相色谱法； 槲皮素； 山柰素Determination of Quercetin and Kaempferol in Feiqizhong Capsules Abstract：ObjectiveTo establish a method to determine the content of quercetin and kaempferol in Feiqizhong Capsules.MethodsHPLC was used to determine the content of quercetin and kaempferol with detection wavelength at 370nm. The mobile phase consists of a mixture of methanol-0.4%H3PO4(6040). The flow rate was 0.6ml/min. ResultsThe linear regression for quercetin and kaempferol was obtained at the range of 0.0080.006g and 0.006 880.051 6 g. The average recovery of quercetin and kaempferol were 97.34% and 97.72%, RSD were 1.3% and 1.7% respectively(n=5). ConclusionThe method is sensitive, accurate, reproducible and exclusive. It can be used for quality control of Feiqizhong Capsules.Key words：Feiqizhong Capsules； HPLC； Quercetin； Kaempferol 肺气肿胶囊是由野马追等药材经过科学提取并加入适量辅料而制成的硬胶囊，具有补肾益气、活血化瘀、止咳祛痰的功效，主要用于治疗肺肾亏虚，血行不畅，痰浊阻肺所引起的胸闷憋气，动辄喘乏，咳嗽痰多，慢性气管炎，阻塞性肺气肿等证候。其治疗肺气肿的主要有效成分为黄酮类化合物，文献1报道黄酮类化合物具有降低血管脆性及异常通透性，能够扩张血管和降低血脂与胆固醇的作用，抑制血栓形成，同时还具有止咳、祛痰平喘的作用。为控制其质量采用测定水解苷类后的槲皮素和山柰素的含量。文献2报道槲皮素和山柰素的含量测定方法有紫外-可见分光光度法、荧光光度法、薄层扫描法等。本实验采用高效液相测定水解后的槲皮素和山柰素的含量为其质量控制的指标。1 仪器与材料1 仪器AG 135型电子天平（瑞士梅特勒）；Waters 2695高效液相色谱仪，Waters 2996 DAD检测器；Empower工作站；SK250 LH超声波清洗器（上海科导超生仪器有限公司）。2 试剂与样品槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号081-9003），山柰素对照品（中国药品生物制品检定所，批号0861-200002）；甲醇（色谱纯），超纯水；盐酸，磷酸均为分析纯；肺气肿胶囊（江苏707制药公司，批号050306，050307，050308，050309，050402）。2 方法与结果2.1 色谱条件 Kromasil-C18柱（4.6 mm250 mm，5 m）；流动相：甲醇-0.4%磷酸（60：40）；流速：0.6 ml/min；柱温：30； 检测波长：370 nm；进样量：10 l。在上述色谱条件下，样品中指标成分均能达到基线分离。槲皮素峰保留时间为.3 min，山柰素峰保留时间为17.4 min。理论塔板数以槲皮素峰计算为3 000。2.2 对照品溶液的配制精密称取经五氧化二磷减压干燥24 h的槲皮素对照品和山柰素对照品适量，加甲醇制成浓度分别为4和3.44 g/ml的对照品混合溶液。2.3 供试品溶液的制备取本品装量差异下的内容物，研细，混匀，精密称取1 g, 置具塞锥形瓶中，加三氯甲烷30 ml超声处理40 min，滤过，弃去三氯甲烷液，药渣挥干，再精密加入80%甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，滤过，精密吸取续滤液25 ml，加20%盐酸5 ml，水浴回流30 min，取出，迅速冷却，用流动相定容至50 ml量瓶中，摇匀，取样，用滤膜（0.45 m）滤过，即得。2.4 线性关系考察精密吸取2.2项下的对照品溶液2，4，6，8，10，15 l，注入液相色谱仪，测定。以进样量 C为横坐标，以峰面积 A为纵坐标，进行线性回归处理，得回归曲线：槲皮素：A=6 101 400 C-9 103.3 ( r=0.999 2)；山柰素： A=6 835 900 C- 408 ( r=0.999 4)，结果槲皮素和山柰素线性范围分别为0.0080.06 g和0.006 880.051 6 g。2.5 精密度实验