课件：ALB测定课件.ppt

实验二 双缩脲法测定血清或血浆总蛋白（TP） 溴甲酚绿法测定血清或血浆白蛋白（ALB）,临床生化教研室 刘素兰 雷燕,（一）双缩脲法测定血清或血浆总蛋白,掌握：双缩脲法测定血清或血浆总蛋白的基本原理及操作 熟悉：血清或血浆总蛋白测定的临床意义 了解：双缩脲法测定血清或血浆总蛋白的特点及注意事项,【目的】,【原理】-血清或血浆总蛋白测定 所有蛋白质都含有肽键（-CO-NH-)。在碱性溶液中，肽键与铜离子结合，生成稳定的紫红色络合物。根据紫红色络合物在540nm的吸光度在一定范围内与蛋白质的含量呈正比关系，经与同样处理的蛋白标准液比较，即可以求得蛋白质含量。,双缩脲法 优点： 操作简便、快速 、试剂单一、显色稳定。 不同的蛋白质产生颜色的深浅相近。 干扰物质少。 特异性、准确性较好、精密度好(RCV为4CCV3.9 )。,灵敏度较低(检出限为0.21.7g/L)。 灵敏度虽不高，但已能满足临床生化检验的需要，是临床测定血清或血浆总蛋白的首选常规方法,缺点：,【材料】, 器材 半自动生化分析仪、水浴箱、 试管架、洗耳球、5ml刻度吸管、15*100mm试管、微量加样器,试剂 双缩脲试剂 硫酸铜 12.0 mmol/L 酒石酸钾钠 64.0 mmol/L 碘化钾 6.0 mmol/L 氢氧化钠 200 mmol/L,总蛋白标准液 56.5 g/L 混合血清或血浆样本（样品1和样品2）,【标本】,双缩脲法测定血清或血浆总蛋白操作歩骤 加入物(ml) U1-2 S1 B1 待检血清或血浆 0.025 总蛋白标准液 0.025 纯水 0.025 双缩脲试剂 1.5 1.5 1.5 混匀，置2530分钟或3710分钟，用半自动生化分析仪在波长540nm处比色，用蒸馏水调零，读取校准管和测定管的吸光度值并记录。,【操作歩骤】,血清或血浆总蛋白（/L）,【结果计算】,【报告方式】 血清或血浆(浆)总蛋白： . g/L,【注意事项】 1.黄疸血清或血浆、严重脂血、溶血；葡萄糖、酚酞及溴磺酞钠对本法有明显干扰。 2.蛋白质的浓度单位用“g/L”。 3.吸光度的大小与试剂的组分、pH、反应温度有关。 4.双缩脲试剂中各成分的作用： 碱性酒石酸钾钠：与铜离子(Cu2+) 形成络合物并维持铜离子在碱性溶液中的 稳定性 ；碘化钾：抗氧化剂（KI-防止碱性酒石酸铜自动还原并防止Cu20的沉淀)。,【临床意义】 1.血清或血浆总蛋白浓度降低 (1)蛋白质合成障碍：主要是肝功疾病。 (2)蛋白质丢失增加：严重烧伤、大出血、肾病综合征。 (3)营养不良或消耗增加：长期食物中蛋白质含量不足或慢性肠道疾病引起的吸收不良；长期消耗性疾病，严重结核病、甲亢、恶性肿瘤等。 (4)血浆稀释：各种原因引起的水钠潴留。,2.血清或血浆总蛋白浓度增高 (1)蛋白合成增加 ：如多发性骨髓瘤。 (2)血浆浓缩：凡体内水分的排出大于水分的摄入时，均可引起血浆浓缩。,（二）溴甲酚绿法测定血清或血浆白蛋白,2019/8/5,17,可编辑,掌握：溴甲酚绿法测定血清或血浆白蛋白的原理及操作 熟悉：血清或血浆白蛋白测定的临床意义 了解：溴甲酚绿法测定清白蛋白的特点及注意事项,【目的】,【原理】 白蛋白在pH 4.2的缓冲液中带正电荷，在有非离子型表面活性剂存在时，可与带负电荷的染料溴甲酚绿（BCG）结合形成蓝绿色复合物，在波长630nm处有吸收峰，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比例，与同样处理的白蛋白标准比较，可求得白蛋白含量。,BCG法 优点： 操作简便、快速、试剂单一。 白蛋白具有与阴离子染料BCG（或BCP）结合而球蛋白基本不结合的特性。 干扰物质少(溶血、胆红素、中度脂血无干扰)。 特异性、准确性较好、精密度好（RCV4） 是目前临床测定血清或血浆白蛋白最用的常规方法。,【材料】,器材 半自动生化分析仪、水浴箱、 试管架、洗耳球、5ml刻度吸管、15*100mm试管、微量加样器,试剂 BCG试剂 pH4.2琥珀酸缓冲液 10mmol/L 溴甲酚绿 16umol/L 叠氮钠 0.50mmol/L Brij-35（聚氧化乙烯月桂醚） 0.125g/L,白蛋白标准液 52.5 g/L 样品号（样品1和样品2）,【标本】,BCG法测定血清或血浆白蛋白操作歩骤 加入物(ml) U1-2 S2 B2 待检血清或血浆 0.01 白蛋白标准液 0.01 纯水 0.01 BCG试剂 2.0 2.0 2.0 混匀，用半自动生化分析仪立即在波长630nm处比色，用蒸馏水调零，读取校准管和测定管的吸光度值并记录。,【操作歩骤】,血清或血浆白蛋白（/L）,【结果计算】,【报告方式】 血清或血浆(浆) 白蛋白： . g/L,【注意事项】 1.控制反应液的pH是本法测定的关键。试剂混浊，pH范围超过4.1-4.3，试剂不能用。 2.BCG与白蛋白的反应强度和环境温度有关。 3.由于在30s内呈色对白蛋白特异（快反应），BCG与血清或血浆混合后，在30s读取吸光度，可明显减少非特异性呈色反应。 4.叠氮钠有防腐的作用；聚氧化乙烯月桂醚（Brij-35） 可提高蛋白质与染料的结合力及溶解度，提高呈色的稳定性，也可用其他表面活性剂，灵敏度和线性范围不变。,【临床意义】 1.血清或血浆白蛋白浓度增高 常见于严重脱水所致的血浆浓缩。 2.白蛋白浓度降低 在临床上比较重要和常见，通常与总蛋白降低的原因大致相同。急性降低主要见于大出血和严重烧伤；慢性降低见于肾病蛋白尿、肝功能受损、肠道肿瘤及结核病伴慢性出血、营养不良和恶性肿瘤等。血清或血浆白蛋白低于20gL，临床上出现水肿。,3.AG比值：某些病人可同时出现白蛋白减少和球蛋白升高的现象，严重者AG比值1.0，这种情况称为AG比值倒置。,举例：ALB测定操作顺序如下： 第一步：准备试管三支，分别标明 (ALBU1-U2、S2、B2) 第二步：分别加待检血清或血浆0.01ml于U1、U2中 第三步：加ALB校准液0.01ml于S2中 第四步：加纯水0.01ml于B2中 第五步：在ALbU1、U2、S2、B2每一管 中各加试剂2ml 第六步：将各管分别混匀 第七步：立即比色 第八步：比色(B管调零)。（ALB-630nm) 第九步：记录A值 第十步： 记算 第十一步：报告结果,思考题,1.何为双缩脲反应或试剂？其各组分的作用？ 2.总蛋白