王凯喆毕业论文初稿1

石河子大学毕业论文题目：地区市售部分动物产品中盐酸克伦特罗和磺胺类药物残留情况的调查与分析院 （系）： 动物科技学院 专 业： 动物医学 学 号： 2010513142 姓 名： 王 凯 喆 指导教师： 李 劼 （副教授） 完成日期： 2014年5 月 10日 某地区市售部分动物产品中盐酸克伦特罗和磺胺类药物残留情况的调查与分析学生：王凯喆 导师：李劼摘 要：用ELISA法对某地区市售部分动物产品中盐酸克伦特罗和磺胺类药物残留检测，抽取猪肝40份，鸡肝20份，鸡肉20份。结果表明：盐酸克伦特罗猪肝阳性样品40个，阳性率为100%，残留量浓度范围在0.32g/kg0.65g/kg；磺胺七合一猪肝阳性样品40个，阳性率为100%，残留量浓度范围在0.8022.40g/kg，鸡肝阳性样本20个，阳性率为100%，残留量浓度范围在1.303.30g/kg鸡肉阳性样本20个，阳性率为100%，残留量浓度范围在,1.403.40g/kg。关键词：猪肝；鸡肝；鸡肉；克伦特罗；磺胺；ELISA前言：随着养殖业的集约化、规模化发展，各种动物疫病不断暴发，养殖场为预防和控制动物疫病，大量使用各种兽药。滥用兽药和非法使用违禁药物的现象时有发生，严重影响了畜禽产品的质量和食品安全。因此，开展兽药残留的检测与调查，对于提高人民健康水平，加强畜禽产品的市场竞争力有着重要意义，也为兽药残留的科学研究提供了基础性资料。盐酸克伦特罗（Clenbuterol，简写 CL），是一种受体激动剂，具有松弛气管平滑肌作用，用于治疗哮喘，所以盐酸克伦特罗又称氨哮素、克喘素。20世纪80年代初，科学家发现盐酸克伦特罗进入体内后，可明显促进动物生长，并增加瘦肉率，所以又称其为“瘦肉精”。但因其在动物体内代谢缓慢，人食用含有盐酸克伦特罗的畜产品，可引起蓄积中毒，导致呕吐、心跳骤然加速等异常生理反应，严重者会造成死亡，因此我国禁止使用4。畜产品中盐酸克伦特罗残留检测的主要方法有液相色谱 - 质谱法（LC/MS）、气相色谱 -质谱法（GC/MS）、高效液相色谱法（HPLC）、毛细管区带电泳法（CE）、酶联免疫吸附法（ELISA）、胶体金免疫层析法（GICA）等 6 种方法。ELISA、GICA 是农业部发布的盐酸克伦特罗定性和半定量检测方法。 磺胺药物( SAs) 是一类广泛使用的预防性和刺激动物生长(常作饲料添加剂)的抗生素。由于磺胺类药物抗菌谱较广、价格低廉、性质稳定、使用方便，至今仍是畜禽抗感染治疗中的重要药物之一。临床上常用的有20多种，磺胺药物通过各种给药途径进入动物体后，如果使用不当，可造成药物在动物组织中的残留，并可转移到肉蛋乳等各类动物性食品中。一方面，残留的药物可能对人的健康造成潜在的危害，主要表现在细菌的耐药性过敏反应与变态反应致癌致畸致突变等作用；另一方面，兽药残留问题也是目前动物性食品贸易中的主要障碍6。 本次试验采用酶联免疫吸附剂测定（enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA）对石河子地区上市的肉类产品中的盐酸克伦特罗、磺胺类药物含量进行了定量分析，首次揭示了石河子地区肉类产品中盐酸克伦特罗、磺胺类药物的残留现状，为消费者的食用安全及食品质量监控部门提供了重要的科学参考资料。1 材料与方法1.1材料于2013年6月在玛纳斯县农贸市场，随机采集猪肝组织，每个样品200g左右，鸡肝组织，鸡肉组织，装入采样袋中，做好标记后，放入-18的冰箱备用。1.2方法用酶联免疫试剂盒(ELISA法)对样品进行CLB快速检测，再处理分析数据。1.2.1试剂与仪器克伦特罗（Clenbuterol）ELISA检测试剂盒（北京秦邦生物技术有限公司）、磺胺“七合一”ELISA检测试剂盒（北京秦邦生物技术有限公司）电子分析天平、酶标仪(DNM-9602)、MTN-2800W氮吹仪、Anke TGL-16GB离心机等。1.2.2检测步骤1.2.2.1样品制备称取2.00.5g均质后的肝脏组织样本至50ml的聚丙乙烯离心管中，加入4ml2%NaCl-0.2 mol/L HCl-甲醇混合液，震荡30s，16000r/min，室温离心5min。取0.5ml上清液加入20ul 0.5mol/L氢氧化钠，再加入0.5ml复溶工作液混匀，取20ul用于分析。1.2.2.2操作步骤 所需试剂从冷藏环境中取出，回温。选取适当微孔中分别加入20l标准溶液(0，0.05，0.15，0.45，1.35和4.05ppb)；在另外的微孔中加入20l已完成前处理的样品溶液；将抗体工作液和酶标二抗浓缩液按10：1体积混匀，加入80ul/孔，轻轻震荡混匀，用盖板膜盖板后置于25避光环境中反应30min。洗版，小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用去离子水250ul/孔充分洗涤4-5次，每次间隔10s中用吸水纸拍干（拍干后未被清楚的气泡可用未使用的枪头戳破）。显色，加入底物A液50ul/孔，再加入底物B液50ul/孔，轻轻震荡混匀，用盖板膜盖板后置于25避光环境中反应10min；测定，加入终止液50ul/孔，轻轻震荡混匀，设定酶标仪于450nm处（使用450/630nm双波长检测，在5min中内读完数据），测定每孔OD值。磺胺七合一检测试剂盒检测方法类同，详见说明书。1.2.2.3标准曲线制作及检样计算以标准品百分吸光率为纵坐标，以克伦特罗标准品浓度（ppt）的对数为横坐标，制作标准曲线(见图1)。在标准曲线中查找相应的浓度对数值，再换算成浓度，乘以其对应的稀释倍数6，得到待检样品中克伦特罗浓度的浓度。 图1 克伦特罗标准曲线 =450nm以标准品百分吸光率为纵坐标，以磺胺类药物标准品浓度（ppt）的对数为横坐标，制作标准曲线(见图2)。在标准曲线中查找相应的浓度对数值，再换算成浓度，乘以其对应的稀释倍数1，得到待检样品中磺胺类药物浓度的浓度。图2磺胺七合一标准曲线 =450nm1.3 统计分析用RIDAWIN计算软件，计算出待检样品中克伦特罗和磺胺类药物的浓度。再用Excel软件作样品浓度图，并作样品浓度分布柱形图。2 结果与分析图3 磺胺类药物残留检测结果样本类型总数抽样数阳性数合格率猪肝1004040100%鸡肝502020100%鸡肉502020100%图5 克伦特罗残留检测结果样本类型总数抽样数阳性数合格率猪肝1004040100%3 讨论致 谢本文是在李劼老师的悉心指导下完成的。从选题、试验设计、试验操作、论文的撰写与修改等每一个细节中无不凝聚着李老师的心血，李劼老师科学严谨的治学态度、敏锐的科学思维，积极创新的精神和为人和蔼可亲的品格、一丝不苟的工作作风和她的言传身教将使我终身受益，激励我今后更加努力学习和工作，踏踏实实地做好每件事。同时，也感