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PTEN和PCNA在子宫内膜癌组织中的表达【摘要】 目的 探讨抑癌基因PTEN及增殖细胞核抗原(PCNA)在子宫内膜癌中的表达及临床意义。方法 应用免疫组化SP法检测PTEN和PCNA在18例正常增生期子宫内膜(正常组)、21例子宫内膜不典型增生(癌前病变组)和22例子宫内膜腺癌(内膜癌组)中的表达。结果 正常组、癌前病变组及内膜癌组PCNA表达分别为61.1%(11/18)、71.4%(15/21)和95.5%(21/22)，3组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)；各组子宫内膜组织中PTEN表达分别为：正常组88.9%(16/18)、癌前病变组71.4%(15/21)、内膜癌组27.3%(6/22)，3组间比较，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PCNA表达增强可能是子宫内膜癌在分子水平上的早期变化，PTEN表达减弱可能与子宫内膜腺癌的发生、发展密切相关，二者对早期诊断子宫内膜癌有一定意义。 【关键词】 子宫内膜癌；PCNA；PTEN子宫内膜癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一。肿瘤细胞最基本的生物学特征是无限制的增生,增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)是细胞DNA合成期必不可少的因子，其表达状况可以反映肿瘤细胞的增殖活性。抑癌基因PTEN突变或缺失及蛋白表达异常与多种肿瘤的发生、发展密切相关。本研究通过检测正常子宫内膜、不典型增生子宫内膜和子宫内膜癌PTEN、PCNA蛋白的表达水平，探讨其在子宫内膜癌早期诊断中的意义。1 材料与方法1.1 标本来源及分组实验分3组，均选自西安交通大学第二附属医院2001年9月至2003年9月手术切除并经病理证实的存档蜡块。其中子宫内膜癌组22例，患者年龄37-61岁，平均(46.510.9)岁，术前均未接受化疗、放疗及激素治疗；癌前病变组选取子宫内膜不典型增生21例，患者年龄31-50岁，平均(41.97.3)岁；正常增殖期子宫内膜组18例，患者年龄30-48岁，平均(40.46.4)岁。1.2 试剂及方法PTEN和PCNA多克隆抗体购自北京中杉试剂公司。免疫组化采用SP法。主要实验步骤为：组织切片脱蜡至水，微波抗原修复(100，15min)，过氧化氢清除内源性过氧化物酶活性，正常羊血清阻断非特异性染色，依次加抗(PTEN 150；PCNA 1100)、生物素标记的抗和酶标链霉亲和素孵育，DABH2O2显色。阴性对照采用PBS缓冲液代替抗；阳性对照PCNA应用已知阳性子宫内膜癌组织，PTEN应用已知阳性的扁桃体组织。1.3 结果判断免疫组化阳性反应产物为棕黄色或黄色颗粒，PCNA和PTEN均以细胞核中有棕黄色或黄色颗粒为阳性细胞。参照McCarty KS的评分标准1，对子宫内膜的PCNA和PTEN染色进行组织学评分，组织学评分(H)=染色强度(I)阳性比例(P)。染色强度分为0-3级：不着色为0 级，黄色为1级，棕黄色为2级，黄褐色为3级，2级以上视为阳性；阳性比例为随机选取10个高倍视野，每个视野随机选取100个腺体细胞，计数棕黄色和黄褐色的细胞占所选腺体细胞总数的比例。1.4 统计学分析实验结果应用美国统计软件SPSS12.0分析，组织学评分用(s)表示。采用2检验分析各组染色强度之间的差异，采用方差分析检验阳性表达率之间及组织学评分之间的差异，P<0.05为有统计学意义。2 结 果2.1 各组子宫内膜组织中PCNA的表达PCNA阳性细胞为细胞核呈棕黄色。PCNA在正常增殖期子宫内膜组织中表达阳性率最低(61.1%；11/18)，在非典型增生组织中增高(71.4%；15/21)，在子宫内膜癌组织中明显增强(95.5%；21/22)。3组PCNA表达的组织学评分逐渐增大，有显著性意义(P<0.05，表1)。表1 各组子宫内膜组织中PCNA蛋白表达情况（略）2.2 各组子宫内膜组织中PTEN的表达PTEN阳性细胞为细胞核显示棕黄或棕褐色，PTEN在正常增殖期子宫内膜组织中表达增强，阳性率最高(88.9%；16/18)，在非典型增生组织中表达降低(71.4%；15/21)，在子宫内膜癌组织中(27.3%；6/22)明显低于正常内膜组(表2)。3组PTEN表达的组织学评分逐渐降低，有显著性意义(P<0.01，表2)。表2 各组子宫内膜组织中PTEN蛋白表达情况（略）3 讨 论细胞的恶性转化是一个多因素影响、多基因调控的复杂过程，其基因突变和表达异常常早于形态学改变。PTEN定位于10号染色体10q23.3区，位于细胞核，可调控细胞周期诱导细胞凋亡调节细胞迁移浸润整合素介导的细胞铺展及局部黏附的形成等。若PTEN基因发生突变基因同源性丢失启动子甲基化表达缺失等可使其功能异常。Mutter等1用免疫组化法研究了33例子宫内膜样腺癌，发现97%的病例出现不同程度的PTEN表达降低，其中61%的病例PTEN蛋白表达缺失。说明在子宫内膜癌中，PTEN是突变率最高的一种基因，是子宫内膜癌发生的早期事件。Mutter等也测得PTEN基因的突变率在子宫内膜癌为83%(25/30)，子宫内膜癌前病变为55%(16/29)，正常子宫内膜为0。Kanamori2对103例子宫内膜癌患者研究发现，36%PTEN蛋白表达丢失，15%表达下降。本研究发现PTEN蛋白阳性表达率在子宫内膜癌、不典型子宫内膜癌、正常子宫内膜中分别为27.3%、71.4%、88.9%。虽然各家报道有差异，但其规律相一致，推测PTEN蛋白表达可能是调控正常子宫内膜生长的必要因素之一。PTEN蛋白表达的下降或缺失，与子宫内膜癌的发生、发展密切相关，可导致细胞增殖失控，可能是子宫内膜癌发生的早期事件，有望作为预测子宫内膜癌的一种指标。PCNA是DNA多聚酶的辅助蛋白，在DNA复制中起重要作用，其表达的强弱可反映细胞增殖的程度。Xie等3研究发现子宫内膜复杂性不典型增生的患者，PCNA表达高者发生子宫内膜癌的几率大。Chen等4研究发现在子宫内膜增生过长及子宫内膜癌中PCNA的阳性表达率分别为30%和82.4%，PCNA指数有显著差异(P<0.01)。史惠荣等5报道，PCNA在子宫内膜癌中阳性表达率为87.9%，高于正常子宫内膜(40%)和子宫内膜增生过长(65%)。本研究结果显示PCNA在正常子宫内膜、不典型增生内膜、子宫内膜癌组织中的表达分别为61.1%、71.4%和95.5%，略高于以上研究结果，可能与样本量较少有关。说明PCNA在子宫内膜癌的发生、发展的早期起着重要作用。【参考文献】 1Mutter GL, Lin MC, Fitzgerald JT, et al. Altered PTEN expression as a diagnostic marker for the earliest endometrial precancers J. J Natl Cancer Inst, 2000, 92(11):924931.2Kanamori Y, Kigawa J, Itamochi H, et al. Correlation between loss of PTEN expression and Akt phosphorylation in endometrial carcinoma J. Clin Cancer Res, 2001, 7:892895.3Xie X, Lu WG, Ye DF, et al. The value of curettage in diagnosis of endometrial hyperplasia J. Gynecol Oncol, 2002, 84(1):135139. 4Chen YP, Shen M, Chen C. Study on expression of PCNA and estroge