Ecadherin和βcatenin蛋白的表达与胃黏膜肠上皮化生及胃癌的关系.doc

E-cadherin和-catenin蛋白的表达与胃黏膜肠上皮化生及胃癌的关系 作者：郑瑶张建平刘凤军杨京彦王琳【摘要】 目的：探讨E-cadherin和-catenin蛋白的表达与胃黏膜肠上皮化生及胃癌的关系。方法：观察肠上皮化生的胃黏膜形态特点，应用免疫组织化学Envision法分别检测30例单纯肠上皮化生，38例不典型肠上皮化生和55例胃癌组织中E-cadherin和-catenin蛋白的表达。结果：E-cadherin和-catenin蛋白在胃癌组织中的减少表达率显著高于单纯肠上皮化生组织（P<0.05），而与不典型肠上皮化生组织比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论： E-cadherin和-catenin蛋白参与了胃黏膜从肠上皮化生到胃癌的转化过程，不典型肠上皮化生与胃癌关系密切，属于癌前病变范畴。 【关键词】 肠上皮化生胃肿瘤钙粘着糖蛋白类连环素【ABSTRACT】 Objective: To study the relationship of expressions of E-cadherin and -catenin proteins and gastric mucosa intestinal metaplasia and gastric carcinoma. Methods: The immunohistochemical Envision method was used to determine the expressions of E-cadherin and -catenin in 30 cases of simple intestinal metaplasia （SIM）, 38 cases of atypia intestinal metaplasia （AIM） and 55 cases of gastric carcinoma. Results: The reduced expression rates of E-cadherin and -catenin in gastric carcinoma were significantly higher than that in SIM（P<0.05）, while there were no significant differences between AIM and gastric carcinoma （P>0.05）. Conclusion: E-cadherin and -catenin proteins take part in the transformation from intestinal metaplasia to car cinoma in gastric mucosa, AIM is a kind of precancerosis of gastric carcinoma.肠上皮化生（以下简称肠化）是指正常胃黏膜上皮细胞在一定条件下转化为肠型上皮细胞，是胃黏膜的常见病变。1966年，Lauren将胃癌分为肠型和弥漫型2类，并认为肠化与肠型胃癌的发生有关1。E-cadherin是存在于正常上皮细胞中的细胞粘附分子，与-catenin形成复合体从而发挥细胞间粘附作用，其表达的减少或下调与肿瘤的发生与分化密切相关。本研究根据上皮细胞形态及上皮结构将肠化分为单纯肠化（simple intestinal metaplasia，SIM）和不典型肠化（atypical intestinal metaplasia，AIM）2，通过检测E-cadherin与-catenin蛋白的表达情况，探讨2种肠化与胃癌的关系。1资料与方法1.1一般资料收集2005年1月2006年12月山东大学齐鲁医院病理科肠化患者68例。其中SIM 30例，男21例，女9例，平均年龄56.4岁；AIM 38例，男27例，女11例，平均年龄58.5岁。胃癌55例（肠型胃癌37例，弥漫型胃癌18例），男38例，女17例，平均年龄59.6岁。肠化病例均来自胃炎活组织检查标本，胃癌病例来自外科手术切除标本，所有病例均经过病理组织学检查确诊。1.2方法所有石蜡标本4 m连续切片，分别作HE和免疫组织化学染色。常规HE染色，观察胃黏膜肠化的病理形态。单克隆抗体E-cadherin、-catenin及PV9 000检测试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。免疫组织化学染色采用Envision法。切片脱蜡至水，PBS（pH=7.27.4）冲洗3次，3 min/次；EDTA（pH=9.0）和枸橼酸（pH=6.0）分别微波修复组织抗原，98 、15 min；PBS冲洗3次，3 min/次；内源性过氧化物酶阻断剂（试剂A）室温10 min，PBS冲洗3次，3 min/次；一抗E-cadherin和-catenin 4 过夜孵育，复温40 min，PBS冲洗3次，3 min/次；聚合酶辅助剂（试剂B），室温下20 min，PBS冲洗3次，3 min/次；滴辣根酶标记羊抗兔小鼠IgG多聚合体（试剂C），室温30 min；新鲜配制的DAB显色，在显微镜下观察终止显色；苏木精复染，中性树胶封片，光学显微镜下观察。以PBS代替一抗作为阴性对照。1.3结果判断E-cadherin与-catenin阳性染色为细胞膜出现黄色或棕黄色颗粒，计数5个高倍镜视野100个细胞中阳性细胞所占比例，细胞膜阳性染色50%定为减少表达，50%定为保留表达3。1.4统计学处理采用SPSS13.0统计软件包进行分析，不同胃黏膜病变组织中E-cadherin和-catenin减少表达率的比较采用2检验。P0.05为差异有统计学意义。2结果2.1E-cadherin在SIM、AIM及胃癌组织中的表达E-cadherin在SIM、AIM及胃癌组织中的减少表达率分别为40.00%，65.79%和74.55%。在SIM组织与胃癌组织中的表达差异有统计学意义（P0.05），在AIM组织与胃癌组织中的表达差异没有统计学意义（P0.05，表1，图1）。E-cadherin在肠型胃癌组织中的减少表达率为59.46%（22/37），在弥漫型胃癌组织中的减少表达率为100%（18/18），二者比较差异有统计学意义（P0.05）。2.2-catenin在SIM、AIM及胃癌组织中的表达-catenin在SIM、AIM及胃癌组织中的减少表达率分别为46.67%，68.42%和76.36%。在SIM组织与胃癌组织中的表达差异有统计学意义（P0.05），在AIM组织与胃癌组织中的表达差异无统计学意义（P0.05，见表1，图2）。-catenin在肠型胃癌组织中的减少表达率为70.27%（26/37），在弥漫型胃癌组织中的减少表达率为83.33%（15/18）。二者比较差异无统计学意义（P>0.05）。3讨论胃癌的早期诊断和治疗是提高存活率的主要手段。虽然纤维胃镜已在临床上普及，但早期胃癌的检出率并没有得到很大的提高。胃癌前病变的研究是目前胃癌防治最为活跃的领域4。肠化被多数学者认为是胃癌的癌前病变，尤其是肠型胃癌与肠化密切相关1。E-cadherin是一种钙依赖性细胞粘附分子，存在于正常上皮细胞中以维持组织正常形态，其基因定位于16q22.1染色体上，含细胞外区、跨膜区及胞浆区3部分5，在胚胎发育、形态学发生以及成年组织中上皮极性和完整性的维持等方面起着重要的作用。E-cadherin作用的发挥离不开连环素（catenin），连环素是介于细胞骨架与E-cadherin之间的蛋白分子，与E-cadherin形成粘附复合物，在Ca2+作用下共同调节上皮细胞之间的粘附6。E-cadherin对维持细胞完整性，防止肿瘤细胞离散、脱落起着很重要的作用。Krishnadath等7发现E-cadherin和-catenin在食管腺癌组织中表达下降，分别为74%和72%，而正常食管上皮中二者无表达下降，表明E-cadherin系统与肿瘤的发生、分化及浸润密切相关。本研究结果显示，E-cadherin与-catenin的减少表达率在SIM、AIM和胃癌组织中逐渐上升，并且胃癌组明显高于SIM组，而与AIM组比较差异无统计学意义。提示从SIM到AIM再到胃癌的过程，胃黏膜上皮细胞逐渐丧失其正常完整性与极性，从而发生恶性转化；并且AIM与胃癌关系密切，已具有一定的恶性潜能。E-cadherin与-catenin的表达降低或下调往往在分化差的肿瘤组织中更易见到，进一步证实了AIM的癌前病变本质。由此推测SIM仅仅是对外界环境刺激的一种适应性改变，而AIM已属于癌前病变范畴，与SIM相比已经有了质的改变。另外，本研究发现E-cadherin与-catenin在弥漫型胃癌组织中的减少表达率均高于肠型胃癌，且E-cadherin在弥漫型胃癌组织中的减少表达率显著高于肠型胃癌（P0.05），而-catenin在二者之间的减少表达差异无统计学意义。这些结果与Mayer等8的报道一致。Becker等9的研究证实弥漫型胃癌中E-cadherin蛋白基因的突变导致该蛋白结构的变化，从而降低了细胞间的粘附功能。综上所述，在胃黏膜肠化与癌变的过程中，E-cadherin与-catenin表达的减少与下调起了十分重要的作用。AIM与胃癌关系密切，其具体癌变机制有待于进一步的研究。AIM可能对临床肠化患者随访及早期胃癌的诊断具有一定的价值和意义。【参考文献】 1 王沧海，于永征.胃黏膜肠上皮化生研究进展J.中国实用内科杂志，2004，24（9）：562-564.2 张建平，于佩良，杨庆媛，等.胃黏膜肠上皮化生与胃癌关系的病理研究J.山东医科大学学报，1997，35（3）：203-205.3 Lin YC, Wu MY, Li DR, et al. Prognostic and clinicopathological features of E-cadherin, -catenin, -catenin, -catenin and cyclin D1 expression in humanesophageal squamous cell carcinomaJ. World J Gastroenterol, 2004,10（22）:3235-3239.4 陈惠新.胃癌前病变的研究进展J.临床消化病杂志，2007，13（1）：43-45.5 刘卫国.上皮钙黏附素系统在肿瘤中的意义及其调控机制J.国外医学生理、病理科学与临床分册，1999，19（3）：204-206.6 翟博，吴徳敬，胡志前.胃癌中-及-连接素联合表达J.肿瘤防治杂志，2002，9（4）：374-376.7 Krishnadath KK, Tilanus HW, Van Blankenstein M, et al. Reduced expression of the cadherin-catenin complex in oesophageal adenocarcinoma correlates with the poor prognosisJ. J Pathol, 1997,182（3）:331-338.8 Mayer B, Johnson JP, Leitl F. E-cadherin expression in primary and metastatic gastric cancer: down-regu