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文档简介

蛋白质的分离纯化,（一）材料 1、选材 2、破碎 3、混合物的分离 （二）粗分级 （三）细分级 （四）结晶,蛋白质的分离方法,根据蛋白质的溶解度差异分离 沉淀技术 根据蛋白质分子大小的差异分离 根据蛋白质的荷电差异分离 根据蛋白质与某些物质的吸附差异吸附分离 利用生物分子专一性结合的特性亲和层析,蛋白质的分离方法,可逆沉淀： 等电点沉淀、盐析法、有机溶剂沉淀 不可逆沉淀： 热变性沉淀、重金属盐沉淀、有机酸沉淀,透析只用于除盐类和小分子杂质,透析只用于除盐类和小分子杂质,超过滤除小分子杂质，分离、浓缩蛋白质,加压,蛋白质溶液,半透膜,支持膜的栅板,超滤液,凝胶层析,又叫分子筛层析。 分子筛是具有三维空间网状结构的物质，有天然的，也可人工合成。根据网孔不同可制成不同规格。 具备条件：1惰性，2水不溶性，3能高度水化。 常用分子筛： 葡聚糖凝胶（Sephadex） 型号：G200、 G150、 G100、 G75、 G50、 G25、 G15 分离大蛋白质、小蛋白质，除盐 琼脂糖凝胶（瑞典Sepharose、美国Bio-GelA） 孔径大，用于分离大分子物质 聚丙烯酰胺凝胶（ Bio-GelP）,凝胶层析,原理： 1、分子量大的物质不能进入凝胶粒子内部，随洗脱液从凝胶粒子之间的空隙挤落下来，所以大分子物质迁移速度快； 2、小分子物质要通过凝胶网孔进入凝胶粒子内部，所以小分子物质迁移速度慢。,密度梯度离心,电泳法,类型：1、区带电泳 纸电泳、醋酸纤维素薄膜电泳、粉末电泳、细丝电泳、凝胶电泳。 凝胶电泳包括：琼脂糖凝胶、淀粉凝胶、硅胶凝胶、聚丙烯酰胺凝胶。 聚丙烯酰胺凝胶包括：垂直板电泳、盘状电泳、等电聚焦电泳、梯度电泳、免疫
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