鉴定类实验xinkejia.ppt_第1页
鉴定类实验xinkejia.ppt_第2页
鉴定类实验xinkejia.ppt_第3页
鉴定类实验xinkejia.ppt_第4页
鉴定类实验xinkejia.ppt_第5页
已阅读5页,还剩28页未读 继续免费阅读

下载本文档

版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领

文档简介

鉴定类实验,还原性糖、脂肪、蛋白质、淀粉的鉴定,一、实验目的: 尝试用化学试剂检测生物组织中糖类、脂肪和蛋白质,思考1阅读课本P18,完成下列表格:,思考2试以葡萄糖为例写出相应方程式: 葡萄糖+ Cu ( OH ) 2 葡萄糖酸 + Cu 2O(砖红色)+ H 2O 思考3蛋白质检测的反应机制是什么? 蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+结合成紫色的化合物。颜色深浅与蛋白质白质浓度成正比。,斐林试剂,砖红色沉淀,碘,蓝色,双缩脲试剂,紫色,苏丹染液/苏丹染液,橘黄色/红色,二、实验原理,三实验材料 思考4做可溶性还原性糖鉴定实验应选择什么样的实验材料?为什么? 思考5做脂肪的鉴定实验应选择什么样的实验材料? 思考6做蛋白质的鉴定实验应选择什么样的实验材料?,选用含糖较高,而且组织的颜色较浅,或近于白色的,如苹果、梨。避免干扰或影响实验结果的正常颜色。,应选富含脂肪的种子,以花生种子为最好,实验前一般要浸泡34小时(也可用蓖麻种子)。,可用富含蛋白质的黄豆或鸡蛋清。,四、实验试剂 斐林试剂(包括甲液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和乙液:质量浓度为0.05g/ mL CuSO4溶液)、苏丹或苏丹染液、双缩脲试剂(包括A液:质量浓度为0.1g/ mL NaOH溶液和B液:质量浓度为0.01g/ mL CuSO4溶液)、体积分数为50%的酒精液,碘液、蒸馏水。,思考7斐林试剂与双缩脲试剂相同吗?为什么?,不同;虽然它们的成份都是NaOH溶液和CuSO4溶液配制而成,但它们的溶液浓度不同,使用的原理不同(斐林试剂实质是新配制的Cu ( OH ) 2与还原性糖发生反应,而双缩脲试剂实质是在碱性环境下的Cu2+与肽键发生反应),使用的方法也不同。,思考8上述的酒精溶液起作用?,洗去浮色,五、方法步骤: 1、还原糖检测和观察的操作方法: 制备组织样液(去皮、切块、研磨、过滤)取1支试管,向试管内注入2mL组织样液向试管内注入1mL新制的斐林试剂,振荡试管放在盛有50-650C温水的大烧杯中,加热约2分钟,观察到溶液颜色。,思考9为什么苹果或梨组织液必须临时制备? 思考10实验中应将组成斐林试剂的甲液、乙液分别配制、储存,使用前才将甲、乙液等量混匀成斐林试剂,为什么?,因苹果多酚氧化酶含量高,组织液很易被氧化成褐色,将产生的颜色掩盖。,斐林试剂很不稳定,甲、乙液混合保存时,生成的Cu ( OH ) 2在70900C下分解成黑色CuO和水;,思考11实验中能否将甲液、乙液分别加入苹果组织样液中进行检测?为什么? 思考12还原糖溶液检测过程中出现的颜色变化过程是怎样的?,不能;因为甲、乙液分别加入时可能会与组织样液发生反应,无Cu ( OH ) 2生成,影响实验结果。,浅蓝色 棕色 砖红色(沉淀),2、脂肪检测和观察的操作方法: 方法一:向待测组织液中滴加3滴苏丹染液,观察样液被染色的情况; 方法二:取材切片制片观察 思考13为什么切片要尽可能薄些? 思考14制片过程中为什么要洗去浮色? 思考15制片过程中为什么要用吸水纸吸去花生子叶周围的酒精? 思考16制片过程中为什么在盖上盖玻片前要滴加蒸馏水?,切片要尽可能薄些,便于观察。,不洗去浮色,会影响对橘黄色脂肪滴的观察。,酒精是脂溶性溶剂,可将花生细胞中的脂肪颗粒溶解成油滴。,滴上蒸馏水可防止盖盖玻片时产生气泡。,3、蛋白质检测和观察的操作方法: 制备组织样液(浸泡、去皮研磨、过滤)加样液约2ml于试管中加入双缩脲试剂A,摇匀再加入双缩脲试剂B液34滴,摇匀观察颜色变化。,思考17检测时为什么要先加双缩脲试剂A液后加B液,而不能同时加入?,先加NaOH溶液,为Cu2+与蛋白质反应提供一个碱性的环境。A、B液同时加入,会导致Cu2+变成Cu ( OH ) 2沉淀,而失效。,思考18检测时向试管内加双缩脲试剂B液4滴,为什么CuSO4溶液不能多加?,因为多加CuSO4溶液,Cu ( OH ) 2的蓝色会遮盖反应的真实颜色。,4、淀粉检测和观察的操作方法: 用试管取2ml待测组织样液 向试管内滴加2滴碘液 观察颜色变化。 注意:碘液不要滴太多,以免影响颜色观察。,六、应用: 例题1:安徽阜阳劣质奶粉事件曝光后,有关部门对收缴的劣质奶粉进行了化验,发现不法商人为了降低成本,在其中添加了大量糖类物质,让婴儿喜欢吃却无法得到足够的蛋白质营养。请回答: (1) 长期以劣质奶粉为主食的婴儿会成为“大头娃娃”,这是由于缺乏蛋白质导致血浆渗透压下降,血浆中的大量水分进入 造成的。 (2) 有些劣质奶粉中含有大量还原糖,如果用斐林试剂鉴定,则该试剂与待测样液在试管中混合均匀后,还必须经过 处理;预计试管内混合液的颜色变化是 。 (3) 如果用双缩脲试剂鉴定劣质奶粉是否含有蛋白质,那么,将待测样液注入试管之后,注入试剂的顺序应该是 。 (4) 如果劣质奶粉含有大量脂肪,则用苏丹染液鉴定时,预计染液与待测样液混合后的颜色是 。,织液(或组织间组隙),将试管放进盛有热水的烧杯中加热煮沸(12min); 由蓝色变为砖红色,由蓝色变为砖红色,先注入双缩脲试剂A(或01gmLNaOH溶液),再注入双缩脲试剂B(或001gmLCuS04溶液),例题2:胰高血糖素对小白鼠和人具有相同的生理作用。为了验证“胰高血糖素具有升高血糖的生理作用”,请以小鼠为实验对象设计实验步骤,预测和解释实验应出现的结果,并写出实验结论。 (一)实验材料和用具: 正常实验小白鼠只,生理盐水,用生理盐水配制的适宜浓度的胰高血糖素溶液,斐林试剂,注射器,试管等。 (二)实验步骤: (实验提示:采用腹腔注射给药,给药剂量不作实验设计要求;给药小时后,用注射器在小鼠膀胱处穿刺取尿液。),(1)确定一只鼠为实验鼠,腹腔注射胰高血糖素溶液;另一只鼠为对照鼠,腹腔注射等量生理盐水 。 (2)将两支试管分别编号为1号和2号,各加入等量的斐林试剂 。 (3)给药1小时后,对两只小白鼠采尿液,实验鼠尿液放入1号试管内,对照鼠尿液放入2号试管内 。 (4)将两支试管摇匀后,放入盛有开水的烧杯内加热煮沸,观察两支试管溶液颜色的变化。,(三)实验结果的预测、解释和结论:,1号试管中应该出现砖红沉淀,说明实验鼠尿液中有葡萄糖;2号试管中仍为蓝色溶液,表明对照鼠尿液中无葡萄糖。实验结论:实验鼠血糖升高,超过一定数值而出现糖尿,是胰高血糖素具有升高血糖的生理作用所引起的。,叶绿体色素的提取和分离(必修一P97一 一实验目的: 思考题 1尝试用 方法提取叶绿体中的色素和用 法分离提取到的色素。 2分析实验结果,探究叶绿体中有几种色素,以及各自所呈现的颜色。 二实验原理: 1叶绿体中的色素是有机物,不溶于水,易溶于丙酮等有机溶剂中,所以用丙酮、乙醇等能提取色素。 2叶绿体色素在层析液中的溶解度不同,溶解度 随层析液在滤纸上扩散得快,溶解度 随层析液在滤纸上扩散得慢。),过滤,纸层析,高的,低的,三、实验材料:幼嫩、鲜绿的菠菜叶 四、实验步骤: 1提取色素:5克绿叶剪碎,放入研钵,加少量SiO2、CaCO3和无水乙醇,迅速、充分研磨。 加SiO2、加CaCO3的目的是什么?,加SiO2为了研磨得更充分;加CaCO3防止研磨时叶绿素受到破坏。,2收集滤液:漏斗基部放一单层尼龙布,研磨倒入漏斗内挤压,将滤液收集到小试管中,用棉花塞塞住试管口。 3制备滤纸条:将干燥的滤纸,顺着纸纹剪成长10cm,宽1cm的纸条,一端剪去二个角,并在距这一端1cm处划一铅笔线。,将干燥的滤纸的一端剪去二个角的目的是什么? 。 4画滤液细线:用毛细吸管吸取少量滤液,沿铅笔线划出细、齐、直的一条滤液细线,干后重复三次。 思考题为什么滤液细线越细、越齐越好? 为什么画滤液细线需要重复三次?,可使层析液同时到达滤液细线,层析时,色素分离效果好,为了防止色素带之间部分重叠。,为了增加色素在滤纸上的附着量,实验结果更明显。,5分离绿叶中的色素 将3mL层析液倒入烧杯中,将滤纸条(划线一端朝下)插入层析液中,用培养皿盖盖上烧杯。注意:层析液不能没及滤纸条的滤液细线,烧杯要盖培养皿盖。 为什么烧杯要盖培养皿盖? 6观察实验结果 请在右图中标示出相应的色素及其颜色: 提取和分离叶绿体色素的关键是什么?,层析液中的苯、丙酮、石油醚易挥发,提取叶绿体色素的关键是:叶片要新鲜、浓绿;研磨要迅速、充分;滤液收集后,要及时用棉塞将试管口塞紧。分离叶绿体色素的关键是:一是滤液细线要细且直,而且要重复划几次;二是层析液不能没及滤液线。,DNA的粗提取与鉴定(选修IP54) 一、实验目的:初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。 二、实验原理: 1DNA的溶解性: 思考题1:DNA在氯化钠溶液中的溶解度有什么特点?对此有什么应用? 思考题2:利用什么原理来将DNA与蛋白质分离开?,DNA在氯化钠溶液中的溶解度,随着氯化钠的浓度的变化而改变的。当氯化钠的物质的量浓度为014mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使溶解在氯化钠溶液中的DNA析出;,DNA不溶于酒精,但细胞中的某些蛋白质则溶于酒精,利用这一原理,可以将DNA与蛋白质进一步地分离。,2DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性:蛋白酶能水解蛋白质,但对DNA没有影响。大多数蛋白质不能忍受6080的高温,而DNA在80以上才会变性。洗涤剂能够瓦解细胞膜,但对DNA没有影响。 3细胞在蒸馏水中易吸水而导致细胞膜和细胞核膜的破裂,据此可得到含有核DNA的溶液。 4DNA的鉴定: 思考题3:依据什么原理来鉴定DNA?,DNA遇二苯胺(沸水浴)被染成蓝色,所以可用二苯胺作鉴定。,三、实验材料:鸡血细胞液 思考题4:生活在牧区的人们,采集牛、羊和马血比较方便,他们能否选用牛、羊、马血做实验材料?为什么?,不能。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核,仅靠白细胞和淋巴细胞中的少数DNA,在实验中很难提取到。,四、实验步骤: 1制备鸡血细胞液:在鸡血中加入质量浓度为01g/mL的柠檬酸钠溶液,离心处理; 2提取鸡血细胞的细胞核物质:向鸡血细胞液中加入蒸馏水,搅拌、过滤; 思考题5:加入蒸馏水的目的是什么?为什么能达到此目的? 3溶解细胞核内的DNA:加入2mol/L的氯化钠溶液,搅拌,使DNA呈溶解状态; 4析出含DNA的黏稠物:加入蒸馏水,用玻璃棒搅拌; 思考题6:此时加入蒸馏水的目的是什么?,加速了鸡血细胞的破裂(细胞膜和核膜的破裂),从而释放出DNA;蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体,水分可以大量进入血细胞内,使血细胞胀裂。,使氯化钠溶液浓度接近014mol/L,使DNA最大限度地析出。,5滤取含DNA的黏稠物:过滤; 思考题7:这次过滤与上次过滤的目的一样吗?为什么? 6将DNA的黏稠物再溶解:加入2mol/L的氯化钠溶液,搅拌,使DNA呈溶解状态; 7过滤含有DNA的氯化钠溶液:过滤; 思考题8:这一步骤的目的是什么? 思考题9:为什么反复地溶解与析出DNA,能够去除杂质?,不一样;这次过滤是为了去除不溶于氯化钠溶液的杂质,而上次过滤是为了去除破裂的细胞膜等物质。,除去含有DNA滤液中的杂质;,用高盐浓度的溶液溶解DNA,能除去在高盐中不能溶解的杂质;用低盐浓度使DNA析出,能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此,通过反复溶解与析出DNA,就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。,8提取含杂质较少的DNA:加入冷却的95%的酒精,搅拌; 思考题10:这一步骤的目的是什么? 思考题11:为什么加入的酒精需要冷却的? 9DNA的鉴定:取两支试管,各加入0015mol/L的氯化钠溶液5mL,一支加入提取的DNA,两支各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后置于沸水中加热。 思考题12:为什么要设置对照组?实验中能观察到什么现象?,去除溶于酒精的杂质;,可抑制核酸水解酶的活性,防止降解DNA;降低分子的运动,易于形成沉淀析出;低温有利于增加DNA分子柔韧性,减少断裂。

温馨提示

  • 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
  • 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
  • 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
  • 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
  • 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
  • 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
  • 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。

评论

0/150

提交评论