复方环孢菌素A漱口液的研制与临床应用.doc

复方环孢菌素A漱口液的研制与临床应用中国药房 2000年第6期第11卷 医院制剂作者：柳志文凌天牖贺建泽吴汉江李运良程泽能叶建新单位：叶建新（华东制药厂，杭州市310011）；柳志文凌天牖贺建泽吴汉江李运良程泽能（湖南医科大学附属第二医院，长沙市410011）关键词：环孢菌素A；替硝唑；漱口液制备；临床应用摘要：目的：设计一种治疗口腔免疫损伤和厌氧菌感染制剂的处方和制备工艺，建立制剂的含量测定方法，并进行其初步临床应用。方法：参照类似产品设计处方，高效液相色谱法测定含量，选择口腔扁平苔藓患者进行临床观察。结果：本品口感较好，质量可控，临床治疗口腔扁平苔藓有效率为96，无明显副作用。结论：制剂口感较好，含量测定方法可靠，临床疗效较好。口腔疾病是严重威胁人们健康的十大疾病之一。据病因病理学研究表明，牙周病、口腔粘膜病和口干综合征均与自身免疫损害和细菌感染有关。环孢菌素A系第二代免疫抑制剂，主要用于器官和骨髓移植后排斥反应的预防和治疗，对自身免疫性疾病如红斑狼疮、牛皮癣有效。国外用环孢菌素A（Cyclosprine,A）作为含漱液，治疗口腔扁平苔藓等疾病，疗效良好16；国内暂未见报道。替硝唑（Tinidazole）系一种强效抗菌药物，抗菌活性较甲硝唑强2倍4倍，目前其复方含漱剂（替硝唑与洗必泰）已作为医院制剂被开发，在临床上用于口腔厌氧菌感染及其它细菌引起的咽峡炎及口腔溃疡的治疗7。故笔者参考国内外上市或作为医院制剂在临床应用的类似产品如替硝唑漱口液、口泰、多贝氏液等，用环孢菌素A、替硝唑制成漱口液，治疗牙周病与口腔粘膜病等。经初步研究，本品口感良好、质量稳定、疗效满意，无明显毒副作用。现将初步研究结果报告如下。1仪器与试药岛津系列LC6A高效液相色谱仪；SPD6AV检测器；SCL6B系统控制器；CR4A色谱数据处理机；环孢菌素A及其对照品（浙江华东制药厂）；替硝唑及其对照品（浙江可立思安制药公司）；色谱用甲醇（北京化工厂）。2处方工艺21处方环孢菌素A50mg，替硝唑20g，土耳其红油适量；聚乙烯吡咯啉酮K3020mg，甜菊糖60g，洗必泰20g，柠檬黄适量；用1mol/L氢氧化钠溶液调pH至70，蒸馏水加至100ml。22工艺称取20mg聚乙烯吡咯啉酮K30溶于5ml95乙醇中，加入环孢菌素A50mg搅拌，加热使成糊状混合物，然后加入土耳其红油适量使之溶解。另称取替硝唑和洗必泰各20g于900ml蒸馏水中，搅拌溶解后，将上述已配好的环孢菌素A药液加入其中，搅匀，然后用1mol/L氢氧化钠溶液适量调pH至70，补加蒸馏水至100ml，加入柠檬黄适量，测含量、pH值，合格后过滤，分装即得。3质量控制31性状本品为淡黄色透明溶液，味微苦。32鉴别321取本品5ml加二甲基苯胺甲醇溶液（110）1ml，溶液应呈黄绿色。322取本品10ml，加热蒸发到1ml左右，从中取2滴溶液滴在滤纸上，烘干后，在荧光下观察，可见明亮的蓝色荧光。33含量测定331色谱条件：环孢菌素A色谱柱：C8，流动相：甲醇水（7723）；流速：08ml/min；检测波长：214nm；灵敏度AUFS：002；柱温：65。替硝唑色谱柱：C16，流动相：甲醇水四甲基乙二胺冰醋酸(2080044034）；流速：10ml/min；检测波长：317nm；灵敏度AUFS：002；柱温：30。332样品含量测定：精密量取环孢菌素A2ml，置于10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀即得样品溶液。精密称取环孢菌素A对照品50mg，置于50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀后即得对照溶液。精密量取上述配制好的样品和对照溶液各20l，注入液相色谱仪，测量峰面积，按外标法以峰面积计算即得。稀释至刻度，摇匀即得样品溶液。另精密称取替硝唑对照品约50mg，置于50ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀即得对照品溶液。精密量取上述配制好的样品和对照品溶液各20l，注入液相色谱仪量取峰面积，按外标法以峰面积计算即得。333回收率试验：用分析天平准确称取处方量环孢菌素A和替硝唑，加入处方中的其它辅料，依法配成制剂100ml，按332方法测定浓度，计算回收率，结果见表1。表1回收率试验结果样品环孢菌素A称量值(mg)替硝唑(T)称量值(mg)环孢菌素A测得值(mg)替硝唑测得值平均回收率环孢菌素A替硝唑15.3201.25.1202.85.1201.125.5200.85.3210.034.8195.24.9190.54临床应用41病例选择选择我院1997年1998年门诊诊断为口腔扁平苔藓的患者50例，其中男性15例，女性35例；年龄最小者18岁，最大者67岁，平均年龄385岁；病程3年4年。口腔扁平苔藓的诊断标准为临床症状和局部检查相结合，疑难病例通过病理检查确认8。所有患者2个月前未用过免疫抑制剂，2周前未用过抗生素。42给药方法34次/天，5ml/次，含漱23分钟。含漱液吐出后不再用清水漱口。连续观察1年以上。43疗效判断标准显效：口腔糜烂、充血、白色斑纹全部消退，自觉症状消除；有效：口腔糜烂、充血减轻，白色斑纹减少，自觉症状减轻；无效：病损和症状无改变或扩大。44结果显效10例，占20；有效38例，占76；总有效率96；无效2例，占4。所有患者观察期间均未见不良反应出现。5讨论本品口感良好、无刺激、质量稳定。环孢菌素A为含11个氨基酸的环状多肽，属脂溶性药物，故在制备其漱口液过程中，先用聚乙烯吡咯啉酮K30的醇溶液使环孢菌素A分散，然后溶于土耳其红油中，这样上述药液遇水可乳化。另外，处方中的甜菊糖起矫味作用，洗必泰起防腐作用。本品中主药含量测定采用高效液相色谱法，方法简便，有较高准确度。由于环孢菌素A和替硝唑的理化性质完全不同，经多次摸索，也无法在同一色谱条件下测定，故改用在上述两种不同色谱条件下分别测定。实验结果表明，环孢菌素A在216g/ml，替硝唑在220g/ml范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。环孢菌素A和替硝唑的平均回收率分别为995和1002，其RSD分别为030和035。口腔扁平苔藓病因虽较复杂，但主要倾向为自身免疫损伤所致，病理表现为口腔粘膜固有层结缔组织中淋巴细胞成带状浸润，基底细胞层液化变性，并且主要为T淋巴细胞浸润8。因此，临床上常采用免疫抑制剂如强的松龙、左旋咪唑等治疗，收到比较好的临床效果。但易抑制肾上腺或继发真菌感染和造成局部粘膜萎缩6等副作用。近年来，国外采用低剂量环孢菌素A治疗口腔扁平苔藓取得了令人满意的效果。由于环孢菌素A价格昂贵，采用国外报道浓度（100mg/ml）含漱，病人经济负担较重。故本实验设计采用环孢菌素A分布在组织中具有抗炎抗免疫作用的最适宜浓度（50g/ml）并联合应用替硝唑，经临床观察5