课件：布病实验室技术培训安.ppt

布鲁氏菌病（Brucellosis）是由布鲁氏 菌属（Brucella）的细菌侵入机体，引起 传染变态反应性的人畜共患传染病。 布鲁氏菌病简称布病。 布鲁氏菌简称为布氏菌。 羊种布氏菌（Bvr.melitensis）1，2，3型； 牛种布氏菌（Br.abortus）1，2，3，4，5 ，6，7，9型； 猪种布氏菌（Br.suis）1，2，3，4，5型； 沙漠森林鼠种布氏菌（Br.neotemae）； 绵羊附睾种布氏菌（Br.ovis）； 犬种布氏菌（Br.canis）。 自1952年起，在人畜间共分离出3个种 233株布鲁氏菌，其中羊种菌227株，占总 数的97.4%。牛种3株、犬种3株。1991年 以前流行优势种型为羊1、2型，1996年后 则为羊1、3型 。 陕西省是以羊型菌为主、牛、犬种布鲁氏 菌病的混合疫区。流行优势种随时间推移 发生了变化。 布氏菌属的细菌是一组微小的球杆状的 革兰氏染色阴性菌。柯氏染色，布氏菌 染成红色，其他菌染成绿色或蓝色。 宽0.30.6m，长0.61.5m。无芽 孢、无鞭毛、无质粒、不形成荚膜。 一般说来，羊种菌最小，牛种菌次之， 猪种菌最大。 不不 同同 温温 度度 对对 布布 鲁鲁 氏氏 菌菌 影响影响 从种上来说，羊种毒力最强，猪种和牛种 次之，犬种的毒力很弱，几乎不引起人致 病。 由于菌种毒力等因素的不同，患病后的临 床表现也不完全一样。 羊 种布鲁氏菌的毒力最强,患者中毒症状严 重，多有典型的发烧、多汗、头痛、虚弱 、关节痛、肝脾及睾丸肿大等急性症状。 猪种、牛种次之。 犬种的毒力很弱，几乎不引起人致病。 布氏菌特异的油滴样菌落布氏菌特异的油滴样菌落 布氏琼脂布鲁氏菌菌落布氏琼脂布鲁氏菌菌落 血平皿血平皿 布氏菌菌落布氏菌菌落 羊种布氏菌噬菌体裂解羊种布氏菌噬菌体裂解 分离培养基分离培养基 新方法的应用 细菌生化 鉴定系统 PCR鉴定 OMP31 AMOS-PCR 3.2.1 血清学诊断的意义 3.2.2 针对布病进行的检验 3.2.3 血清样本的采集和保存 3.2.2 3.2.2 针对布病进行的检验针对布病进行的检验 虎红、平板凝集试验和皮内变态反应供 初筛试验用 对已确诊的慢性病人和接种过菌苗的人 ，应以临床症状为主要依据，血清学试 验效价高低，皮内变态反应强弱供参考 布氏菌的血清学诊断方法布氏菌的血清学诊断方法 血清静止的温度和时间对实验结果有很大 的影响，在一定的时间和温度范围内，防 治时间越长，温度越高，假阳性率越低； 患者空腹血清出现假阳性少； 凡是试验中凝集颗粒不规则，大小不匀， 片状或絮状，凝集不清澈者，一般为假阳 性，否则凝集颗粒规则，大小均匀，凝集 清澈者，一般与SAT结果相符，为阳性。 原理：布氏菌侵入机体后，就会刺激机体 产生特异性抗体，这种抗体可与相应的布 氏菌抗原发生特异性结合，在电解质的作 用下，就会形成肉眼可见的凝集反应，也 就是用已知抗原查未知抗体。 受检血清应新鲜、无溶血、无污染，存放 血清处温度不能超过10，采血后应于3-4 日内进行检查，因放置时间过长可能会导 致血清效价降低。 每份血清和抗原要有对照。 个别血清会出现前带现象，建议多做几个 管，多采用几个稀释度。 被检血清对照（被检血清+盐水） 试管凝集抗原对照（试管抗原+盐水） 抗球蛋白血清加生理盐水对照 抗球蛋白血清加试管凝集抗原对照 抗球蛋白血清加被检血清对照 对照全部为阴性时，实验才有意义 我国试行的用于诊断人布病标准1:400及以 上滴度。 在进行Coombs试验时，洗涤抗原很重要， 如不认真洗涤，在抗原表面上吸附血清中 的某些其他蛋白物质，会干扰下一步加入 抗球蛋白血清的反应，掩盖真正结果。 一般采用加入抗球蛋白血清1:20-1:50之间 的稀释度。 （1）布氏菌感染后，约在15天出现不完全 抗体，3个月左右达到高峰。可持续一年左 右。该实验可作为早期和追溯诊断。 （2）该试验特异性较强，尤其适用于诊断 亚急性和慢性病人，所查抗体主要为IgG、 IgA类。 （3）一般不作为常规项目，在试管凝集试 验为可疑，患者又处于慢性期时，可考虑 抗球蛋白试验予以诊断。 3.2.2. 43.2.2. 4、布氏菌补体结合试验、布氏菌补体结合试验 补体 溶血素 绵羊红血球 布氏菌抗原 待检血清（以及对照血清） 血清灭活 恒温水浴箱 结果的判读 出现问题的分析 试验的稳定性，重复性 试验对照的设