课件：LC-Q-OF在药物杂质鉴定中应用.pptx

LC-QTOF联用技术在药物杂质鉴定中的应用,浙江省食品药品检验研究院化药所 杨伟峰,杂 质,定义：药物化学实体之外的其他任何成分,有机杂质（显著影响）,种类：,无机杂质（已知）,残留溶剂（已知）,杂质来源,杂质可以分为工艺杂质（包括合成中未反应完全的反应物及试剂、中间体、副产物等）、降解产物、从反应物及试剂中混入的杂质等。按照其毒性分类，杂质又可分为毒性杂质和普通杂质等。 杂质还可按其化学结构分类，如其它甾体、其它生物碱、几何异构体、光学异构体和聚合物等。,起始物 中间体 降解物 反应副产物,药物质量和安全：显著影响,有 机 杂 质,杂 质 谱,ICH Q3A,人用药物注册技术要求国际协调会（ICH）,日剂量2g：0.05%,日剂量 2g： 0.10%,鉴定阈值：,杂质对比研究,杂质对比研究是仿制药有关物质研究工作的重要环节。通过对比研究，比较试制品及被仿药品的实测结果，考察杂质种类是否一致，是否有新的杂质出现，杂质含量是否超过被仿药品，以确定后续进一步的研究工作方向。,杂质对比研究结果,杂质谱与被仿品一致或杂质种类较被仿品 少，各杂质含量也不超过被仿品，无含量超过鉴定限度的新杂质这种情况说明试制品的杂质控制达到了预期目标。,若通过改进工艺，杂质含量仍不能降至鉴定限度以下，则应参照杂质研究指导原则中杂质研究决策树进行后续的研究，必要时应提供杂质安全性的试验研究资料。但一般情况下，提供额外的安全性论证资料，往往不如通过改进工艺把杂质水平控制在限度值以下更为简便。,杂质对比研究结果,杂质谱与被仿品一致或杂质种类较被仿品少，没有超过鉴定限度的新杂质，但一个或多个杂质的含量超过了被仿品这种情况下，应当通过改进完善制备工艺，降低杂质的含量。,杂质鉴定的难点,1、杂质含量低，采用制备色谱分离纯化，所需的样品量较大。 2、在分离纯化的过程中容易发生再次降解。 3、由于制备色谱柱的柱效较低，有时难以得到有效分离。,高灵敏度 高选择性 不经纯化即可获得化合物信息,HPLC-Q-TOF联用技术,头孢拉定有关物质测定,1.23%,未检出7-ADCA和双氢苯甘氨酸,色谱柱温度：35；流速：0.9 mLmin-1；检测波长：254nm；水相为水-2.18%醋酸铵（1564:30）用4%的醋酸调pH至4.0，进行梯度洗脱,杂质X,Y杂质群,鉴定杂质X的结构,相对丰都：19.9%、18.8%、19.7% 不饱和度：10、9、8,偏差均小于3.6ppm,杂质的裂解途径,Fragmentor 150200V,杂质X来源分析,双氢苯甘氨酸,四氢苯甘氨酸,苯甘氨酸,四氢苯甘氨酸可能的裂解途径,Y杂质群综合解析,多一个氧原子,15易脱水 6不易脱水,1、3、6为同分异构体 2、4、5为同分异构体,解析结果,HPLC-QTOF-MS联用技术鉴定盐酸吉西他滨中的未知杂质,注射用盐酸吉西他滨尚未被中国药典收载，地方试行标准以及美国药典有关物质检查项下仅对胞嘧啶及其异构体进行控制,USP方法测定结果,样品溶液在24h内稳定，热破坏3h后未知杂质达3.692%,注射用盐酸吉西他滨,Q-TOF高分辨质谱结果分析,多了一个O原子少了一个N原子，符合氮规则，不饱和度也未变化,偏差均小于17,吉西他滨裂解途径,注射用吉西他滨,杂质,吉西他滨,杂质：2-脱氧-2， 2-二氟尿苷,胞嘧啶离子,尿嘧啶离子,偏差均小于23,NMR结构确证,H-Hcosy,dFdU来源分析,胞嘧啶、六甲基二硅胺烷和硫酸铵高温回流1h,在企业提供的起始原料胞嘧啶中没检查出尿嘧啶，但是在水浴2h后尿嘧啶明显增加到2.1%。,来源一,来源二,从合成过程分析，反应液先在甲醇中析晶得到粗品，再将粗品溶解于50超纯水中，最后于60的丙酮中重结晶得到盐酸吉西他滨成品，所以需要对温度、受热时间、以及充氮气是否对杂质产生影响做考察。,高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法分析克拉屈滨注射液中主要杂质及其来源,克拉屈滨结构式,克拉屈滨为核苷类抗白血病药,色谱柱Grace C18(250 mm 4.6 mm,5 m),流动相为10 mmol.L-1乙酸铵溶液-甲醇(80:20),柱温35 ,检测波长为265 nm.以ESI为离子源,克拉屈滨注射液色谱图,克拉屈滨不同能量下的二级质谱图,30kv,30kv,30kv,15kv,克拉屈滨杂质二级质谱图,克拉屈滨及其主要杂质的高分辨质谱数据,杂质的M+H+峰m/ z 为170，为偶数，属于偶电子离子，应含奇数个氮，且离子丰度M+1+/M+2+为3:1，说明杂质中含一个氯原子，根据质谱裂解规律，并通过高分辨质量数的确证（见表1），推断出杂质为2-氯腺嘌呤。,分别考察克拉屈滨注射液在pH为4.5,5.0,5.5,6.0,6.5,7.0,7.5,8.0溶液及光强为4500 lx,5%过氧化氢(H2O2),60 环境中的稳定性。 由降解试验推测该杂质可能是克拉屈滨在pH偏低和有氧条件下降解产生。 结果表明克拉屈滨注射液在pH为6.58.0环境下最稳定，酸性越强，越不稳定；克拉屈滨易氧化，而受光照和温度的影响较小。,Synnove Lindemalm等人6研究了克拉屈滨在体内的代谢产物，指出代谢产物主要为本文所研究的杂质（2-氯腺嘌呤）。 同时也指出克拉屈滨在低pH值时不稳定及在核苷磷酸化酶的作用下易发生去糖基反应生成2-氯腺嘌呤，其LD50与克拉屈滨一致，但未见抗肿瘤活性的报道。故在生产和储存时应特别注意溶液酸度和容器密封，必要时充氮，避免克拉屈滨降解。,苄达赖氨酸滴眼液,76批次样品 8家生产企业,a,c,b,杂质1,d,e,f,g,h,杂质2,杂质3,苄达酸,杂质1,杂质2,杂质3,苄达酸,杂质1,苄达酸裂解机理,苄达酸,杂质1,苄达赖氨酸合成路径,苄达赖氨酸杂质结构,注射用阿洛西林钠,有关物质和高聚物的分析,探索性研究,1. UPLC梯度洗脱法测定有关物质,2. 杂质谱解析,探索性研究-有关物质,探索性研究-杂质谱解析,UPLC法典型色谱图,UPLC-MS/MS(TOF)典型总离子流图,阿洛西林裂解途径,阿洛西林裂解途径,218.1,246.1,87.1,杂质、 ：裂解途径,探索性研究-杂质谱解析,阿洛西林酸,阿洛西林青霉烯酸,水解,探索性研究-杂质谱解析,杂质、 ,最大单个杂质与水分显著正相关,探索性研究-高聚物,探索性研究-高聚物,探索性研究-高聚物,阿洛西林同分异构体,阿洛西林青霉烯酸脱羧物,探索性研究-高聚物,阿洛西林闭环二聚体,Thank You !,后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用,主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！,致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造