《降纤酶药品标准》word版.doc

国家药品监督管理局国家药品标准 WS1-XG-031-2000_降 纤 酶Jiangxianme Defibrase 本品系长白山白眉蝮蛇Agkistrodon halys (ussriensis Emelianor)或尖吻蝮蛇Agkistrodon acutus (Guenther)蛇毒中提取的蛋白水解酶，每1mg蛋白含降纤酶效价不得少于1200单位。【性状】本品为白色非结晶状粉末，有引湿性。本品易溶于水。 【鉴别】(1)取本品，加水制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液。取人-枸橼酸血浆取枸橼酸钠38g，加水1000ml溶解，按枸橼酸钠溶液-人血(1:9)比例混合，3000转/min离心30分钟。取上清液分装成每支1ml，冷冻干燥，使用前加水1ml，摇匀，三小时内使用0.3ml，加400IU/ml肝素钠溶液0.05ml，混匀，加入供试品溶液0.05ml，37保温，1分钟内，血浆应凝固，加入1氯醋酸溶液1ml，振荡，凝块全部溶解，呈澄清透明溶液。(2)取上述供试品溶液0.2ml，加L-BAPA液取盐酸苯酰-L-精氨酰-P-硝基苯胺(Benzoyl-L-Argi-nyl-P-Nitroaniline Hydrochloride)5mg，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.2)(取三羟基甲基氨基甲烷18.17g与氯化钠0.8g，加水800ml溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至8.2，加水至1000ml)5ml，溶解0.2ml，置37保温30分钟，溶液呈黄色。 (3)取本品适量，照SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(附一)测定，其主成分分子量应为36000(5000)。【检查】纯度(1)取本品适量(约相当于蛋白量10g)，照SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定(附一)，在分子量3100041000以外不得出现其他电泳带。(2)照高效液相色谱法测定(中国药典2000年版二部附录 D)。色谱条件与系统适用性试验用凝胶色谱柱(如BiosepS2000 7.8mm300mm，5m)；以0.2mol/L磷酸钠缓冲液(pH6.8)(取磷酸氢二钠175.4g与磷酸二氢钠79.56g，溶解于900ml水中，调节pH值至6.8，加水至5000ml)为流动相；流速为每分钟1ml；检测波长为280nm。理论板数按降纤酶峰计算应不得低于3000。测定法取本品用流动相稀释成每1ml中含1mg的溶液作为供试品溶液，取供试品溶液20l注入液相色谱仪，记录色谱图，按面积归一化法计算，供试品中主峰相对百分含量不得低于90.0。出血毒取本品，用氯化钠注射液制成每1ml中含100单位的溶液作为供试品溶液。取体重1822g的小白鼠5只，背部皮下注射供试品溶液0.2ml，注射后24小时处死动物，剥皮观察，小鼠背部注射部位不得有出血现象。神经毒取本品，用氯化钠注射液制成每1ml中含75单位的溶液作为供试品溶液。取体重为300500g的鸽3只，每1kg体重静脉注射供试品溶液0.5ml，观察24小时，动物不得出现抽搐、死亡，如3只鸽中有一只出现抽搐或死亡，应另取鸽5只复试，均不得出现死亡。_国家药品监督管理局发布 国家药典委员会 审定16-88【效价测定】 酶活力以每1mg蛋白含酶活力计。 标准品溶液的制备取降纤酶标准品，加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH7.4)制成每1ml中含20、10、5、2.5单位的溶液。 供试品溶液的制备取本品适量，用三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH7.4)(取三羟甲基氨基甲烷2.42g与氯化钠0.585g，加水适量使溶解，用1mol/L盐酸溶液调节pH值至7.4，加水稀释至500ml)制成标准曲线范围内浓度的溶液。测定法取试管(1cm10cm)4支，各精密加入0.4纤维蛋白原溶液取纤维蛋白原，用上述三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH7.4)制成0.4可凝蛋白溶液0.2ml，置(370.5)水浴中保温2分钟，依次精密量取4种浓度的标准品溶液各0.2ml，迅速加入上述各试管中，立即摇匀，同时记时，于(370.5)水浴中观察纤维蛋白原的初凝时间，每种浓度测5次，求平均值(5次测定最大与最小值之差不得超过平均值的10，否则重测)。在双对数坐标纸上，以标准品单位数(U)为横坐标，初凝时间为纵坐标计算回归方程(相关系数应大于0.99)。取供试品溶液按上法测定，用直线回归方程求得每1mg的单位数。蛋白含量取本品适量，加水制成每1ml中含0.15mg蛋白的溶液作为供试品溶液，精密量取供试品溶液1.0ml，照附件“福林酚测定法”测定，计算每1mg中蛋白含量。 【类别】蛋白水解酶。 【贮藏】遮光，密闭，在10下保存。 【制剂】注射用降纤酶 附一 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测降纤酶分子量及纯度一、试剂1丙烯酰胺-双丙烯酰胺贮备溶液取丙烯酰胺29.2g，双丙烯酰胺0.8g，加水溶解并稀释至100ml，过滤至棕色瓶中，4保存。2羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.8)取三羟甲基氨基甲烷18.15g，加水溶解，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至8.8，加水稀释至100ml，4保存。3羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH6.8)取上述三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.8)适量，加水(1:2)稀释，用2mol/L盐酸溶液调节pH值至6.8，4保存。410十二烷基硫酸钠溶液取十二烷基硫酸钠10g，加水溶解并稀释至100ml，室温保存。5供试品缓冲液取水4.8ml，三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH6.8)1.2ml，甘油1.0ml，10十二烷基硫酸钠溶液2.0ml，0.5(W/V)溴酚蓝溶液0.5ml，-巯基乙醇0.5ml混匀，4保存。6电极贮备液(pH8.3)取三羟甲基氨基甲烷15g，甘氨酸72g，十二烷基硫酸钠5g，加水溶解并稀释至1000ml，4保存。临用前5倍稀释。710过硫酸铵(临用前配制)8固定液取三氯醋酸5g，加水200ml溶解，加入甲醇200ml，再加水至500ml。9染色液取考马斯亮蓝R-250 0.5g，溶于200ml水中，量取甲醇200ml与冰醋酸50ml，再加水至500ml。 10脱色液取甲醇400ml、醋酸100ml，加水至1000ml，充分混合。 11保存液取甲醇400ml、醋酸100ml与甘油100ml，加水至1000ml，充分混合。二、操作法1凝胶的制备 (1)分离胶的制备(12)取水3.35ml，三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH8.8)2.5ml，10十二烷基硫酸钠100l，丙烯酰胺-双丙烯酰胺贮备液4.0ml，混匀，脱气15分钟后，再加入10过硫酸铵溶液16-8950l，四甲基乙二胺5l，充分混匀，立即小心地倒入制胶模具中，在胶面上覆盖一层水，水平静置至胶体凝固。 (2)浓缩胶的配制取水6.1ml，三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH6.8)2.5ml，10十二烷基硫酸钠100l，丙烯酰胺-双丙烯酰胺贮备液1.3ml，混匀，脱气15分钟，再加入10过硫酸铵溶液50l，四甲基乙二胺10l，混匀，立即倒入去掉水层的分离胶上，插入梳子，梳子底部与分离胶的前沿距离约1cm，水平放置至胶体凝固。 2标准品和供试品的制备 (1)标准蛋白溶液取标准蛋白，加供试品缓冲液制成每1l中含1g蛋白的标准蛋白溶液。临用前置沸水浴中5分钟，冷却。 (2)供试品溶液取本品适量(按蛋白含量计算)，加供试品缓冲液制成每1l中含1g供试品溶液。临用前置沸水浴中5分钟，冷却。 3电泳凝胶板制好后，各孔分别加入10l的供试品溶液或标准蛋白溶液，倒入电极缓冲液，200伏电压下进行电泳。当蓝色溴酚蓝接近胶板底部时，停止电泳，取下胶板。在溴酚蓝处做标记。 4染色和脱色 将胶板置于固定液中，固定30分钟，再取出胶板置于染色液中，37染色23小时，然后将胶板置于脱色液中，至背景清晰(中途可换几次脱色液)，将胶板置于保存液中，室温放置1小时。 5数据处理 (1)以标准蛋白分子量的对数为纵坐标，以迁移率为横坐标，线性回归做出标准曲线。以样品的迁移率在标准曲线上找到相应的点，计算供试品的分子量。(2)取胶板在凝胶扫描仪上进行扫描。(3)将电泳胶板照相保存。附二 过敏试验法本法系将一定剂量的供试品溶液注入豚鼠腹腔和静脉，在规定的时间内观察动物的过敏反应情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。 供试动物健康豚鼠，雌雄均可，体重250350g，试验前及试验的观察期内，均应按正常饲养条件饲养，做过本试验的动物不得重复使用。供试溶液的配制除另有规定外，用氯化钠注射液按各药品项下规定浓度制成供试品溶液。检查法取上述豚鼠6只，间日腹腔注射供试品溶液0.5ml，连续3次，然后分成两组，每组3只，分别在第一次注射后第14日及第21日静脉注射供试品溶液1.0ml。结果判断 静脉注射后15分钟内均不得出现过敏性反应，如有竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕或咳嗽3声等现象中的两种以上者；或罗音、抽搐、虚脱或死亡现象之一者应判为阳性。附三 福林酚测定法试剂碱性铜试液取氢氧化钠10g，碳酸钠50g，加水400ml使溶解，作为甲液；取酒石酸钾0.5g，加水50ml使其溶解，另取硫酸铜0.25g，加水30ml使其溶解，将两液混合作为乙液。 临用前，合并甲、乙两液，并加水至500ml。 操作法对照品溶液的制备 取牛血清白蛋白对照品，加水制成每1ml中含0.3mg的溶液。 供试品溶液的制备照各品种项下规定的方法制备。标准曲线的制备 精密量取对照品溶液0.0ml、0.1ml、0.3ml、0.5ml、0.7ml、0.9ml，分别置具塞16-90试管中，各加水至1.0ml，再分别加入碱性铜试液1.0ml，摇匀，各加入福林酚试液(取福林试液中的贮备液116)4.0ml，立即混匀，置55水浴中准确反应5分钟，置冷水浴10分钟，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录 B)，在650nm的波长处测定吸收度；以0号管作为空白。以对照品溶液浓度与相应当吸收度计算回归方程。测定法精密量取供试品溶液1.0ml，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入碱性铜试液”起，依法测定，从回归方程计算多肽的含量，并乘以稀释倍数，即得。16-91国家药品监督管理局国家药品标准 WS1-XG-032-2000_注射用降纤酶 Zhusheyong Jiangxianmei Defibrase for Injection 本品为降纤酶加适量稳定剂和赋形剂的无菌冻干品。其效价应为标示量的85.0120.0。 【性状】 本品为白色或类白色冻干块状物，有引湿性，易溶于水。 【鉴别】 取本品1支，加水1ml溶解，取0.2ml，照降纤酶项下的鉴别(1)、(2)项试验，显相同的反应。 【检查】 酸度取本品2支，分别加水2ml溶解后，混匀，依法测定(中国药典2000年版二部附录 H)，pH值应为5.57.0。溶液的澄清度与颜色取本品，加注射用水2ml溶解后，溶液应澄清无色。干燥失重取本品，以五氧化二磷为干燥剂，在60减压干燥4小时，减失重量不得过5(中国药典2000年版二部附录 L)。无菌取本品，加注射用水2ml溶解后，依法检查(中国药典2000年版二部附录 H)，应符合规定。细菌内毒素取本品1支，依法检查(中国药典2000年版二部附录 E)，每支含细菌内毒素的量应小于10EU。过敏试验取本品适量，加氯化钠注射液制成每1ml中含5单位的溶液，作为致敏液与供试品溶液。照过敏试验法检查(附)，应符合规定。异常毒性取本品，加氯化钠注射液制成每1ml中含1单位的溶液，依法检查(中国药典2000年版二部附录 C)，按静脉注射法给药，应符合规定。出血毒取本品，用氯化钠注射液制成每1ml中含25单位的溶液作为供试品溶液，照降纤酶项下的方法试验，应符合规定。 其他应符合注射剂项下有关的各项规定(中国药典2000年版二部附录 B)。【效价测定】 取本品3支，分别按标示量加三羟甲基氨基甲烷缓冲液(pH7.4)溶解并稀释成标准曲线范围内浓度，照降纤酶项下的效价测定方法测定。每支效价均应符合规定，如有1支不符合规定，另取3支复试，均应符合规定。 【类别】同降纤酶。【规格】(1)5单位 (2)10单位【贮藏】遮光、密封，在10以下保存。 【有效期】2年_国家药品监督管理局发布 国家药典委员会 审定16-92注射用降纤酶说明书【药品名称】通用名称：注射用降纤酶曾用名:英文名：Defibrase for Injection汉语拼音：Zhusheyong Jianxianmei【性状】本品为白色或类白色冻干块状物，有引湿性，易溶于水。【药理毒理】蛋白水解酶。能溶解血栓，抑制血栓形成，改善微循环。【适应症】1. 急性脑梗死，包括脑血栓、脑栓的预防，短暂性脑缺血发作（TIA）。2. 心肌梗死再复发的预防。3. 四肢血管病，包括股动脉栓塞，血栓闭塞性脉管炎，雷诺病。4. 血液呈高粘状态、高凝状态、血栓前状态。5. 突发性耳聋。6. 肺栓塞。【用法用量】临用前，用注射用水或0.9%氯化钠溶液适量使之溶解，加入至无菌生理盐水100ml250ml中，静脉点滴1小时以上。急性发作期：一次10单位，一日1次，连用34日。非急性发作期：首次10单位，维持量510单位，一日或隔日1次，二周为一疗程。【不良反应】个别病人用药后可能出现少量淤斑、鼻血或牙龈出血、或有一过性GOT或GPT轻度上升，停药后自行消失。【禁忌】1. 具有出血疾病史者禁用。2. 手术后不久者禁用。3. 有出血倾向者禁用。4. 正在使用具有抗凝作用及抑制血小板功能药物（如：阿司匹林）者禁用。5. 正在使用具有抗纤溶作用制剂者禁用。6. 重度肝或肾功能障碍及其它如乳头肌断裂、心室中隔穿孔、心源性休克，多脏器功能衰竭症者禁用。7. 对本制剂有过敏史者禁用。【注意事项】1. 按专业医生处方购买和使用。2. 本品如有外观异常或瓶子破裂、过期失效等情况禁止使用。3. 本品必须用足够量的输液稀释，并立即使用。4. 注意静脉点滴速度（点滴速度过快时，患者易有胸痛、心悸等不适