实验一布氏杆菌病的检疫.ppt

实验一实验一 布氏杆菌病的检布氏杆菌病的检 疫疫 实验目的实验目的 1. 1.初步了解布鲁氏菌病的免疫生物学初步了解布鲁氏菌病的免疫生物学 检疫方法的种类和每种方法的优缺点检疫方法的种类和每种方法的优缺点 。 2. 2.掌握布氏杆菌病的免疫生物学检疫掌握布氏杆菌病的免疫生物学检疫 的具体操作方法和结果的观察、判定的具体操作方法和结果的观察、判定 。 实验材料实验材料 教学录像结合教师演示操作教学录像结合教师演示操作 器材：中试管、玻璃板、微量移液器、器材：中试管、玻璃板、微量移液器、 5ml5ml吸管、吸管、tiptip头等。头等。 试剂：布氏杆菌病试管凝集抗原，阳、阴性血清；试剂：布氏杆菌病试管凝集抗原，阳、阴性血清； 布氏杆菌虎红平板板凝集抗原，阳、阴性布氏杆菌虎红平板板凝集抗原，阳、阴性 血清；新鲜牛血清，血清；新鲜牛血清，0.5%0.5%石碳酸生理盐水；石碳酸生理盐水； 实验原理实验原理 布氏杆菌病的血清学检验方法中以凝集试验布氏杆菌病的血清学检验方法中以凝集试验 最为常用，机体感染后最为常用，机体感染后1 1周即产生凝集抗体，一周即产生凝集抗体，一 般流产后般流产后1-21-2周达最高，经半年开始下降，可持周达最高，经半年开始下降，可持 续续2-42-4年，具体方法可采用试管凝集试验法和虎年，具体方法可采用试管凝集试验法和虎 红平板凝集试验法。红平板凝集试验法。 实验方法实验方法-试管凝集试验试管凝集试验骤骤 一、操作步骤 试管试管 稀释液稀释液mlml待检血清待检血清mlml1:201:20稀释抗稀释抗 原原mlml 稀释度稀释度 1 1 2.42.40.10.1-1 1：2525 2 2 -0.50.50.50.51 1：2525 3 3 0.50.50.50.50.50.51 1：5050 4 4 0.50.50.50.50.50.51 1：100100 5 5 0.50.50.50.50.50.51 1：200200 实验方法实验方法-试管凝集试验试管凝集试验 二、制备比浊管二、制备比浊管 管号管号 1 1：2020稀释抗稀释抗 原液原液mlml 稀释液稀释液 mlml 清亮度清亮度 % 标记标记 1 1 0.00.01.01.0100100+ 2 2 0.250.250.750.757575+ 3 3 0.50.50.50.55050+ 4 4 0.750.750.250.252525 + + 5 5 1.01.00.00.0 0 0 - - 全部试管充分振荡后，置于全部试管充分振荡后，置于37373838溫溫 箱中，箱中，22222424小时后用比浊管对照检查记小时后用比浊管对照检查记 录结果，出现录结果，出现50%50%以上凝集的最高稀释度以上凝集的最高稀释度 就是这份血清的凝集价。就是这份血清的凝集价。 试管凝集试验试管凝集试验 结果判定：结果判定： 血清凝集价为血清凝集价为1 1：100100以上，为阳性。以上，为阳性。 血清凝集价为血清凝集价为1 1：5050为可疑，可疑反应的家为可疑，可疑反应的家 畜经畜经3 34 4周重检，仍为可疑者判为阳性。周重检，仍为可疑者判为阳性。 注意事项注意事项 n n 试管凝集试验，可出现非特异性反应：试管凝集试验，可出现非特异性反应： n n I I）假阴性）假阴性 n n 原因原因: : 检查时，动物处于潜伏期；检查时，动物处于潜伏期； n n 幼年畜，细菌在局部淋巴结，幼年畜，细菌在局部淋巴结， n n 活动受限制，抗体滴度低。活动受限制，抗体滴度低。 n n 母畜怀孕后期，母源抗体随血母畜怀孕后期，母源抗体随血 n n 液循环至乳腺排出。液循环至乳腺排出。 n n 布鲁氏菌病慢性，长期刺激，布鲁氏菌病慢性，长期刺激， n n 动物对抗原不敏感，故抗体滴动物对抗原不敏感，故抗体滴 n n 度不高。度不高。 n n IIII）假阳性）假阳性 n n 动物感染巴氏、土抗、弯杆菌、大肠动物感染巴氏、土抗、弯杆菌、大肠 杆菌的某些群等杆菌的某些群等GG 菌，与布鲁氏菌有类 菌，与布鲁氏菌有类 属抗原，抗体滴度一般在阳性及格，重检属抗原，抗体滴度一般在阳性及格，重检 ，可能下降，再检，最多维持原来水平。，可能下降，再检，最多维持原来水平。 实验方法实验方法-虎红平板凝集试验虎红平板凝集试验 一、实验步骤一、实验步骤 取被检血清和布氏杆菌虎红平板凝集抗原各取被检血清和布氏杆菌虎红平板凝集抗原各 0.03ml0.03ml滴于玻璃板的方格内，每份血清各用一支滴于玻璃板的方格内，每份血清各用一支 火柴棒混合均匀，在室温（火柴棒混合均匀，在室温（2020）4 41010分钟内分钟内 记录结果，同时以阴、阳性血清作对照。记录结果，同时以阴、阳性血清作对照。 实验方法实验方法-虎红平板凝集试验虎红平板凝集试验 n n 结果判定：结果判定： 在阳性血清及阴性血清实验结果正确的在阳性血清及阴性血清实验结果正确的 对照下，被检血清出现任何程度的凝集现对照下，被检血清出现任何程度的凝集现 象均判为阳性，完全不凝集的判为阴性，象均判为阳性，完全不凝集的判为阴性， 无可疑反应。无可疑反应。 注意事项注意事项 n n 混匀时面积不宜过大，应该在直径混匀时面积不宜过大，应该在直径2cm2cm的范围内的范围内 进行。进行。 n n 每检一个样品都应更换