涎腺肿瘤中HSP27的表达特征及与p53、PCNA的相关性研究.doc

DOC格式论文，方便您的复制修改删减涎腺肿瘤中HSP27的表达特征及与p53、PCNA的相关性研究（作者:_单位: _邮编: _） 作者：顾晓林 王桂兰 曹斌 陈莉 鄂群【摘要】 目的：分别研究热休克蛋白27（heat shock protein 27，HSP27）在涎腺良性、恶性肿瘤中的表达特征及其与抑癌基因p53和增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）的相关性，探讨其在涎腺肿瘤发生发展中的影响和意义。方法：采用免疫组化法检测41例良性和17例恶性肿瘤中HSP27、p53、PCNA的表达。结果：（1）HSP27阳性表达于肿瘤细胞浆，p53、PCNA胞核表达为主；（2）HSP27在良性肿瘤中高表达，在恶性肿瘤中表达下降，HSP27的表达与涎腺肿瘤细胞的分化程度显著相关（P0.01）；（3）p53、PCNA在恶性肿瘤的表达均显著高于良性肿瘤。HSP27和p53、PCNA有一定反向趋势（P0.05）。结论：HSP27表达减弱可能是涎腺恶性肿瘤分化降低的标记；HSP27的表达减少、PCNA阳性和p53突变可能协同促进恶性肿瘤细胞的增殖。 【关键词】 涎腺肿瘤；热休克蛋白27；p53；增殖细胞核抗原；免疫组化 Abstract Objective: To study the expression characteristics of heat shock protein（HSP） 27 in salivary benign and malignant tumors and their correlation with tumor suppressor gene p53 and PCNA，and to investigate their effects on occurrence and development of salivary gland tumors. Methods: Immunohistochemistry methods were used to detect the expressions of HSP27，p53，PCNA in 41 cases of benign tumors and 17 cases of malignant tumors. Results:（1）HSP27 positive expression mainly located in the cytoplasm of tumor-epithelial cells，and p53，PCNA expression mainly in nucleus; （2）The expression of HSP27 was high in benign tumors than that in malignant tumors，which was correlated with the differentiation of tumor cells（P0.01）；（3）p53，PCNA expressions in malignant tumors were significantly higher than those in benign tumors. There was a certain reverse trend between the expressions of HSP27 and p53 or PCNA（P0.05）. Conclusions: The lower expression of HSP27 may be the biomarker of differentiation depression. Reduced expression of HSP27，positive PCNA and mutation of p53 may co-promote proliferation of malignant tumor cell. Key words Salivary tumor；Heat shock protein 27；p53；Proliferating cell nuclear antigen；Immunohistochemistry 热休克蛋白27（heat shock protein 27，HSP27）是一种小分子热休克蛋白，是生物细胞受刺激后，选择性合成的一类高度保守的蛋白质，普遍存在于所有生物界原核细胞和真核细胞的细胞膜、细胞质及细胞核内，能潜在贡献于膜完整性的维持，尤其在刺激条件下1。近年来研究发现HSP27与多种肿瘤的生物学行为、治疗及预后有密切关系2-4。但其在涎腺肿瘤中的表达研究甚少。p53是迄今发现的重要抑癌基因，在多数肿瘤中缺失或突变，突变的p53与增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）均能促进肿瘤的增殖反应。本文选择HSP27与肿瘤增殖相关的突变p53和PCNA研究其在涎腺良恶性肿瘤中的表达特征及其与临床意义的相关性。 1 材料和方法 1.1 材料 选取1991年1月2007年1月南通大学第二附属医院、南通大学附属海安医院、南通大学医学院病理解剖学教研室临床病理记录完整的手术切除的涎腺肿瘤蜡块标本（10%甲醛固定）58例，其中10例蜡块伴有距离1.5 cm瘤旁涎腺组织。 1.2 试剂 实验用HSP27单抗为NeoMarkers产品，免疫组化超敏S-P试剂盒及组化辅助试剂购于福州迈新公司，PCNA、p53单抗均购于北京中衫金桥生物技术有限公司。PicTure双染试剂盒kit95-9999和kit87-9999均购于Zymed公司。所有一抗工作浓度均为150。 1.3 方法 石蜡切片厚4 m，分别作HE染色，通过双盲法对各肿瘤进行病理诊断和分级，综合临床资料进行临床分期。采用S-P法检测HSP27、PCNA、p53的表达。免疫组化法检测HSP27与PCNA共定位情况，采用10 mmol/L pH6.0的柠檬酸缓冲液进行抗原修复，正常人体涎腺组织作正常对照，已知阳性的浸润型乳腺癌切片作阳性对照，磷酸盐缓冲液（PBS）代替第一抗体作阴性对照。 1.4 判断标准 涎腺肿瘤的病理分型采用的是2005年最新版国际癌症机构关于WHO涎腺肿瘤组织学分类标准。 HSP27阳性判断标准采用积分制。无着色记为0分，着色者按淡黄-棕黄-黄褐色依次定义为1、2、3分；再将所有切片随机观察5个200倍视野，取均值，按阳性细胞占镜下实质细胞的百分比将阳性细胞数分为4个等级，阳性细胞5%为0分，5%30%为1分，30%60%为2分，60%为3分。将着色强度分和阳性细胞百分记数的乘积分作为此阳性强度，其中0分记为阴性（-），其他阳性中13分为弱阳性（+），46分为中等阳性（+），79分为强阳性（+）。 PCNA和p53同上计数阳性细胞百分比作为阳性强度。p53的阳性标准：无阳性细胞为阴性（-），计数25%为弱阳性（+），25%50%为中等阳性（+），50%为强阳性（+）；PCNA的阳性标准：阳性细胞5%为阴性（-），5%25%为弱阳性（+），余同p53。 1.5 统计学方法 采用Stata7.0对实验数据进行RC的2检验和Spearman等级相关检验，P0.05示差异有统计学意义。 2 结 果 2.1 一般资料 本组病例中男32例，女26例；年龄1383岁，平均49.3岁；腮腺肿瘤48例，颌下腺5例，其他5例；良性肿瘤41例（混合瘤25例，腺瘤3例，腺淋巴瘤13例），恶性肿瘤17例（腺样囊性癌9例，黏液表皮样癌2例，腺泡细胞癌2例，鳞癌和其他4例）；有转移5例；肿瘤直径1.56 cm。 2.2 HSP27在涎腺良恶性肿瘤的表达定位 HSP27阳性定位于肿瘤上皮的细胞浆（图1），在腺淋巴瘤中主要位于腺上皮底层（下层），在混合瘤中腺导管上皮的表达多于肌上皮，其它类型中未见特殊分布方式。HSP27在涎腺良恶性肿瘤中的表达比较见表1。 由表1可见 HSP27在良性肿瘤的阳性率为90.24%，恶性肿瘤表达率下降为64.71% (似然比2=4.5702，P0.05)，而且经在-、+、+ 3组间比较见恶性肿瘤的强阳性率也显著下降，Spearman相关分析显示HSP27阳性强度与肿瘤恶性负相关（rs-0.3137，P0.05）。 2.3 PCNA、p53在涎腺良恶性肿瘤中的表达 PCNA和p53 均主要表达于肿瘤细胞核（图2、3）， 以颗粒型、弥漫型或混合型3种方式表达。PCNA在非肿瘤组织中有少量表达， 而部分鳞癌癌巢周边细胞胞浆内也可见p53弱阳性着色反应。两指标在涎腺良恶性肿瘤中的表达比较见表2。 由表2可见PCNA的阳性率在良性肿瘤中为 43.92%，恶性肿瘤中显著上升为82.35%（P0.05），Spearman相关分析示阳性强度差异亦有统计学意义（rs=0.3072，P0.05）。p53在良性肿瘤中阳性率为24.39%，恶性肿瘤中阳性率提高为58.82%，Spearman相关分析示其阳性率和阳性强度比较差异均有统计学意义（P均0.05)。但PCNA和p53在不同良性肿瘤和不同恶性肿瘤中阳性强度差异均无统计学意义。 2.4 涎腺良恶性肿瘤中HSP27与PCNA、p53的相关性分析 经单标显示，涎腺肿瘤中HSP27的阳性强度与PCNA和p53之间有一定的反向趋势，PCNA阳性越强HSP27的表达则越弱甚至不表达（图4）。但相关性检验HSP27与PCNA和HSP27与p53之间均未见显著相关性（P均0.05）。 3 讨论 3.1 HSP27在涎腺肿瘤中表达的意义 HSP27是一种分子量为27 kD的细胞保护伴侣，正常和肿瘤组织中均有表达。当细胞受到压力刺激时被磷酸化用来防止某些顾客蛋白的聚集和（或）活性调节及降解，还可能涉及肿瘤进程，增加多种肿瘤的治疗耐受性4。 本文结果显示HSP27除肿瘤组织阳性外，非肿瘤性涎腺导管亦强阳性，但涎腺腺体阴性。由于涎腺上皮性肿瘤多与导管起源有关，所以该反应说明HSP27参与了涎腺肿瘤的发生过程。本文中HSP27在恶性肿瘤的阳性率和阳性强度均显著降低，与肿瘤恶性程度呈负相关，提示HSP27表达减弱可能是恶性肿瘤分化低合成能力降低的结果，与文献报道相似5-6。 3.2 涎腺肿瘤中HSP27与抑癌基因p53、PCNA的相关性 PCNA是在细胞周期S期广泛表达的一种核蛋白，与细胞的增殖潜能相关，可被用于甲状腺癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌等肿瘤的诊断7。本文PCNA在恶性肿瘤中阳性率和阳性强度显著增加，反映涎腺恶性肿瘤细胞增殖旺盛，细胞内含量增加。 P53是一种抑癌基因，有野生型和突变型两种亚型。由于人体组织中野生型p53半衰期短，使检测到的p53常为突变型。多种研究表明突变型p53与肿瘤的增殖、恶性进展和差的预后有关8-9，正如本文在恶性肿瘤中p53的阳性率和阳性强度显著提高。 Cornelia等2，10研究发现HSP27具有抑制细胞增殖的作用，本文结果显示良性肿瘤中HSP27高表达可能防止肿瘤细胞增殖和永生化，而HSP27表达减少则使其抑制作用减弱或消失，有利于肿瘤细胞增殖和恶性转化。本文双染显示HSP27与PCNA和p53之间有一定的反向趋势，但经检验未见显著相关性，说明HSP27可能通过包括其它HSPs在内的调节途径参与了肿瘤的增殖和恶性进程。HSP27的表达减少、PCNA阳性和p53突变均是恶性肿瘤的重要特征，三者协同利于涎腺恶性肿瘤的生存与发展。【参考文献】 1 Nakamoto H，Vigh L. 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