分子生物学笔记

分子生物学笔记 第一章 基因的结构 第一节 基因和基因组 一、基因(gene) 是合成一种功能蛋白或 RNA 分子所必须的全部 DNA 序列 一个典型的真核基因包括 编码序列外显子(exon) 插入外显子之间的非编码序列内合子(intron) 5-端和 3-端非翻译区(UTR) 调控序列(可位于上述三种序列中) 绝大多数真核基因是断裂基因(split-gene)，外显子不连续。 二、基因组(genome) 一特定生物体的整套(单倍体)遗传物质的总和， 基因组的大小用全部 DNA 的碱基对总数表示。 人基因组 3X1 09(30 亿 bp)，共编码约 10 万个基因。 每种真核生物的单倍体基因组中的全部 DNA 量称为 C 值，与进化的复杂性并不一致(C-value Paradox)。 人类基因组计划（human genome project, HGP） 基因组学（genomics）,结构基因组学（structural genomics）和功能基因组学（functional genomics）。 蛋白质组（proteome）和蛋白质组学（proteomics） 第二节 真核生物基因组 一、真核生物基因组的特点：?， 真核基因组 DNA 在细胞核内处于以核小体为基本单位的染色体结构中 真核基因组中，编码序列只占整个基因组的很小部分(23)， 二、真核基因组中 DNA 序列的分类? (一)高度重复序列(重复次数lO5) 卫星 DNA(Satellite DNA) (二)中度重复序列 1中度重复序列的特点 重复单位序列相似，但不完全一样， 散在分布于基因组中 序列的长度和拷贝数非常不均一， 中度重复序列一般具有种属特异性，可作为 DNA 标记 中度重复序列可能是转座元件(返座子)， 2中度重复序列的分类 长散在重复序列(long interspersed repeated segments)?LINES 短散在重复序列(Short interspersed repeated segments)?SINES SINES：长度105如人 Alu 序列 LINEs：长度1000bp(可达 7Kb),拷贝数 104-105，如人 LINEl (三)单拷贝序列(Unique Sequence) 包括大多数编码蛋白质的结构基因和基因间间隔序列， 三、基因家族(gene family) 一组功能相似且核苷酸序列具有同源性的基因可能由某一共同 祖先基因(ancestral gene)经重复(duplication)和突变产生。 基因家族的特点： 基因家族的成员可以串联排列在一起，形成基因簇(gene cluster)或串联重复基因(tandemly repeated genes)，如 rRNA、tRNA 和组蛋白的基因； 有些基因家族的成员也可位于不同的染色体上，如珠蛋白基因； 有些成员不产生有功能的基因产物，这种基因称为假基因 (Pseudogene) a1 表示与 a1 相似的假基因 假基因分类。加工过的假基因(processed pseudogene)。 典型的基因家族 1tRNA 基因? 单倍体人基因组中 1300 个 tRNA 基因，tRNA 基因簇 2rRNA 基因 l00copyrRNA 基因簇(重复单元 28S、18S、5.8s-rRNA) 3组蛋白基因 30-40copy定位：7q32-q36 组蛋白基因簇(重复单位：H1，H2A，H2B，H3、H4) 特点：无 intron，Poly(A)- RNA? 4珠蛋白基因 类：16p13，基因簇(24Kb)：51213 类：11p15，基因簇(60Kb)：5 GrAr3 四、超基因家族(Supergene family ，Superfamily) 由基因家族和单基因组成的大基因家族，结构上有程度不等的同源性，但功能不同 五、人类基因组中的重复序列标记 1、A1u 序列 单倍体人基因组 50 万-100 万拷贝，平均每隔 3-6Kb 就有一个 Alu 序列， 人 A1u 序列长 300bp： 2X130bp 重复序列；? +31bp 间隔序列(中间)； 两侧 7-21bp 正向重复(direct repeats)，返座子? Alu 序列广泛散布于人基因组，约 90%巳克隆的人基因合有 Alu 序列 Alu 序列标志。 2、可变数串联重复?，? Variable number tamdem repeat， VNTR 又称小卫星 DNA(minisatellite DNA) 由短重复单位(6-40bp)串联重复(6-100 次以上)而成，多位于基因的非编码区，广泛分布。 VNTR 多态性分子标记DNA 指纹图（fingerprint）. 小卫星 DNA 突变与肿瘤，H-Ras。 3、短串联重复（short tandem repeat,STR） 又称微卫星 DNA（microstallite DNA） 2-6 个核苷酸组成的重复单位串联重复(10-60 次),两侧为特异的单拷贝序列，人基因组中每 l0kb DNA 序列至少一个 STR 序列。 CA)n，50，000-100，000 拷贝 新一代遗传标记，人类基因组研究，肿瘤，遗传病 第三节 线粒体基因组 人线粒体基因组的特点： 1、人线粒体基因组为 16，569bp 的双链闭环分子，一条链为重链(H 链)，一条链为轻链(L 链)， 两条链均有编码功能，每个 mtDNA 分于编码 13 种蛋白质和 24 种结构 RNA(22rRNA，2tRNA) 2、线粒体 DNA 为母系遗传 3、结构基因不含内含子，部分区域有基因重叠，因此病理性 mtDNA 突变更易发生 4、mtDNA 突变频率更高 5、线粒体 DNA 突变的表型表达与核 DNA 不同。 第四节 细菌和病毒基因组 一、细菌基因组的特点。 1功能相关的几个结构基因往往串联在起，受它们上游的共同调控区控制，形成操纵子结构， 2结构基因中没有内含子，也无重叠现象。 3细菌 DNA 大部分为编码序列。 二、病毒基因组的特点 1每种病毒只有一种核酸，或者 DNA，或者 RNA； 2病毒核酸大小差别很大，3X103 一 3X106bp； 3除逆病毒外，所有病毒基因都是单拷贝的。 4大部份病毒核酸是由一条双链或单链分子(RNA 或 DNA)，仅少数 RNA 病毒由几个核酸片段组 成? 5真核病毒基因有内含子，而噬菌体（感染细菌的病毒）基因中无内含子 6有重叠基因 第五节 染色质和染色体 细胞分裂间期染色质(chromatin) 分裂期染色体(chromosome) 一、染色质的基本单位核小体 (一)核小体(nucleosome)结构 DNA 绕在组蛋白八聚体(H2A、H2B、H3、H4 各一对)核心外 1.8 周(146bp),形成核小体核心颗粒。 两个核小体核心颗粒之间有 Linker DNA(0-80bp)， 核小体核心颗粒+Linker=核小体(长 180-210bp) 核小 体 DNA Ladder (二)组蛋白(histone)：一类小的带有丰富正电荷胞浆 胞浆内Ca2+的调节一通过(质膜和钙库膜上的)钙离子通道(进入)和钙泵(出)， 钙通道开放的条件： 质膜或钙库膜去极化(可兴奋细胞)； 成IP3 介导钙库膜上钙通道开放(任何细胞) 钙泵激活线粒体钙泵的作用 Ca2+功能：与钙调蛋白(calmodulin, CaM)结合形成 Ca2+?CaM 复合物： 激活腺苷酸环化酶和磷酸二酯酶，激活 Ca2+?CaM 依赖蛋白激酶 钙通道阻断剂及其临床应用。 五、一氧化氮(NO) NO 合成酶催化 L-精氨酸生成 NO 和胍氨酸 NO 合成酶(NOS)分类：神经元型(nNOS) 内皮细胞型(ecNOS) 诱导型（iNOS) 功能：激活乌苷酸环化酶，刺激 cGMP 合成。 NO 的生理病理作用 第二节 蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶 蛋白激酶(Protein kinase，PK)催化蛋白质的含羟基氨基酸(丝苏和酪)的侧链羟基形成磷酸酯 （ATP 的 磷酸基转移至氧） 蛋白质磷酸酯酶(Protein phosphatase，PPase)催化磷酸蛋白的磷酸酯键水解而去磷酸化。 细胞内任何一种蛋白质的磷酸化状态是由蛋白激酶和蛋白磷酸酯酶的两种相反酶活性之间的平衡 决定的。 蛋白质可逆磷酸化的调节在信号转导过程中有重要作用，是细胞生命活动的调控中心。 一、信号转导过程中的蛋白激酶 一)丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(SerThr PK) 是一大类特异地催化蛋白质的丝氨酸和苏氨酸残基磷酸化的激酶家族，参与多种信号转导过程。 1、蛋白激酶 A（PKA) -cAMP 依赖性蛋白激酶. PKA 由两个催化亚基 C 和两个调节亚基 R 所构成 PKA 参与 cAMP 介导的转录水平调控。 PKA 的其它(下游)底物：多种代谢相关酶核内组蛋白和非组蛋白膜蛋白等。 2、蛋白激酶 C(PKC) -Ca2+激活的磷脂依赖性蛋白激酶 调节：可被 Ca2+，DAG 和磷脂酰丝氨酸激活TPA(佛波酯)也可激活 PKC 分子由 N-端的调节区和 C端催化区（亲水的蛋白激酶结构域）所组成。 PKC 有多种亚型(12 种) PKC 可激活： 受体，如 EGFR，胰岛素受体，细胞因子受体等。 细胞骨架蛋白如 Map，Tau 膜蛋白，如 Na+-H+交换蛋白，Ca2+-ATP 酶等 核蛋白转录因子，起始因子等， 信号转导物如鸟苷酸环化酶，Raf-1 等 3、Ca2+?钙调蛋白依赖性蛋白激酶(Cam-PK) Cam-PKII 是一种多功能的蛋白激酶 4。cGMP 依赖的蛋白激酶(PKG) 功能：调节胞内钙离子 5，DNA 依赖的蛋白激酶(DNA-PK) 调节：结合游离 DNA 片段后被激活， 底物：核内 DNA 结合蛋白和转录因子，如 SPl，FosJun，Myc 和 P53， 作用：参与 DNA 修复和重组, 通过激活 TF 调节基因表达; 参与细胞周期的关卡机制(Checkpoint). 6丝裂原激活的蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase， MAPK) 调节：MAPK 激酶-MAPKK（MEK）。 下游底物：核内转录因子如 Myc，Jun，Ets 及其它胞内蛋白 (二)酪氨酸蛋白激酶（Tyrosine protein kinase，TPK) 特异地催化蛋白质的酪氨酸残基磷酸化， 蛋白质酪氨酸磷酸化在细胞生长，分化和转化的调节中起重要作用。 1、经典的 src 激酶家族 原癌基因 c-src 蛋白产物 Src 是一种酪氨酸蛋白激酶，它有三个基本结构域：从 C-端至 N-端依 次为 SH1、SH2，SH3(SH=src homolog)。 SHl 结构域：具酪氨酸激酶活性， SH2 结构域：能识别并结合含磷酸化酪氨酸的短序列， SH 结构域：通过脯氨酸和疏水性氨基酸残基与靶蛋白结合， Src 家族：包括原癌基因 src，yes，lyn，fyn，lck，blk，fgr，bcd 和 yrk 编码蛋白，它们都 有 TPK 活性共同参与细胞转化的信号转导过程 SH2 结构域在信号转导途径中的重要作用：由于含 SH2 结构域的信号转导分子可以识别和结合其 他含磷酸化酪氨酸的蛋白，因此，通过蛋白质的酪氨酸磷酸化去磷酸化调节可以决定信号转导 分子的结合与解离，从而导致信号的开启或关闭。 2、JAK 嫩酶家族 JAK(Janus kinase)激酶家族包括 Jakl，Jak2，Jak3，Tyk2 等， Jak 激酶具有一个 TPK 结构域和一个激酶样结构域，它们与 Src 的 TPk 激酶结构域具有同源性， 但 JaK 激酶没有 SH2，SH3 结构域； Jak 激酶主要参与细胞因子的信号转导 二、蛋白磷酸酯酶对磷酸化的调节 (一)、丝氨酸苏氨酸蛋白磷酸酯酶? 这类酶选择性地作用于含磷酸丝氨酸或磷酸苏氨酸残基的肽链，使之脱去磷酸基团并改变生物活 性 主要成员：PPl，PP2A，PP2B，PP2C，等 PP2A，催化亚基及其功能? (二)酪氨酸蛋白磷酸酯酶(PTPase) 蛋白质酪氨酸磷酸酯酶催化磷酸化酪氨酸残基的去磷酸化反应，与相应的酪氨酸蛋白激酶共同调 节蛋白质的磷酸化水平， PTPase 家族可分为 2 类： 1、胞质型(非受体型)：小的可溶性蛋白，只有一个催化结构域， 特点是合有 SH2 domain，如 PTPlC，PTPlB 等?， 2受体型(PTPR)，是大的跨膜蛋白，特点是有 2 个串联的胞浆催化结构域，如白细胞共同抗原 CD45， PTPlC(存在于造血细胞)：N 端 2 个串联重复的 SH2 结构域识别 Tyr?P，并指导蛋白与蛋白结合)， C 端为磷酸酯酶催化结构域。 Jak 可作为 PTP1C 底物 PTPase 基因可能是肿瘤抑制基因 第三节?细胞膜受体介导的信号转导 一、受体的分类 质膜受体和胞内受体（胞浆或核受体，如类固醇激素受体） 膜受体的分类： （一）G 蛋白耦联受体家族 又称为七次胯膜受体家族，特点是具有七段跨膜的 螺旋结构，本身无酶活性，胞浆侧肽链上 有磷酸化位点，受体功能受磷酸化调节。成员；肾上腺素受体、多巴受体、视紫红蛋白等。 （二）酪氨酸激酶受体家族 受体本身胞浆侧有蛋白酪氨酸激酶活性，并且胞浆侧肽链上有自身磷酸化位点，配基结合后受体 形成二聚体，二聚体中每个亚基可以磷酸化对应的另一亚基，从而启动信号转导。 这类受体主要包括多数生长因子受体(如 IGF，EGF，PDGF，NGF，SCF，HGF 等生长因子的受体)， 除胰岛素受体外，这类受体均由一条肽链组成 (三)细胞因子受体家族 这类受体本身无 TPK 活性，但其胞浆侧近膜部分有非受体酪氨酸蛋白激酶的结合位点，在配基与 受体结合后，受体发生二聚化或寡聚化，并激活 Jak 族蛋白酪氨酸激酶 此类受体包括细胞因子受体以及生长激素、促乳素等受体 细胞因子(cytokine)：是淋巴细胞和造血细胞产生的一大类对细胞生长和分化有调节作用的蛋白 因子。包括干扰素(IFN)、白细胞介素(IL)、白血病抑制因子（LIF）、抑癌素 M 等 (但 IL-8R 为 G 蛋白藕联受体) (四)离子通道受体 与配基结合后构成离子通道，主要存在于神经突触，如乙酰胆碱(ACH)，5-HT 受体等。 二、G 蛋白介导的信号转导?。 G 蛋白藕联受体的信号转导途径由三部分组成： 细胞膜受体；G 蛋白效应物(effector)，其中 G 蛋白将受体与效应物藕联 G-蛋白(G-protein)是一种鸟苷酸结合蛋白，是由 、 和 三个亚基组成的异三聚体， 多， 和 亚基总是紧密结合在一起作为一个功能单位 G G 亚基可分为 Gs,Go,Gi,Gq 等，其活性可被霍乱毒素（CT）或百日咳毒素（PT）修饰。 G-蛋白介导的信号转导的机制：G-蛋白循环。 G-pr 的效应物：离子通道、腺苷酸环化酶、磷脂酶 C、磷脂酶 A2 等 三、RAS-MAPK 信号转导途径 1、途径中的信号分子 Ras：具鸟苷酸结合活性的一种胞浆蛋白（与 G-蛋白不同) Ras 活性与其结合的鸟苷酸有关。 鸟苷酸交换因子（SOS） Ras?GDP?Ras?GTP (失活)?GTP 酶激活蛋白（GAP）?（激活） 接头蛋白：生长因子受体结合蛋白 Grb2，通过其 SH2 结构域与 Tyr 被磷酸化的受体结合，同时 通过其 SH3 域与具有 pro 富集区的 SOS 结合，并通过 SOS 活化 Ras 蛋白 2、Ras-MAPK 途径： 生长因子生长因子受体(具酪氨酸激酶活性)含有 SH2 结构域的接头蛋白(如 Grb2)鸟苷酸 交换因子 SOSRas-GTPRaflMAPKK（MEK）MAPK转录因子调节基因表达。 3Ras-MAPK 途径的调节 Ras-MAPK 途径中信号转导分子的突变(如 Ras)和表达量的改变 其他信号转导途径的影响 cAMP-PKA：抑制 Raf-1；?PKC：活化 Rafl， 四、Jak-stat 途径： STAT：信号转导物与转录激活剂（signal transducer and activators of transcription） 至少 6 种，分子量 84-113KD，含一个 SH2 结构域(羧端)，一个 SH3 样结构域，并合有 DNA 结合 域，Stat 的激活依赖通过磷酸化形成二聚体 Jak-Stat 途径： 细胞因子受体(二聚体化)JakStatStat 二聚体(活化)易位至核，影响转录 拓扑异构体的互变由拓扑异构酶催化。发生一条链或两条链的断开和连接。 拓扑异构体：具有完全相同的碱基顺序,但 L 值不同的超螺旋。分为 I, II 型 两种拓扑异构酶：Topoisomerase I , II 第三节 DNA 双螺旋的呼吸作用 甲醛的变性实验 呼吸作用的定义 碱基对的稳定性 生物学作用 第四节 DNA 的变性复性和分子杂交 一、变性(溶解) 在某些物理化学因子的作用下，DNA 双链间的氢键断裂，双链解离形成单链。 性质变化 增色效应；黏度降低；沉 降速度增加。 因素 温度：温度升高引起的 DNA 变性称热变性。加热 使氢键断裂。 可用热变性曲线描述热变 性过程。见下图 融点 Tm：50%DNA 分子解链时的温度。 融点与 DNA 分子中的 GC 有关，随（G+C）% 的含量呈线性增加 化学：甲酰胺破坏氢键 二、复性 去除变性条件后，单链 DNA 在适当条件下重新形成双链，回复到原有的物理和生物学特性。 复性动力学 复性过程是两条单链 DNA 碰撞形成双链 DNA 的过程，是双分子反应。服从二级反应动力 学规律。 控制复性反应的两个参数是 C0 和 t Rate of reaction The reaction follows the second order equation C is the concerntration of DNA that is single-stranded at time t k is a reassociation rate constant. Progress of reaction Integrate the rate equation between the limits; Initial concerntration of DNA=C0 at time t=0; Concentration remaining single stranded=C after time t Critical parameter is C0t1/2 When the reaction is half complete at the time t=1/2 Therefore C0t1/2=1/k. 复性反应进行到 50% 时的 C0 .t 为 C0 t1/2 C0t 曲线：用已经复性的 DNA 浓度，即 1C/C0 对 C0t 的对数作图。如右图所示. C0t 值的意义：C0 t1/2 值可以用来表示反应体系 中 DNA 的总长度（单拷贝）。这种总长度称为 DNA 的复杂性。通过测定复性动力学可以预测 基因组的大小。 真核基因组 DNA 的复性动力学： 第 1 是快复性动力学组分，高度重复序列。 第 2 是中复性动力学组分，中度重复序列。 第 3 是慢复性动力学组分，单拷贝序列。 X：DNA 的复杂性 C0t 曲线特征：原核生物每种图形的现状 大致相同；重复序列多,复性快。 曲线意义：求 DNA 的复杂度。 三、分子杂交 原理：基于 DNA 的变性与复性的特性。双链 DNA 加热以后，变成单链，在去除变性条件 后，在一定的条件下，具有互补顺序的 DNA 能再形成双链。 探针：一种标记的一段 DNA 或 RNA，与待 测基因序列的 DNA 或 RNA 互补 分子杂交技术的种类：固相杂交（待测核 酸固相化）；Southern blot ，待测核酸为 DNA；Northern blot ，待测核酸为 RNA。 液相原位杂交示意图：Dots hybridization，点状杂交，待测核酸为 DNA 或 RNA；Colony or plaque hybridization， 菌落或噬菌班杂交，待测核酸为 DNA。Tissue hybridization ，组织 原位杂交，检测 mRNA 表达和定位。 研究基因的定位，拷贝数，测序。 菌落原位杂交： 基因文库：染色体 DNA 文库，cDNA 文库。 第三章基因和基因组 一、原核生物基因组 特征 通常含有质粒； 操纵子结构； 顺反子； 只有一个染色体； 有 SD 序列； 基因重叠； 一般没有内含子； 只有一个复制起始位点； 以 RNA 为产物的基因往 往是多拷贝的，蛋白质基因 单拷贝。X174 ； 噬菌体 1染色体、核小体结构 二、真核生物基因组 染色体功能实现三要素：着丝点；端粒；复制起始点。 基因组大小和 C 值矛盾 C 值：单倍体基因的全部 DNA 含量。 C 值矛盾：与预期相比，C 值明显过大；同一物种，C 值相差很大。 基因组的基因数目（下表：不同生物的基因数目）。 种类基因组大小（bp） 基因数目 支原体 1.0106 750 噬菌体 T4 1.6105 200 大肠杆菌 4.2106 2350 酵母 1.3107 6100 果蝇 1.4108 8750 人 3.3109 65000-80000 真核生物基因组序列特征： 具有多个复制起始位点；编码序列仅占一小部 分(3%) ，大部分为非编码序列。 单拷贝序列；轻度重复序列； 中度重复序列；高度重复序列。 不同物种中,重复序列/非重复序列的比例相差很大，原核基本不重复。 真核生物的重复序列 基因家族：.珠蛋白；.rDNA；.tDNA；.组蛋白基因。 rRNA 基因:酵母：140 次；果蝇：130250 次；人类：300 次。 10 组蛋白基因家族： 左图 1 为组蛋白 基因家族，箭头 表示转录 方向，右侧数字 表示基因组重 复次数。 左图 2 为真核生 物基因组中不同 的多基因家族。 Alu 的重复序列：.AGCT；.散布；.Alu 序列；.约 90% 相同。 卫星 DNA .隐蔽卫星 DNA .小卫星 DNA .微卫星 DNA A.单拷贝序列特征 a.含有内含子 内含子(intron) 外显子(exon) 内含子检测: 限制性内切酶图谱 DNA 的杂交内含子 GT/AG 规则: 内含子与外显子连接处的序列特异: 内含子 5端为 GT,3 端为 AG, GT/AG 规则. -GT-AG- 外显子内含子外显子 B.存在不同的转录单位 a.简单转录单位 转录单位的基本组成: b.复杂转录单位 转录方式不同,拼接方式不同. 三、基因定位 遗传图：基因在染色体上的位 置。 经典方法: 遗传交换定位 接合定位 染色体爬行法 基因鉴定的方法：外显子特征 与 RNA 后 cDNA 杂交； Zoo-blot 不同物种杂交； 外显子捕捉； CG 岛鉴定； 扣除杂交。 内含子 GT/AG 规则: 内含子与外显子连接处的序列特异: 内含子 5端为 GT,3 端为 AG, GT/AG 规则. -GT-AG- 外显子内含子外显子 B.存在不同的转录单位 a.简单转录单位 转录单位的基本组成: b.复杂转录单位 转录方式不同,拼接方式不同. 三、基因定位 遗传图：基因在染色体上的位 置。 经典方法: 遗传交换定位 接合定位 染色体爬行法 基因鉴定的方法：外显子特征 与 RNA 后 cDNA 杂交； Zoo-blot 不同物种杂交； 外显子捕捉； CG 岛鉴定； 扣除杂交。第四章 DNA 复制 第一节 复制概论 半保留复制 复制的方向 53 实验证据：在反应物中加入 dNTP。 具有固定的起始位 DNA 聚合酶 半不连续复制 一条链连续合成，称主导链 Leading Strand； 另一条链分段合成，称随从链（随后链）Lagging Strand。 第二节 DNA 复制的酶学 复制体系的鉴定 DNA 基因：与 DNA 复制有 关的基因 条件型突变体、温度突变 体研究 DNA 基因 快停突变体、慢停突变体 1DNA 聚合酶 3 种 klenow 片段 聚合酶 I 活性 53聚合活性 35外切活性 53外切活性 聚合酶：主要的复制酶 聚合酶活性 第三节 复制的基本模式 1. 型 2. 滚环式 3. D 型 第四节 复制过程 一、复制的起始 三、回环模型 在 oriC 和 ori 上起始涉及相同的反应 阶段 oriC ori Ori 的识别和解链 DnaA O 解旋酶的结合和解链 DnaB DnaB DnaC P RNA Pol RNA Pol 释放复合体 DnaJ？ DnaJ？ 四、线形末端的复制 解决方法： 1. 成环 2. 末端冗余 3. 腺病毒 五、真核 DNA 复制 1DNA 聚合酶 DNA 聚合酶 位置核核核核线粒体 功能引发延伸修复，合成修复复制 酶活性 Pol I 3-5外切核酸酶 3-5外切核酸酶 3-5外切核酸酶 2.SV40DNA 复制 (1)RNA 引发，起始 DNA 合成 (2)DNA 延伸 功能 E.coli SV40 起始蛋白 DNA A T 螺旋酶 DNA B T 引发 DNA G Pol 聚合 Pol III Pol 外切酶活性 Pol III Pol I 滑动钳 Pol III PCNA 单链结合蛋白 SSB RPA 3.端粒酶 端粒 TTGGGG 富含 TG 结构， 不同生物重复次数不同 端粒酶性质 真核生物复制过程中的核小 体结构 亲本八聚体 全保留装配 图示详见武汉大学出版社 分子生物学第 91 页。 图 723 新产生的组蛋白 八聚体装配的三种模式 图 724 亲代组蛋白八聚 体和新合成的组蛋白八聚体 与 DNA 结合的可能方式， 是正确的。 第五章转录 第一节 原核生物的