仪器分析第三章高效液相色谱分析

第三章高效液相色谱分析High Performance Liquid Chromatography, HPLCDate3-1 高效液相色谱法的特点高效液相色谱法：一种用液体为流动相的色谱分离分析方法。它在经典液相色谱的基础上，引入气相色谱的理论，技术上采用了高压泵、高效分离柱、高灵敏度检测器。DateDate1. 高效液相色谱与经典液相色谱方法的比较高压： HPLC采用高压输液设备 , 150-350*105 Pa高速： HPLC流速大增，分析速度极快，只需数分钟；而经典方法靠重力加料，完成一次分析需时数小时。高效： 化学键和固定相 , 30000塔板 /米高灵敏： 10-9g （紫外检测）、 10-11g （荧光检测）Date2、 HPLC与 GC的区别 分析对象及范围 ： GC分析只限于气体和低沸点的稳定化合物，而这些物质只点有机物总数的 20%； HPLC可以分析高沸点、高分子量、热稳定或不稳定化合物，这类物质占有机物总数的 80%。 流动相的选择 ： GC采用的流动相中为有限的几种 “惰性 ”气体，只起运载作用，和组分之间没有相互的作用力； HPLC采用的流动相为各种极性不同的液体或液体的混合，可供选择的机会多。它除了起运载作用外，还可与组分作用，并与固定相对组分的作用产生竞争，即流动相对分离的贡献很大，可通过溶剂来控制和改进分离。 操作温度 ： GC需高温； HPLC通常在室温下进行。Date3-2 高效液相色谱法理论基础1. 速率理论 P69 = 2l dp + Cd Dmu + Cm dP2 CSmdP2 Cs df2Dm Dm Ds+ + uH = A + + CuBu由于柱内色谱峰扩展所引起的塔板高度的变化为：Date 速率方程： H=A+B/u+Cu （ 1）液体的扩散系数仅为气体的万分之一， HPLC中速率方程中的 分子扩散项分子扩散项 B/U较小，可以忽略不计， （ 2）影响柱效的主要因素是 传质项。传质项。Date2、提高柱效的途径：、提高柱效的途径： 提高柱内填料均匀性，减小固定相粒度（选择薄壳形担体） 选用低粘度的流动相或适当提高柱温，降低流动相粘度 ; 减小粒度是最有效的途径 .Date3-3 高效液相色谱法主要类型及分离原理1、液液分配色谱法、液液分配色谱法2、液固吸附色谱法、液固吸附色谱法3、离子交换色谱法、离子交换色谱法4、离子对色谱、离子对色谱5、空间排阻色谱法、空间排阻色谱法Date1、 液 -液分配色谱固定相与流动相均为液体（互不相溶）；分离机制 ：组分在固定相和流动相上的分配；流动相 ：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（ 正相色谱 ）， 反之，流动相的极性大于固定液的极性（ 反相 色谱 ）。 固定相 ：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用 ;目前应用最广的固定相 :化学键合固定相Date正相色谱与反相色谱比较正相色谱与反相色谱比较正相色谱 固定液极性 流动相极性 极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱 适于分离极性组分反相色谱 固定液极性 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷 氯仿 溴乙烷 苯 四氯化碳 二硫化碳 环己烷 己烷 煤油 (最小 )采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。Date3-6 高效 液相色谱仪器Date液相色谱仪（ 1）Date液相色谱仪（ 2）Date流程及主要部件process and main assembly of HPLC1.流程高压输液系统进样系统 色谱柱 检测系统数据记录及处理系统Date2.主要部件(1)高压输液系统（储液器、高压泵、过滤器）(2)高压泵 为了获得高柱效， HPLC使用粒度很小的固定相（ 10m）， 液体流经色谱柱受到的阻力大 应具有流量稳定、压力平稳无脉动等特性。 分为恒流泵、恒压泵，各有优缺点。 目前恒流泵逐渐取代恒压泵。Date梯度洗提装置（ P84）梯度洗提： 流动相中含有两种或以上不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程