4微生物的实验室培养

1、课题1 微生物的实验室培养,专题2 :微生物的培养与应用,课题1 微生物的实验室培养,微生物的实验室培养条件：,（1）合适的营养和环境条件,（2）确保其他微生物无法混入,一. 培养基,1. 概念：,按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。,2. 培养基种类：,液体培养基： 固体培养基：,用途应用微生物分离、鉴定、 计数和菌种保存等方面,用途工业生产,3. 成分：,水、无机盐、碳源、氮源,+满足微生物对pH、特殊营养物质、氧气的要求,碳源：凡是为微生物提供所需碳元素的营养物质 无机碳：二氧化碳、碳酸氢钠等 有机碳：糖类、脂肪石油等,氮源：凡是为微生物提供所需氮元素的营养物质

2、 无机氮源：氮气、氨、硝酸盐等 有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨 基酸等,菌落：,单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。,菌落,细菌的菌落特征因种而异,二. 无菌技术,思考： 1. 什么是无菌技术？包括哪些方面？ 2. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考） 3. 消毒和灭菌有何不同？ 4. 常用的消毒和灭菌方法有哪些？,无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有防 止杂菌污染的方法。,无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,3. 常用的消毒方法：

3、,煮沸消毒法，巴氏消毒法，紫外线或化学药剂消毒法,常用的灭菌方法：,灼烧灭菌 干热灭菌 高压蒸汽灭菌 ：100kPa 121 15-30min,判断下列各项是否需要消毒或灭菌。如需要，选择合适方法。 （1）豆浆 （2）游泳池 （3）超净工作台 （4）玻棒、试管、吸管、锥形瓶 （5）培养细菌用的培养皿 （6）无菌水 （7）牛肉膏蛋白胨培养基 （8）接种环、接种针（9）实验操作者的双手,牛奶,接种室、接种箱或超净工作台,接种工具，接种环、接种针或其他金属用具,玻璃器皿（吸管、培养皿）,2、消毒和灭菌，什么时候需要消毒，什么时候需要灭菌？,三. 实验操作-大肠杆菌的纯化培养,（一）制备牛肉膏蛋白胨固

4、体培养基 计算称量溶化灭菌倒平板 （二）纯化大肠杆菌 最常用的接种方法有： 平板划线法和稀释涂布平板法,（冷却至50）,问题讨论,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,菌种的保存,1、临时保藏法： 对象： 温度： 缺点： 2、甘油管藏法： 对象： 温度：,结果分析与评价 课题延伸,（P20）,频繁使用的菌种,4（冰箱）,容易被污染或 产生变异,长期保存的菌种,-20（冷冻箱）,返回,接种环,接种针,

5、返回,倒平板,讨论1，2,讨论3，4,平板划线法,讨论2，3,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,操作的第一步灼烧接种环： 每次划线前灼烧接种环： 划线结束后灼烧接种环：,避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；,杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。,及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 3.在作第二次以及其后的划线操作时

6、，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,以免接种环温度太高，杀死菌种。,划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少， 每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落,返回1,涂布器,1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基,返回1,返回2,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠