生化分析仪原理【知识荟萃】

1、检验科 吴 迪,生化分析仪原理,1,行业重点,临床生化自动分析仪分类,按运行速度： 1大型生化仪速度600 test / 小时以上 2中型生化仪速度300-600 test / 小时 3小型生化仪速度300 test /小时以下 按仪器结构： 1流动式自动生化分析仪 2离心式自动生化分析仪 3分立式自动生化分析仪,2,行业重点,分立式自动分析仪的主要部件,加样系统 比色系统 分光系统 供排水系统 清洗系统 操作控制与数据处理系统,3,行业重点,4,行业重点,5,行业重点,6,行业重点,7,行业重点,8,行业重点,加样系统,试剂仓 样品转盘、进样架系统（样本放入区、条码扫描通道、测定缓冲区、样本

2、回收区） 样品取样单元 试剂取样单元 混合部件,9,行业重点,比色系统,光源 比色杯 分立式比色转盘 比色杯恒温 水浴、空气浴、恒温液循环间接加热 比色杯类型 硬质石英/玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。,10,行业重点,分光系统,干涉滤光片 光栅分光式 无相差蚀刻凹面光栅 后分光集束式光路系统,11,行业重点,关于双波长检测的优点,通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而获得稳定的测定结果。,12,行业重点,自动生化分析仪的工作程序,13,行业重点,14,行业重点,自动分析仪的基本分析方法,终点法 （1点）终点法和2点终点法 速率法 速

3、率法和2点速率法（固定时间法）,15,行业重点,终点法,被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。 终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液（校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化的标准曲线。 通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计算出该标本中待测物的浓度。,16,行业重点,终点法,终点法 终点法可根据试剂原理不同设置为（一点）终点法和两 点终点法。 对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点终点法。 对于两种以上的试剂，加

4、入第一试剂，主要起缓冲或者消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二（或第三）试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应点。此即两点终点法。 本质均为终点法。,17,行业重点,终点法反应曲线举例（单试剂）,18,行业重点,终点法反应曲线举例（单试剂）,19,行业重点,终点法反应曲线举例（双试剂）,20,行业重点,终点法反应曲线举例（双试剂）,21,行业重点,终点法反应曲线举例（双试剂免疫比浊法）,22,行业重点,速率法,速率法分为：连续监测速率法和两点速率法（固定时间法）。 连续监测速率法：在可见光区(GGT、ALP：405nm黄色)或紫外（HBDH 、LDH、ALT： 340nm）在一段时间

5、内连续监测某一物质的生成 (或消耗的) 速率，计算待测物的活性，一般用于样本中酶活性的检测。 酶促反应，在一定条件和测定范围内，当Km底物浓度，符合零级速率法，底物消耗/生成的速率只与催化反应的酶的活性有关，为正比例关系，直线的斜率为定值（即K值或factor）,23,行业重点,连续监测速率法的反应曲线,24,行业重点,两点速率法,两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。 设定参数时选择在直线上的两个点作为检测点。,25,行业重点,速率法的吸光度计算,速率法吸光度计算： 如读点为21-26 ; 用最

6、小二乘法，得到测光点21-26间每分钟吸光度的变化量。 两点速率法吸光度计算: 如读点为21-26 ; T 为：(26-21) 点间隔的时间 (A26+A25)/2-(A21+A20)/2/T,26,行业重点,定标方法,对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立一条标准曲线。 速率法检测的酶类可以采用理论因数法（K因数或Factor法），不过目前，大多数实验室对酶类（速率法）测试亦采用标准液校正Factor的方式，以消除仪器和试剂的系统误差。,27,行业重点,定标方法2点定标,两点定标：以水作为零点，标准液作为另一点，建立标准曲线。此方法适用于浓度随吸光度变化呈线性变化的试剂。曲线的方程

7、为：Y=AX 对于一些特殊试剂如：K，Na，CL，因水中痕量离子浓度的存在或者线性范围限制，一般不以水作为零点，而采用定值的高、低两个标准液，建立标准曲线。曲线的方程为：Y=AX+B。,28,行业重点,2点定标的标准曲线,29,行业重点,2点定标的标准曲线,30,行业重点,定标方法多点定标,多点定标：采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线。该曲线的特征一般为非线性，即吸光度与浓度的变化不是直线关系。计算方式在自动生化仪上可选择为：SPLINE或LOGIT-LOG法。 对于一些通过（胶乳增强）免疫比浊法测定的试剂，多为此方法。因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较窄。,31,行业重点,多点定标的标准曲线,32,行业重点,多点定标的标准曲线,33,行业重点,多点定标的标准曲线,34,行业重点,自动生化分析仪的操作控制系统,仪器操作和控制软件的功能： （1）设置系统参数 （2）设置项目参数 （3）设置试剂参数 （4）设置校准品和质控品参数 （5）实施校准和质控测试 （6）进行样品测试 （7）结果查询 （8）反应全程监控 （9）执行维护,35,行业重点,自动生化分析仪的上机参数,生化分析仪的参数就是仪器工作的指令，操作