药物分析1第03章药物的杂质检查.ppt

1、第三章 药物的杂质检查,一、什么是药物的杂质？,无治疗作用 影响制剂质量 对人体有危害作用,氯化物、硫酸盐,水分,砷盐、重金属,处方中各种附加剂不称杂质,第一节 杂质和杂质限量检查,药物的纯度,指药物纯净程度，反映了药物质量的优劣，含有杂质是影响药物纯度的主要因素。,药物的纯度考虑杂质的生理作用，药品只有两个等级：合格或不合格 化学试剂有很多等级，如基准试剂、优级纯（GR）、分析纯（AR）、化学纯（CP）、色谱纯、光谱纯,药物纯度与化学纯度不同,二、药物中杂质的来源与分类,1. 生产过程中引入,（1）原料、反应中间体及副产物,（2）试剂、溶剂、催化剂类,（3）生产中所用金属器皿、装置以及其他不

2、耐酸、碱的金属工具所带来的杂质,2. 贮藏过程中产生,水解、氧化、分解、异构化、晶形转变、聚合、潮解和发霉等,易发生水解反应的结构：,酯、内酯、酰胺、卤代烃、苷类等,易发生氧化反应的结构：,醚、醛、酚羟基、巯基、亚硝基、双键等,96：131在药物生产过程中引入杂质的途径为 A. 原料不纯或部分未反应完全的原料造成 B. 合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成 C. 需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成 D. 所用金属器皿及装置等引入杂质 E. 由于操作不妥，日光曝晒而使产品发生分解引入的杂质,3.杂质的分类,药物中的杂质按来源分为,1) 一般杂质：分布广泛，多数药物含有的 如氯化

3、物、硫酸盐、铁盐、重金属、砷盐、酸、碱、水分、易炭化物、炽灼残渣等。 一般杂质检查方法收载在中国药典的附录中,2) 特殊杂质：指某一个或某一类药物的生产或贮藏过程中引入的杂质 阿司匹林中的游离水杨酸 异烟肼中的游离肼 甾体激素中的其他甾体 特殊杂质检查方法收载在中国药典正文中,99x：85中国药典（1995年版）中规定的一般杂质检查中不包括的项目是 A. 硫酸盐检查 B. 氯化物检查 C. 溶出度检查 D. 重金属检查 E. 砷盐检查,杂质量 杂质限量 杂质量,药品合格,药品不合格,（一）杂质检查法 限量检查法,三、药物的限量检查,在不影响疗效和不产生毒副作用的前提下，允许制剂中的杂质在一定限

4、度范围内存在。因此，中国药典规定的杂质检查均为限量检查。 一般不要求准确测定含量， 只检查杂质是否超过限量,（二）杂质限量 允许药物含有杂质的最大量,（三 ）杂质限量的表示方法,（1）百分之几（%） （2）百万分之几 （ppm 或106）,（四）杂质限量的计算方法,V,c,S,L,供试品,对照品,杂质最大 允许量,是否稀释,对照法：,（五）限量检查方法 对照法 即取一定量与被检杂质相同的纯物质或其他对照品配制成标准溶液，与一定量供试品溶液，在相同实验条件下，比较反应结果（如颜色深浅），从而确定杂质的含量是否超过规定的限度。,比较法 采用重量法、仪器分析法等测定杂质的参数，并与杂质限量比较做出判

5、断。 灵敏度法 该法不用标准溶液进行对比分析，而是在供试品溶液中加入检测试剂，在一定条件下，观察有无反应发生，即以该反应的灵敏度来控制杂质限量。,对乙酰胺基酚中氯化物的检查：取 本品2.0g，加水100ml，加热溶解后，冷 却，滤过，取滤液25ml，依法检查，与 标准氯化钠溶液5.0ml（每1ml相当于10 ug的Cl）制成的对照液比较，浊度不得 更大。问氯化物限量为多少？,葡萄糖中重金属的检查：取本品4.0g， 加水23ml溶解后，加醋酸盐缓冲液（pH 3.5）2ml，依法检查，含重金属量不得过 百万分之五。问应取标准铅溶液多少ml （每1ml相当于10ug的Pb）？,溴化钠中砷盐的检查：本

6、品依法 检查，应取标准溶液2.0ml（每1ml相 当于1ug的As）制备砷斑，含砷量不 得过0.0004%。问应取供试品多少克？,检查维生素C中的重金属时, 若取样量为1.0g，要求含重金属不得 过百万分之十，问应吸取标准铅溶液 （每1ml0.01mg的Pb）多少ml？ A、0.2ml B、0.4ml C、2ml D、1ml E、20ml,检查某药物中的砷盐，取标准 砷溶液2ml（每1ml相当于1g的 As）制备标准砷斑，砷盐限量为 0.0001，应取供试品的量为 A、0.20g B、2.0g C、0.020g D、1.0g E、0.10g,第二节 一般杂质检查,一般杂质检查规则,药品检验操作

7、标准规定： 遵循平行操作原则,（1）仪器的配对性 （2）对照品与供试品的同步操作,对照 样品 样品管所显颜色或浑浊浅于对照管,平行操作,纳氏比色管,背景（颜色）,图,甲管 乙管,甲管 乙管,自上向下透视,一、氯化物检查法,c V,S,（一）原理 对照法,（二）操作,1、酸性条件,（1）加速AgCl形成，产生较好的白色乳浊,稀硝酸,50ml溶液中含稀硝酸10ml为宜,如 Ag2CO3、Ag3PO4和Ag2O,（2）避免弱酸银盐的形成,（三）测定条件,（3）避免氧化银沉淀生成,2、标准溶液 氯化钠 浓度 10g Cl /ml,（所显浑浊梯度明显，相当于标准氯化钠58ml）,适宜检测范围 5080

8、g / 50ml,3、沉淀剂,供试液和对照液稀释后，加硝酸银溶液，使生成白色浑浊而不是白色沉淀,硝酸银,4、避光、暗处放置5分钟后比浊,5、比浊方法 同置于黑色背景上， 自上向下观察,因氯化银见光易分解,（三）干扰及排除,1、供试液若不澄清,需过滤,先用含硝酸的水洗净滤纸中的氯化物后再过滤样品,2、供试品若有色,先经调色处理,使对照液与供试液颜色一致，再进行检查,（1）内消色法（倍量法）,两倍量供试品溶液,溶液1,溶液2,加入标准 NaCl溶液,+AgNO3,对照液,供试液,如 枸橼酸铁铵（棕黄色）,（2）外消色法,1、加合适的试剂使供试液褪色 如 KMnO7+乙醇褪色,2、向对照液加其他无干

9、扰的有色 溶液使与供试液颜色一致,如 稀焦糖溶液或标准比色液,例1. 中国药典 （2000年版） 规定，检查氯化物杂质时，一般取用标准氯化钠溶液（10gCl/ml）58ml的原因是（D） A. 使检查反应完全 B. 药物中含氯化物的量均在此范围 C. 加速反应 D. 所产生的浊度梯度明显 E. 避免干扰,例2. 采用硝酸银试液检查氯化物时，加入硝酸使溶液酸化的目的是（ABCDE） A加速生成氯化银浑浊反应 B消除某些弱酸盐的干扰 C消除碳酸盐干扰 D消除磷酸盐干扰 E避免氧化银沉淀生成,例3. 当采用比浊法检查氯化物杂质时，若药物本身有颜色而干扰检查的话，应该选用的处理方法为（AB） A内消色

10、法 B外消色法 C比色法 D差示比浊法 E差示可见分光法,例4. 若要进行高锰酸钾中氯化物的检查，最佳方法是（D） A. 加入一定量氯仿提取后测定 B. 氧瓶燃烧 C. 倍量法 D. 加入一定量乙醇 E. 以上都不对,例5. 下列哪些条件为药物中氯化物检查的必要条件（ABC） A. 所用比色管需配套 B. 稀硝酸酸性下(10ml/50ml) C. 避光放置5分钟 D. 用硝酸银标准溶液做对照 E. 在白色背景下观察,二、硫酸盐检查法,（一）原理 对照法,（二）操作,（三）测定条件,1、标准溶液 硫酸钾 浓度 100g SO4 /ml,适宜检测范围 100500 g / 50ml （相当于标准硫

11、酸钾溶液15ml),2、酸性条件,稀盐酸,50ml溶液中含稀盐酸2ml为宜,4、供试液若不澄清,需过滤,先用含盐酸的水洗净滤纸中的硫酸盐后再过滤样品,3、供试品若有色 内消色法,6、比浊方法 同置于黑色背景上， 自上向下观察,5、沉淀剂,25氯化钡,稀释后再加，使生成白色浑浊而不是白色沉淀,三、铁盐检查法,1. 原理 对照法,（一）硫氰酸盐法 ChP（2005）、USP（29）,过硫酸铵,（二）操作,环状结构的药物：需经炽灼破坏，使铁盐转 变成三氧化二铁,（三）测定条件,1、标准溶液 硫酸铁铵 FeNH4(SO4)212H2O 浓度 10gFe/ml,适宜检测范围 1050 g / 50ml

12、（相当于标准铁溶液15ml）, 2、酸性条件, 3、加过硫酸铵的目的,50ml溶液中含稀盐酸4ml为宜,稀盐酸,B、防止光线使反应产物硫氰 酸铁还原或分解褪色,A、氧化 Fe2+ 为 Fe3+,防止铁盐水解，避免弱酸盐的干扰,4、若供试液与对照液颜色不一致或 红色太浅,可用正丁醇提取后，分取正丁醇层比色,5、显色剂 30%硫氰酸铵溶液,6、比色方法 同置于白色背景上， 自上向下观察,（二）巯基醋酸法 BP 对照法,本法灵敏度较高，但试剂较贵,例1. 中国药典（2005年版）规定铁盐的检查方法为（A） A. 硫氰酸盐法 B. 巯基醋酸法 C. 普鲁士蓝法 D 邻二氮菲法 E. 水杨酸显色法,例2

13、. 中国药典（2005年版）规定，硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸按的目的是（AB） A. 使药物中铁盐都转变为Fe3+ B. 防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色 C. 使产生的红色产物颜色更深 D防止干扰 E便于观察、比较,例3. 某药物（黄色）欲进行铁盐检查，应采用下面哪种方法（E） A. 倍量法 B. 微孔滤膜过滤法 C. 调色法 D. 600700炽灼残渣后测定 E. 以上都不对,例4. 中国药典收载的铁盐检查，主要是检查（D） A. Fe B. Fe2+ C. Fe3+ D. Fe2+和Fe3+ E. 以上都不对,四、重金属检查法（Heavy Metal Test） 重金属定义 系指在

14、实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。药品中常见的重金属有铅、汞、砷、镉、铜等，由于铅较易带入药品中，且对人体危害较大，故进行重金属检查时一般以铅为代表。 检查意义 重金属毒性较大，易积蓄，可导致机体严重中毒症状。为保证药品的安全性，中国药典加强了重金属检查力度，规定了重金属检查项目。例如阿胶的重金属限量不得过30ppm，黄连上清丸的重金属限量不得过25ppm，地奥心血康的重金属限量不得过20ppm,（以铅为代表）,ChP（2005）共收载四法,第四法（微孔滤膜法）,第三法（硫化钠法）,第二法（炽灼残渣法）,第一法（硫代乙酰胺法）,（一）第一法,1、原理,适用溶于水、稀酸和乙醇的

15、药物,（硫代乙酰胺法）,2、操作,3、测定条件,1）标准溶液 硝酸铅 浓度 10g Pb/ml,适宜检测范围 1020g / 25ml （相当于标准铅溶液12ml),2）酸性条件,3）沉淀剂,4）比浊方法 同置于白色背景上， 自上向下观察,（pH在33.5时呈色完全）,25ml溶液中含缓冲液2ml为宜,醋酸盐缓冲液（pH3.5),硫代乙酰胺,5、供试液若有色,（1）外消色法,（3）改用第四法,（2）内消色法,向对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液,（微孔滤膜法）,（二）第二法 （炽灼残渣法 ） 适用于含芳环、杂环以及不溶于 水、稀酸、乙醇及碱的有机药物,将样品经500600炽灼后的残渣，

16、用硝酸、盐酸处理后，按第一法检查,注：含钠盐或氟的有机药物腐蚀瓷坩锅引入重金属，应改用铂坩锅或硬质玻璃蒸发皿,（三）第三法,1、原理, 适用于溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中生成沉淀的药物，如磺胺类、巴比妥类药物等,（硫化钠法）,2、操作,供试液 对照液,比浊,3、测定条件,（1）碱性条件,（2）沉淀剂,氢氧化钠溶液,25ml溶液中含5ml,硫化钠,注意：Na2S对玻璃有一定腐蚀性， 久置会产生絮状物，应临用新制,（四）第四法,1、原理同第一法 2、试剂量减少 3、反应时间延长,（微孔滤膜法）, 适用于含25g重金属杂质及有色供试液的检查,依一法检查，结果微孔滤膜过滤后比较色斑,供试液 对照液,操

17、作,比较铅斑,药典规定的一、二、四法是在酸性溶液 中，以硫代乙酰胺为显色剂； 三法则在碱性溶液中以硫化钠为显色剂,硫代乙酰胺,0.010.02mg Pb2+ /25ml,33.5,NaOH,33.5,0.002 0.005mg,硫化钠,硫代 乙酰胺,可溶于水, 稀酸和乙 醇的药物,不溶于水, 稀酸和乙 醇的药物,溶于碱 的药物,25g 重金属、 有色溶液,97：78重金属检查中，加入硫代乙酰胺时溶液控制最佳的pH值是（B） A. 1.5 B. 3.5 C7.5 D. 9.5 E. 11.5,95：84微孔滤膜法是用来检查（C） A. 氯化物 B. 砷盐 C. 重金属 D. 硫化物 E. 氰化物

18、,例1. 中国药典(2000年版)重金属检查法中，所使用的显色剂是（BC） A. 硫化氢试液 B. 硫代乙酰胺试液 C. 硫化钠试液 D. 氰化钾试液 E. 硫氰酸铵试液,例2. 葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件是（C） A. 用硫代乙酰胺为标准对照液 B. 用10ml稀硝酸/50ml酸化 C. 在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中 D. 用硫化钠为试液 E. 结果需在黑色背景下观察,例3. 现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用中国药典上收载的重金属检查的哪种方法（C） A. 一法 B. 二法 C. 三法 D. 四法 E. 以上都不对,定义 砷盐检查系指用于药品中微量砷盐（以As计算）的

19、限量检查方法。 意义 三价砷盐毒性极强，可引起严重的中毒症，危害生命安全。中国药典规定了砷盐限量检查项目，如阿胶中砷盐含量不得过3ppm，黄连上清丸中砷盐含量不得过2ppm。,五、砷盐检查法（ Arsenic Test ）,ChP（2005） 古蔡氏法 二乙基二硫代氨基甲酸银法,Ag-DDC法,（一）古蔡氏法, 1、原理,(黄色棕色),2、操作 （平行操作）,锌粒应无砷,立即观察,结果判断 供试品砷斑颜色比标准砷斑颜色浅或接近，则砷盐限量检查符合规定 若供试品砷斑颜色比标准砷斑颜色深，则砷盐限量检查不符合规定,样品溶液,标准砷溶液,样品砷斑,标准砷斑,醋酸铅棉花,H2S,AsH3,还原反应 (

20、25-40 ),溴化汞试纸,(三氧化二砷),3、测定条件,（1）标准溶液 三氧化二砷 (临用新配) 浓度 1gAs/ml,适宜检测浓度 2 g / 33ml （相当于标准砷溶液 2ml）,药典规定用2ml制备标准砷斑,（2）酸性条件,33ml溶液中含5ml,盐酸2mol/l（亦是反应物）, （4）酸性氯化亚锡（SnCl2 0.3）,A、使 As5+ As3+,C、与锌形成锌锡齐（去极化） 使氢气均匀而连续地发生,B、 （褪色）, （3）碘化钾（KI 2.5）,使 As5+ As3+,D、抑制SbH3的生成，消除微量Sb干扰 催化加速生成AsH3反应,能与Zn2+形成稳定的配位离子, （5）醋酸

21、铅棉花 Pb(Ac) 2 ,消除锌粒及供试品中少量硫化物的干扰,（6）溴化汞试纸 Hg(Br) 2 ,与砷化氢作用形成砷斑,醋酸铅棉花60mg装管高度6080mm,测砷瓶,测砷管,Hg(Br)2试纸,Pb(Ac)2棉花,玻璃试管,古蔡法,Ag(DDC),反应液,Ag(DDC)法,适用不含或含Sb小于100g供试品,适用含Sb量小于500g的供试品,（二）Ag-DDC法,直接比色或于510nm波长处测定吸收度,1、原理,(红色胶态),2、优点,（3）消除Sb干扰（500 gSb不干扰测定）,（1）灵敏度高 1 gAs/40ml,（2）重现性好,六、溶液颜色检查法,控制药物中有色杂质限量的方法,C

22、hP(2005)采用三种方法检查,第一法 目视比色法,第二法 分光光度法 单一波长定量,第三法 色差计法 全波长范围定量,观察方法,白色背景,标准比色液的配制,七、易炭化物检查法,检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质。,方法：H2SO4炭化后与对照液比较,八、溶液澄清度检查法,检查药物中的微量不溶性杂质 用作注射剂的原料药一般应作此项检查,1. 检查方法 对照法,等量,2. 浊度标准液的配制,药典规定浊度标准液作为澄清度检查的标准,反应原理：乌洛托品在偏酸性条件下水解产生甲醛，甲醛与肼缩合生成甲醛腙，不溶于水，形成白色浑浊。,浊度标准液（5个级号）须临用新制,(CH2)6N

23、4+6H2O 6HCHO+4NH3 HCHO+H2N-NH2 H2C=N-CH2 +H2O, 检查有机药物中混入的无机杂质 (金属氧化物或无机盐类) 亦称为硫酸灰分 原理 样品炭化后+ H2SO4湿润700800炽灼至恒重炽灼残渣（硫酸灰分）,九、炽灼残渣检查法,注意： 加硫酸处理是使杂质转化为稳定的硫酸盐，并帮助有机物炭化 遗留的炽灼残渣需留作重金属检查时， 炽灼温度应控制在500-600,例1. 炽灼残渣检查法一般加热恒重的温度为（C） A. 500600 B. 600700 C. 700800 D. 8001000 E. 10001200,例2. 炽灼残渣检查后，将残渣留作重金属检查时，

24、炽灼温度应为（A） A. 500600 B. 600700 C. 700800 D. 8001000 E. 10001200,十、干燥失重测定法,干燥失重是指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，主要是水分，也包括其它挥发性物质,（一）常压恒温干燥法,适用于受热较稳定的药物,干燥温度一般为105,干燥失重：干燥时间一般在达到指定温度后干燥2-4h，第二次及以后各次称重均在规定条件下继续干燥1h后进行，直至恒重,供试品平铺在称量瓶中的厚度一般不超过5mm,应用实例 板蓝根颗粒(无糖型)的水分及挥发性成分测定,计算 失重率（%）=(m1-.m2)/ms100% ml 为测试前供试品和称量瓶重量，g

25、 m2 为干燥后供试品和称量瓶重量，g ms 为供试品重量，g,恒重判断 干燥至恒重是指连续两次干燥后的重量差异在0.3mg以下,（二）干燥剂干燥法 适用于受热易分解或挥发的药物 干燥剂：硅胶、P2O5、H2SO4,（95版药典改为无水CaCl2）,（三）减压干燥法,适用于熔点低，受热不稳定或水分难赶除的药物,干燥剂：五氧化二磷 除另有规定外，压力应在2.67kPa（20mmHg）以下,例. 干燥失重测定中应注意哪几个方面（ABCD） A. 供试品平铺在称量瓶中的厚度一般不超过5mm B. 干燥温度一般为105 C. 可用干燥剂干燥 D. 主要指水分和挥发性物质 E. 测定时间不超过3小时,（四）热分析法,热重法是在程序控制温度下，测量物质质量与温度关系的一种技术,适用：贵重、易挥发、干燥有变化的药物,测定方法 热重分析法（TGA）质量变化 差示热分析法（DTA）温差 差示扫描