医学微生物学实验课件：实验3

1、实验三 主要内容 （一）细菌的人工培养 （二）正常人体及环境中细菌的检查 （三）理化生物因素对细菌的影响,细菌的生长条件包括：营养；适宜温度；一定的酸碱度；适当的气体环境；渗透压。 因此，可根据细菌对营养、PH、渗透压的要求制备细菌培养基。把细菌接种于培养基后，放恒温 （一般为37）箱内培养一定时间（通常1824h），细菌便可大量繁殖，可进一步观察和研究其生物学特性。,细菌的人工培养,细菌的人工培养程序为 1. 估计标本中细菌种类、数量及培养目的等，选用适当的培养基及接种技术。 2. 适宜的气体环境，37，1824h。,液体 培养基,斜面 培养基,接种技术一般分为分离培养接种法和纯种细菌接种法

2、。,细菌的接种技术,被检材料如粪便、痰、脓汁、尿液等常混杂有多种细菌，平板划线法可使混杂的细菌在琼脂平板表面分散生长，各自形成不同的菌落，再根据菌落的形态特征，挑选单个菌落继续培养，以此分离获得纯种细菌，用于进一步研究、鉴定或保存。 平板划线的方法根据待检标本中细菌的数量来选择，可分为分段划线法和连续划线法两大类。,（一）分离培养接种法-平板划线法：,第一区划线,接种环灭菌,第二区划线,接种环灭菌,第三区划线,接种环灭菌,1分段划线法（分区划线法）： 检查材料中含菌量较多时多用此法，以求获得孤立菌落。,2. 连续划线法： 检查材料中含菌量较少时可用本法。,（二）纯种细菌接种法 细菌经分离培养出

3、单个菌落后，常需再移种至其他培养基中，以进一步鉴定或保存菌种。根据接种培养基之物理性状，纯种细菌接种法可分为斜面培养基接种、液体培养基接种和半固体培养基穿刺接种法三类。,斜面培养基接种法 一般用于纯培养。从平板上挑取单个菌落接种至斜面培养基上，培养后获得大量纯种细菌（有菌苔生长），可进一步对细菌进行鉴定或作为菌种保存。,正常人体及环境中细菌的检查（4人/组） 1. 皮肤细菌的检查,右手食指在平板培养基表面相应部位轻轻涂抹,普通培养基,4,3,2,1,2.水中细菌检查,无菌空平皿,污水1ml,倾注约50琼脂培养基1管（约14ml），摇匀。,倾注普通琼脂培养基时温度勿太高或太低！,3. 空气中细菌

4、的检查,打开皿盖，暴露在空气中510分钟,普通培养基,4. 正常人体咽喉部细菌的检查,用灭菌棉拭在被检查者咽喉部轻轻涂擦后涂于血琼脂培养基一侧，然后改用灭菌接种环作分段划线接种。 （做好标记）,血琼脂培养基,4,3,2,1,（1）密集划线法接种细菌：用无菌接种环取细菌培养物少许，先在平板琼脂表面中央竖划一条线；垂直该线作平行密集划线，划满平板；将平板转动90度，再作平行密集划线，划满平板。,理化生物因素对细菌的影响（4人/组） 1. 紫外线对细菌的影响,照射,理化生物因素对细菌的影响（4人/组） 1. 紫外线对细菌的影响,（2）在紫外线灯下将平皿盖拉开一半，另半面由平皿盖遮住，照射20分钟。 （做好标记）,照射,2. 细菌对药物的敏感性试验（纸片法）,（1）以密集划线法接种细菌于整个平板 （2）用无菌镊子分别夹取含生理盐水及不同抗生素的滤纸片，轻轻贴在平板表面，并用镊子稍压，使之贴紧，滤纸片之间距离应基本相等。,注意无菌操作！,结果判定 将平板置37温箱培养24小时后取出观察滤纸片周围的抑菌圈，用