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文档简介

1、其他类型的ELISA,1.阻断ELISA,本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎（TGE）、猪伪狂犬病（PR）及猪胸膜肺炎（AP）的主要检测方法。 以AP2型抗体的阻断ELISA检测法为例介绍其操作程序：,(1)100l AP2型工作量抗原包被 4过夜，洗涤三次、抛干 。 (2) 用200l阻断缓冲液进行封闭 37 60分钟，洗涤三次、抛干。 (3)加工作量1:4稀释被检猪血清100l 37 60分钟，洗涤三次、抛干。 (4)加100l工作量兔抗AP2型血清 37 30分钟，洗涤三次、抛干。,(5)加100l工作量猪抗兔IgG-HRP 37 60分钟，洗涤三次、抛干。 (6

2、)加100l OPD底物液 37 20分钟，加终止液 。 (7)用ELISA检测仪测定OD值。 试验中同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。,（2）抗体捕捉ELISA,本法主要用于检测IgM抗体。由于IgM抗体出现于感染早期，所以检测出IgM，则可作为某种疾病的早期诊断。抗体捕捉ELISA根据所用标记方式不同可分为标记抗原、标记抗体、标记抗抗体捕捉ELISA等几种，其中以标记抗原捕捉ELISA比较有代表性，,IgM抗体捕捉酶联免疫吸附试验(IgM antibody capture ELISA，简称MAC-ELISA)或反向间接ELISA法是利用抗人Igm(链特异性)抗体包

3、被固相载体，作为“捕捉抗体”吸附待检血清中的Igu。 经过洗涤除去血清中IgC及其他成分，再加入特异性抗原与“捕捉”到的相应IgM抗体结合；然后加入酶标抗体和底物显色进行测定。,该方法的主要程序为： 用抗u链（抗IgM重链）抗体包被37 60分钟后置4过夜，洗涤三次、抛干 加待检血清 37 2小时，洗涤三次、抛干 加酶标抗原 37 60分钟，洗涤三次、抛干 加底物液 37 20分钟，加终止液 用ELISA检测仪测定OD值。,(3)布ELISA,（CELISA）CELISA（Cloth-ELISA）是加拿大学者Blais, B. W.等于1989年建立的一种新型免疫检测技术。该方法是以疏水性聚脂布（Hydrophobic Polyester Cloth）即涤纶布为固相载体，这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大，可为免疫反应提供较大的表面积，提高反应的敏感性，且容易洗涤，不需特殊仪器等优点。其基本原理与Dot-ELISA类似，只是载体不同。,以对布氏杆菌抗原的检测为例，CELISA的主要程序为： (1) 首先把抗布氏杆菌的血清包被（吸附）在聚脂布上，并经洗涤及封闭； (2) 加被检样品并于室温下感作30分钟，然后洗5次； (3

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