维生素类药物分析1.ppt

1、第九章 维生素类药物的分析,主要内容,维生素A 维生素D 维生素E 维生素B 维生素C,脂溶性,水溶性,维生素 维持人体正常生理机能所必须的生物活性物质,40%谷类和麦类主食,12%水果,18%蔬菜,10%肉类、蛋类 制品,10%乳类制品,10%油、脂肪 及甜品,人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。 例如： VA夜盲症 VB1脚气病 VD缺乏佝偻病,按溶解性分类 脂溶性：VA、VD、VE、VK等 水溶性：B族，VC、烟酸、叶酸、 泛酸等,维生素A的分析,结构特点：具有共轭多烯侧链的环己烷，有多种异构体 性质：有强紫外吸收，易被氧化，脂溶性,维生素A醇 维生素A醋

2、酸酯 维生素A棕榈酸酯,结构特点： 环己烯+共轭多烯侧链 天然VA侧链为全反式 天然来源主要是鱼肝油，人工合成醋酸酯，棕榈酸酯,鉴别试验,三氯化锑反应：维生素A+三氯化锑显蓝色渐变成紫红色 紫外吸收光谱：维生素A的无水乙醇-盐酸溶液在326nm波长处有单一吸收峰，将该溶液加热后再测定，在348，367，389nm处出现3个尖锐吸收峰。这是维生素A在盐酸催化下加热，发生脱水反应所致,含量测定,紫外分光光度法（三点校正法） 维生素A醋酸酯的环己烷溶液在328nm有最大吸收，吸收系数E=1530 维生素A醇的异丙醇溶液在325nm有最大吸收，吸收系数E=1820 由于维生素A中稀释用油和有关杂质也具

3、有紫外吸收，干扰测定，故采用三点校正法测定含量,等波长差法,等吸收差法,中国药典收载方法,第一法（维生素A醋酸酯的测定） 将维生素A溶于环己烷，在规定波长测定吸收度，计算吸收度比值（A/A328 ）,数据处理,如果max在326-329nm之间，且A/A328比值未超过规定值的0.02，可直接按下式计算含量：,换算因子F的由来,换算因子F=效价（IU/g）/E1%1cm 规定1IU=0.334g维生素A醋酸酯 则1g维生素A醋酸酯=1106/0.344=2907000IU 维生素A醋酸酯的E1%1cm=1530 故F=2907000IU/1530=1900,数据处理,如果max在326-329

4、nm之间，且A/A328比值超过规定值的0.02，需按校正公式计算校正值：,是否需要校正值的判断,如果max不在326-329nm之间，也用第二法测定,第二法（维生素A醇的测定）,不能用第一法的样品采用第二法测定 方法：维生素A醇皂化提取滤过浓缩干燥维生素A酯制成异丙醇溶液，在规定波长测定吸收度 数据处理：,是否需用校正值的判断,如果： 不需校正，用A325计算 则,讨论,干扰物质主要由 异构体、氧化产物、合成中间体及溶剂油 校正公式的推导 假定这些杂质在310-340nm处吸收呈直线，根据吸收度加和性原则，选择三个波长，用数学方法，即,维生素B1的分析,又称盐酸硫胺，结构特点： 有两个碱性基

5、团，有紫外吸收，在水中易溶,嘧啶环,噻唑环,鉴别反应,沉淀反应 氯化物反应本品为盐酸盐，显氯化物反应 硝酸铅反应与氢氧化钠共热，分解产生硫化钠，与硝酸铅生成黑色沉淀,硫色素反应,维生素B1在氢氧化钠溶液中，与铁氰化钾作用，被氧化成硫色素，在正丁醇中显蓝色荧光，加酸，荧光消失，加碱，荧光又出现 这是维生素B1的专属反应,含量测定,非水溶液滴定法 用于原料药测定 加醋酸汞消除盐酸干扰 1mol维生素B1与2mol高氯酸相当 紫外分光光度法 片剂、注射剂采用此法 以吸收系数法计算含量 硫色素荧光法 对照品对照法计算含量，方法专属，不受氧化产物干扰,硅钨酸重量法,维生素B1+硅钨酸白色沉淀，趁热过滤

6、沉淀依次用热盐酸、水、丙酮洗涤 80干燥至恒重 样品%=（沉淀重0.1939）/取样量100% 式中0.1939为重量换算因子，维生素B1的M=337.27，沉淀的M=3479.22，由于,维生素C的分析,结构特点 二烯醇结构，有强还原性 C3显酸性，可成钠盐 具共轭双键，有紫外吸收 两个手性碳，有旋光性 水中易溶，有糖类性质,鉴别试验,硝酸银反应维生素C被氧化，银被还原成黑色银沉淀 使高锰酸钾、亚甲蓝褪色 与碱性酒石酸铜作用，产生红色氧化铜沉淀 二氯靛酚钠反应二氯靛酚被还原成无色,糖类性质,维生素C+HCl（三氯乙酸）水解成戊糖失水糠醛+吡咯蓝色,杂质检查,澄清度与颜色控制氧化变色产物，以测

7、定一定波长下吸光度控制有色杂质 原料溶液应澄清无色，若有色，在420nm处测定吸光度，不得过0.03 片剂在440nm处测定吸光度，不得过0.07 注射剂在420nm处测定吸光度，不得过0.06 铁、铜离子采用原子吸收分光光度法测定,含量测定,碘量法维生素C分子中的烯二醇基具有还原性，能被I2定量的氧化成二酮基,测定方法,取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100mL与稀醋酸10mL，振摇使溶解，加淀粉指示液1mL，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30秒钟不褪。每1mL碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6 讨论：滴定前加入稀醋酸可减缓维

8、生素C受空气氧化，用新沸过的冷水做溶剂，除去水中溶解氧对测定的影响 维生素C片也采用碘量法测定含量，但需过滤除去辅料,维生素C注射液含量测定,精密量取本品适量（约相当于维生素C0.2g）加水15mL与丙酮2mL，摇匀，放置5min，加稀醋酸4mL与淀粉指示液1mL，用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色并持续30s不褪。每1mL碘滴定液（0.1mol/L）相当于8.806mg的C6H8O6 ：滴定前加丙酮是用来消除注射液中含有的抗氧剂亚硫酸钠对测定的干扰，丙酮与亚硫酸钠形成加成物而消除影响,2,6-二氯吲哚酚法,以2,6-二氯吲哚酚为滴定剂，终点时，过量一滴的滴定剂在酸性溶液中显玫瑰

9、红色而指示终点，无需另加指示剂 此法较碘量法专属性强，但滴定剂不稳定,维生素D的分析,为一类抗佝偻病的维生素总称，都是甾醇的衍生物，ChP收载维生素D2（Ergocalciferol）， D3 有多个烯键，不稳定，易氧化变质，使毒性增加，多个手性碳，具旋光性,鉴别试验,显色反应（甾类化合物的反应） D2+醋酐-浓H2SO4 黄红紫绿色 D3+醋酐-浓H2SO4 黄红紫蓝绿绿色 比旋度tD测定 D2无水乙醇液：+102.5+107.5 D3无水乙醇液：+105+112 D2 、D3区别反应 维生素D的醇溶液+85% H2SO4,含量测定,采用正相HPLC法 根据样品纯度，ChP采用三种方法 第一

10、法（适用于无VitA醇及其它杂质干扰） 对照品（ D2 、D3 ）+异辛烷超声助溶，充氮，避光0保存 内标液：邻苯二甲酸甲酯-正己烷溶液 色谱柱：硅胶柱 流动相：正己烷-正戊醇（997：3） 检测波长：254nm,测定方法,光照：使产生前维生素D3，反式维生素D3 ，速甾醇D3 ，连同维生素D3 ，进行系统适用性试验 重复进样，维生素D3的峰值RSD2.0% 分离度R1.0 采用校正因子法计算维生素D总量,维生素E分析,结构特征：具有苯并二氢吡喃结构，苯环上有1个乙酰化的酚羟基，易被水解、氧化；为脂溶性维生素。有四种异构体，其中型活性最强,鉴别,与硝酸反应维生素E与硝酸共热，显橙红色（生育红）

11、 水解后氧化反应维生素E在碱性条件下水解，与联吡啶和三氯化铁作用，显血红色。在该反应中，维生素E水解游离出生育酚，还原Fe2+Fe3+ ，后者与联吡啶生成血红色配位离子,杂质检查,合成型检查有关物质（GC） 天然型检查生育酚 生育酚采用硫酸铈滴定法,生育酚限量计算,规定：0.1g维生素E消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L）不得过1.0mL,含量测定,采用GC法 色谱条件 色谱柱：硅酮（OV-17），载气：N2 检测器：FID 内标：正三十二烷（正己烷溶液） 系统适用性试验 以维生素E峰计算应不低于500（毛细管柱5000），维生素E与内标的分离度应大于2,测定方法,校正因子测定：取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1mL中含1.0mg的溶液，摇匀，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20mg，精密称定，置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标溶液10mL，密塞，振摇使溶解，取1-3L注入气相色谱仪，计算校正因子 样品