微生物培养.ppt

1、考点1 微生物的应用,1.方法：平板划线法和稀释涂布平板法 2.原理：在培养基上将细菌稀释(稀释涂布平板法)或分散(平板划线法)成单个 细胞，使其成长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。 【稀释涂布平板法中培养皿中菌落的数目就代表稀释相应倍数后的菌 体个体数，所以稀释涂布平板法可以用来计数，但平板划线法不行】 3.注意事项：灼烧接种环后要冷却; 接着上次划线的末端划线; 不要将最后一区的划线与第一区相连; 涂布平板时，涂布器应用70%的酒精消毒。 4.平板划线法中每次灼烧接种环的目的： 第一次灼烧：避免接种环上可能存在的微生物污染培养基 每次划线前灼烧：杀死上次划线结束后接种环上残留的

2、菌种，使每次划线的 菌种均来自上次划线的末端。 划线结束灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,微生物的分离,平板划线操作,【问题1】在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端 开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末 端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由 单个细菌繁殖而来的菌落。,【问题2】平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高， 将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖 上的水珠落入培养基，造成污染。

3、,微生物与病毒的关系,1、关于病毒增殖的叙述中，正确的是（ ） A病毒侵入宿主细胞后，合成一种蛋白质 B病毒的繁殖只在宿主的活细胞中进行 C病毒的繁殖以核衣壳为单位 D在普通的培养基上能培养病毒 【解析】解答此题需从以下几方面入手分析：首先，病毒是营寄生方式生活，必须生活在活的细胞内，不能独立生活，所以在普通的培养基上不能生活。第二，繁殖时，病毒的核酸进入宿主细胞，利用宿生的成分合成子代个体，除了核衣壳，还应包括该病毒的其他结构。合成的蛋白质不只是一种，应该是多种，包括多种结构蛋白质及物质合成时所需的多种酶。 【答案】B,培养基的种类,2、要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用（ ） A加入青

4、霉素的培养基 B加入高浓度食盐的培养基 C固体培养基 D液体培养基 【解析】微生物的分离需使用固体培养基，由于某种细菌的种类不明，所以难以使用选择培养基，如加入青霉素的培养基可以分离到酵母菌和霉菌，加入高浓度食盐的培养基可以分离到金黄色葡萄球菌。 【答案】C,原油,选择,强,干热灭菌法,高压蒸汽灭菌法,火焰,专题4 酶的研究与应用,果胶酶在果汁生产中的作用 探讨加酶洗衣粉的洗涤效果 酵母细胞的固定化,一、果胶酶,半乳糖醛酸,1作用：能够分解果胶成为可溶性的_， 使浑浊的果汁变得澄清。,2组成,果胶,果胶分解酶,(1)并不特指某一种酶，而是分解_的一类酶总称。 (2) 包 括 多 聚 半 乳 糖

5、 醛 酸 酶 、 _ 和 ,_。,果胶酯酶,3来源,霉菌,酵母菌,细菌,植物、_、_和_均能产生果胶酶。,4应用,细胞壁,胞间层,果胶酶能够分解果胶，瓦解植物的_及_，,使榨取的果汁变得更容易_ 和_。,过滤,澄清,二、加酶洗衣粉,蛋白酶,脂肪酶,淀粉酶,1 常 用 种 类 ： _ 、 _ 、 _ 和 _，其中应用最广泛、效果最明显的是碱性_,蛋白酶,脂肪酶,和碱性_。 2去污机制,蛋白质,(1)碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有的大分子_ 水解成可溶性的_或小分子肽，使污物从衣物上脱落。,纤维素酶,氨基酸,(2)脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶也能将大分子_、 21_和22_水解为小分子物质。,淀粉,纤

6、维素,3.酶制剂特点：能够耐酸、耐碱、忍受23_ 和较高24_，并且通过特殊的化学物质将酶层层包裹，与,洗衣粉的其他成分隔离。,表面活性剂,温度,脂肪,探究果胶酶的用量,1实验原理,果胶在果胶酶的催化下形成半乳糖醛酸。(可用于植物体细,胞杂交，也可使榨取果汁更容易且使果汁澄清),2实验流程,(1)准确称取纯果胶酶 1mg、2mg、3mg、4mg、5mg、6mg、7mg、8mg、9mg，配制成相等体积的酶的水溶液，取等量放入 9 支试管中，依次编号为 19 号【也可只配制一个浓度的酶液，只是使用体积(量)不同】。制取苹果泥并称 45g 苹果泥，分装入 9 支试管中，每支试管中装 5g，依次编号为

7、 19 号。 (2)将上述试管放入 37的恒温水浴中平衡内外温度。 (3)一段时间后将不同浓度的果胶酶分别迅速与各试管的苹果泥混合，然后再放入恒温水浴中，约 20min。,(4)过滤后测量记录果汁体积。 (5)实验结果分析说明,实验中所用的果胶酶尽量使用其纯酶制剂或不含抑制物,的粗酶制剂，以免影响对酶用量的估算。,如果随着酶浓度的增加，过滤到的果汁的体积也增加， 说明酶的用量不足；当酶的浓度增加到某个值后，再增加酶的 用量，过滤到的果汁的体积不再改变，说明酶的用量已经足够， 这个值就是酶的最适用量。,【突破题 1】在用果胶酶处理果泥时，为了使果胶酶能够充分地,催化反应，应采取的措施是(,),A

8、加大苹果泥用量 B. 加大果胶酶用量 C进一步提高温度 D用玻璃棒不时地搅拌反应混合物 【解题指导】搅拌可以使酶与底物充分接触而提高反应效 率，使反应更充分。 【答案】D,酶活力测定及不同加酶洗衣粉洗涤效果的实验,1酶的简单制作方法,(1)对于细胞内的酶：用捣碎机、研磨器等机械将生物组织 细胞破碎，使酶从活细胞中释放出来，进入细胞外的溶液中， 经过滤、离心制备成粗酶液。,(2)对于分泌到细胞外的酶：直接从分泌物或细胞外的组织 间隙中提取，提取过程中注意温度、pH 等多种环境因素对酶活 性的影响。,2酶活力测定的一般原理和方法,酶的活力通常以单位时间内底物的消耗量或者在单位时间 内产物的生成量来

9、表示。例如，通过测定单位时间内麦芽糖的 生成量来检测淀粉酶的活力。另外，还可以通过测定单位时间 内淀粉的消耗量来检测淀粉酶的活力。,3常用酶制剂的种类及洗涤原理,4.探究加酶洗衣粉洗涤效果 (1)实验原理,加酶洗衣粉中含有酶制剂(蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤,维素酶)。,污渍中的蛋白质、脂肪、淀粉、纤维素在酶制剂的分解,下形成小分子物质。,温度、pH、表面活性剂会影响酶的活性。,(2)实验变量控制,比较普通洗衣粉与加酶洗衣粉的洗涤效果：自变量为洗 衣粉的种类，其余变量为无关变量，应严格控制，以免造成干 扰。,探究加酶洗衣粉的最适温度：水温为自变量，水温梯度,应较小。,不同种类加酶洗衣粉的洗涤效果

10、：洗衣粉种类为自变量。,【突破题 2】下列验证某种加酶洗衣粉需要的最适温度，实验正,确的是(,),A取一系列不同温度，其他条件相同的水，加入相同的污 物及等量加酶洗衣粉，看哪一个温度中的效果最好 B在不同温度的水中，加入不等量的洗衣粉，看哪种效果 好 C将加酶洗衣粉加入 30水中不如加到 45的水中洗涤 效果好，说明 45为最适温度 D将加酶洗衣粉与普通洗衣粉分别加入 37的水中洗涤同 样的污物，发现加酶洗衣粉效果好，说明加酶洗衣粉的最适温 度为 37,【解题指导】验证某种加酶的洗衣粉的最适温度的实验，,变量只能是温度，其余情况应遵循单一变量的原则。,【答案】A,果胶酶与纤维素酶的比较,【演绎

11、题】关于果胶酶的叙述中错误的是(,),A组成植物细胞壁的主要成分是果胶和纤维素，果胶主要 分布在细胞的初生壁和胞间层 B果胶有多种，果胶酶也有多种，如多聚半乳糖醛酸酶、 果胶分解酶等 C果胶酶在食品工业中有广泛的用途，在其他方面则无用 处，体现了酶的专一性 D果胶酶、纤维素酶配合使用，可分解植物细胞壁中的果 胶和纤维素，促使淀粉、脂质、维生素和蛋白质的释放，以提 高饲料的营养价值,【解题指导】果胶酶的作用是分解细胞壁中的果胶，有多 聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶和果胶酯酶等；在食品工业如制 作果汁、提高葡萄酒质量等方面作用很大，也常与纤维素酶等 共同使用，提高饲料营养和降低饲料黏度，促进饲料在动物

12、消 化道内的消化等作用。,【答案】C,1.(2011 届惠州调研)下列关于生物工程中酶的作用叙述不,正确的是(,),A纤维素酶可用于体细胞杂交 B胰蛋白酶可用于动物细胞培养 C限制性核酸内切酶只用于提取目的基因 DDNA 连接酶可用于 DNA 的拼接 【答案】C,2(2011 届广州调研)关于生物大分子结构或功能的说法，,正确的是(,),ADNA 分子的特异性主要取决于碱基的特定排列顺序 B纤维素酶能除去细胞壁，果胶酶可分解细胞膜 C一种 tRNA 只能识别一种密码子，但能携带多种氨基酸 D肽链的盘曲和折叠被解开，蛋白质的特定功能不会发 生改变 【答案】A,3(2009 年广东文基)嫩肉粉是以

13、蛋白酶为主要成分的食品,),添加剂，就酶的作用特点而言，下列使用方法中最佳的是( A炒肉的过程中加入 B肉炒熟后起锅前加入 C先用沸水溶解后与肉片混匀，炒熟 D室温下与肉片混匀，放置一段时间，炒熟,【解析】本题考查酶的使用方法，酶的活性容易受到温度， 酸碱度影响而失活，所以要保持酶的活性，才能使之发挥作用。 ABC 在反应之前都经高温处理了，所以酶失去活性，只有 D，先 让酶反应，后炒熟，不影响酶的作用发挥。,【答案】D,直接使用酶、固定化酶和固定化细胞催化的优缺点如下表所示：,1.灼烧灭菌：接种用具和接种过程中的试管口或瓶口放在酒精灯火焰的充分燃烧层中进行灼烧灭菌（如教材16页图2-2所示）

14、。,常用的消毒与灭菌的方法,2.干热灭菌：将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥的物品放到干热灭菌箱内，在160170OC中加热12h即可。,3.高压蒸汽灭菌：将需灭菌的物品放到盛有水的高压灭菌锅内（见教材16页图2-4）煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到100kPa，温度到121OC后，维持1530min即可。,纤维素分解菌的筛选 刚果红染色法,原理：,刚果红是一种染料，它可以与像纤维素这样的多糖物质形成红色 复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当我们 在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维 素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后

15、，刚果红纤维素的 复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈。 这样，我们就可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。,纯化大肠杆菌,原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落， 这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。方法：平板划线法、稀释涂布平板法。,显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的 样品中微生物数量。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌,统计菌落数目的方法,统计菌落数目时，常用来统计样品中活菌数目的方法是 稀释涂布平板法 。除此之外， 显微镜直接计数 也是测定微生物数量的常用方法,【练习1】下列关于生物

16、学研究方法及技术的叙述，错误的是 （ ）A用稀释涂布平板法可通过统计菌落数来推测样品中的活菌数 B进行胚胎分割移植时应选用发育及形态正常的桑椹胚或囊胚 C利用试管婴儿技术培育新个体的过程属于无性繁殖 D利用PCR技术进行DNA扩增时不需要加入解旋酶,【练习2】分离土壤中纤维素分解菌用到的方法（ ） 稀释倒平板法 涂布平板法 单细胞挑取法 选择培养分离 A B D 【解析】分离土壤中纤维素分解菌，先进行选择培养，增大纤维素分解菌的浓度，梯度稀释，涂布平板、培养，单细胞挑取以获得纯培养。稀释倒平板法是先进行梯度稀释，然后分别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至50左右的琼脂培养基混合、摇匀后，倾人灭

17、菌的培养皿中，制成可能含菌的琼脂平板，保温一定时间即可出现菌落。涂布平板法是先将溶化的培养基倒人无菌培养皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的某一稀释度的样品液涂布在整个子板表面，经培养后形成单个的菌落。答案：B。,【练习3】在微生物群体生长规律的测定中，种内斗争最显著最激烈的时期是 A调整期 B对数期 C稳定期 D衰亡期 【解析】种内斗争是一种生态因素。种内斗争反应了种内生物对生存空间和生活资源的争夺。在生 活空间充裕，营养充足的时候，种内斗争的程度是比较低的。随着微生物个体数目的增加， 每个个体的生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源的争夺 也越来越激烈，种内斗争

18、就越来越激烈。由此可知，在稳定期的种内斗争最激烈。在衰亡 期，微生物的数目已经开始减少，PH已经极度不适于微生物的生存，次级代谢产物积累到 很高的程度，这时的微生物的生存斗争主要是与无机环境的斗争。答案：C,【练习4】要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用() A固体培养基 B液体培养基 C加入青霉素的培养基 D加入高浓度食盐的培养基【解析】固体培养基主要用于微生物分离、鉴定等，液体培养基用于工业生产，加入青霉素的选 择培养基能抑制细菌、放线菌的生长，从而分离酵母菌和霉菌；加入高浓度食盐可抑制 多种细菌生长，从而分离金黄色葡萄球菌。本题没说明分离哪种细菌，故应用固体培养 基，如在固体培养基上以划线方法接种，然后再分离出