硕士论文-Umu试验方法优化及在环境中应用研究

1、河南师范大学硕士学位论文Umu试验方法优化及在环境中应用研究姓名：刘鹍鹏申请学位级别：硕士专业：环境科学指导教师：潘峰20080601水以及沿途污染较重的污水的注入，致使出新乡市前卫删水的遗传毒性升高。通过尚庄污水处理厂进水、出水水样分析和卫河新乡市区段的水样分析，验证了经过优化保存条件的菌种和经过优化的试验方法。关键词：试验，遗传毒性，菌种活化，标准曲线，最佳测试区间，（一）（一。），（），（），（），（），一（）（）酽（）一，曲，：，图一图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图图插图清单修复反应的调节机理试验原理样品的响应曲线。样品响应曲线指数段的

2、值拟合阳性对照物的标准曲线标准曲线指数段的值拟合的代谢通路优化保存菌种不同保存时间的生长曲线优化保存菌种生长曲线及活化生长曲线活化点优化保存菌种不同生长时期的活化生长曲线优化保存菌种不同保存时间最佳活化区间的活化生长曲线不同保存条件及活化条件菌种生长曲线保存菌种活化标准曲线保存菌种未活化标准曲线保存菌种未活化标准曲线不同稀释倍数吸光值不同稀释倍数生长速度活化生长曲线不同生长时期稀释点不同生长时期不同稀释倍数吸光值不同生长时期稀释生长速度不同稀释倍数（，）标准曲线不同稀释倍数（，）标准曲线不同稀释倍数（，）标准曲线不同稀释倍数标准曲线不同稀释倍数标准曲线，吸光值不同稀释倍数吸光值不同稀释倍数生长

3、速度活化生长曲线不同生长时期标准曲线点不同生长时期（，）标准曲线不同生长时期（）标准曲线不同生长时期（）标准曲线不同生长时期标准曲线不同生长时期标准曲线，吸光值不同生长时期标准曲线吸光值不同生长时期标准曲线生长速度阳性对照物经水样预处理方法处理的标准曲线尚庄污水处理厂处理工艺流程及进水出水取样点尚庄污水处理厂进水和出水效应曲线新乡市卫河水样取样点卫河建设桥水样响应曲线下河曲里水样响戍曲线卫河新乡市区段及其支流的暗渠工程示意图污水处理厂排水注入与卫河水样的遗传毒性错误！未找到引用源。独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别

4、加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河南师范大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。关于论文使用授权的说明渺、本人完全了解河南师范大学有关保留、使用学位论文的规定，即：有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权河南师范大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）日期：幽墨墨第一章绪论第一章绪论环境毒理学是研究环境污染物

5、对生物体的毒性和作用机制的学科，它不仅以环境污染物作为研究对象，而且还将环境污染物作为工具，阐明环境污染物与生物体之间的交互作用及造成的不良效应的性质和剂量结构反应（效应）关系，为指导化学物质的安全使用和防止中毒提供依据。现代毒理学的研究方法已经广泛用于有毒化学品的管理，工业化学物质的控制，以及对它们造成的不良效应进行定性定量评价【】。而化学物质“三致”作用，特别是化学物质致癌作用则是环境毒理学研究的主要内容之一。化学致癌物质在中国各城市的癌症发病率都呈明显上升趋势，恶性肿瘤在三年中已上升至全国大城市居民死因顺位的第位【】。全球每年有一千万人口被确诊为癌症、畸形人，预计到年全球癌症的年发病率将

6、达到一千五百万。每年癌症的死亡人口为六百万，占全球死亡人口的。现己确定的人类癌症可归因于环境因素，其中主要是一些环境化学物质，另外还有病毒（如某些致癌病毒）和物理因素（如一射线、放射性核素氡）】。据估计，约有的人类癌症是由于环境化学物质引起的【。化学致癌物质的环境行为两百多年前有人以临床观察和流行病学调查为依据发现烟筒清理工人多发阴囊癌，证实了环境化学因素可以引起癌症。之后，又有人发现苯胺染料生产工人易得膀胱癌。年，有人用乙醚提取烟煤中的物质，将它涂抹在小鼠皮肤上，结果诱发了皮肤癌进一步证实了炯煤中存在着致癌性化学物质。之后又陆续发现吸烟与肺癌，对二氨基苯及芳香胺类与膀胱癌】，石棉与间皮组织恶

7、性肿瘤【”，苯与白血病以及黄曲霉素与肝癌之间都存在着因果关系。在过去的两个多世纪里，尽管人类对化学物质与癌症的认识有了很多进展，但近年来，在全球范围内区域性污染导致的癌症发病率上升（如美国马萨诸塞州的儿童白血病等）现象仍然十分普遍。究其原因是由于近几十年来，随着科学技术的进步和工业时代的到来，在生产环境中发现的致癌性化学物质越来越多；而在试验方法优化及在环境中应用研究生活环境中，人们通过饮用被污染的水，吸入被污染的空气，食入含有残留农药的农副产品等，比以前更有机会接触到更多的化学致癌物。作为全球性的公众健康问题，如何对癌症进行有效的预防和控制已经成为全人类共同关注的重要课题。尽量避免与致癌物的

8、接触，是人类目前防癌斗争最有效的方法。世界卫生组织（，）在年的第五十八届世界卫生大会上通过了预防和控制癌症的决议，该决议指出有的癌症可以通过戒烟、合理饮食和避免致癌物暴露来避免的【。就化学物质致癌而言，大部分的化学物质暴露致癌都是长期的低剂量暴露造成的，因而许多化学物质导致的癌症病例和死亡都是可以预防的。而对环境中化学致癌物质的检测及其致癌风险评价是避免与其接触的前提条件，是癌症预防和控制的基础。化学致癌物质的种类目前世界上已经合成的或已鉴定的化学物质有多万种，常见的或在使用中的有万种之多，化合物、混合物和消费产品的数量达数百万种。常见的“三致”化学物质主要涉及表中的类物质【。化学致癌物质的作

9、用机理从机体暴露于化学致癌物质至机体出现致癌作用的过程可分为启动阶段、促癌阶段和进展阶段【。（）启动阶段：致癌物直接作用于，引起基因突变，使多个或少量细胞发生永久性的、不可逆的遗传性改变。（）促癌阶段：细胞在致癌作用的第一阶段变成启动细胞后，在某些因素的促进下克隆扩增，形成细胞群，即良性肿瘤，这是致癌作用的第二阶段。（）进展阶段：启动和促癌两个阶段所引起的良性损伤并不是致死性的。良性肿瘤需要经过进展阶段才能转变为恶性肿瘤。第一章绪论表“三致”化学物质的分类类别典型化学物质典型物化学结构式芥子气、氯甲甲醚、环氧乙烷、硫直接烷化剂（，（卜。一（）酸二乙酯间接烷化剂氯乙烯、苯、丁二烯抗癌烷化药物陋一

10、（删苯并芘、二甲基本葸、二苯葸、三甲国多环芳烃基胆葸、煤焦油、沥青、联苯胺、乙萘胺、：文）一芳香胺类一氨基联苯、硝基联苯金属和类金属镍、铬、镉、铍、砷、亚硝胺及亚硝二甲基亚硝胺、二乙基亚硝胺、亚硝酰胺酰胺一“霉菌和植物毒黄曲霉素、铁霉素、黄樟素舻素叮。上又懈，结晶硅及石棉结晶硅及石棉吸烟、嚼烟、槟榔、鼻烟、过量的酒嗜好品精饮料食物的热裂解苔乏杂环胺类、一氨甲基咪唑喹啉、产品药物（含某些激鼍还磷酰氨、噻替派、乙烯雌酚素）试验方法优化及在环境中应用研究三个阶段中，启动和进展都涉及突变。细胞突变学说（）指出致癌因素包括化学因素、物理因素、生物因素，这些因素使机体细胞的遗传物质发生突变，结果使细胞的功

11、能发生异常改变而致癌，即癌变形成的基础是机体细胞发生突变【，】。研究证明，不论是用动物、植物还是微生物作为检测材料，“三致”效应（致癌、致畸、致突变）之间具有很高的相关性。至少有的致癌物质也是致突变物质，】。但由于致癌和致畸试验需要较长的时间才能得出结果（一般动物致癌试验需要三年的时间，而且花费较大），而测定致突变效应可以短时问内得到结果，因此，依据化学物质的致突变性可以预测其是否具有潜在的致癌或致畸危险。致突变试验的分类致突变试验主要是研究外源性化学物质引起人类基因突变并通过生殖细胞传递给后代的可能性。若致突变化学物质作用于人或哺乳动物的胚胎细胞就会造成畸胎，若作用于体细胞便可能产生肿瘤【。

12、不论是用动物还是植物作为检测材料，诱变剂引起的“三致”效应（致癌、致畸、致突变）具有很高的相关性。因此依据某种化学物质的致突变性可以预测它是否具有潜在致癌或致畸危斛】。哺乳动物致癌试验是鉴定化学物质致癌性的标准活体试验，但哺乳动物致癌试验评价化学物的致癌性花费较大、时间较长，整个试验过程一般需两年以上的时间。而且新化学品不断涌现，对每一种新化学品都进行动物致癌试验的话，要消耗非常多的人力、物力和财力。另外，由于致癌试验所用的动物品系和试验动物数量有限，对一些致癌性较弱的化学物有可能无法检出。基于突变与癌变之间的关系，致突变试验被广泛应用于外源性化学物质对哺乳动物及人体的致癌性预测。近年来，发展

13、了大量的快速、简便、经济而又敏感的遗传毒理学短期检测方法，用以评价化学品的致癌、致突变活性。合理应用组合的成套短期测试方法可部分克服哺乳动物试验费钱、费时，或因长时间、大剂量给药可能产生较多的假阳性的缺点。致突变试验的检测终点包括基因突变，染色体损伤以及一些直接检测损伤（如加合物测定、链断裂测定等）或间接反映损伤的试验（如对损伤修复的检测）。致突变试验旨在评定外源化学物质对生殖细胞及体细胞的致突变性，对遗传危害性作出初步评价并预测其致癌的可能性，同时致突变试验还可用于环境诱变剂第一章绪论污染的检测及评价。过去的二十多年里，对各种环境因子致突变性效应的生物检测在环境毒理学研究中已占有十分重要的地

14、位，它们在环境污染监测和环境保护中发挥了积极的作用。大量的致突变分析方法被用于识别生殖细胞诱变剂、体细胞诱变剂、潜在致癌剂，所涉及的方法已经超过种。所用的指示生物涉及病毒、细菌、霉菌、昆虫、植物、培养的哺乳动物细胞和哺乳动物等。根据这些指标所检测的遗传学终点，可将致突变试验分为三类，即基因突变试验（）、染色体损伤试验（）及反映损伤的试验（）。虽然已建立的致突变试验有多种，但大部分实验方法的有效性尚待进一步证实，目前常用的、具有一定可靠性的致突变试验方法仅几十种，如表所示【】。常用的致突变试验方法目前常用的短期致突变试验包括试验，显色试验，微核试验，哺乳类细胞突变检测法，染色体畸变检测法和程序外

15、合成检测法等。试验（细菌回复突变试验，）年艾姆斯（）教授创建了细菌回复突变试验【引，人们称为试验，是当前世界各国都熟知的快速检测方法之一。该试验的基本原理是利用鼠伤寒沙门氏菌一系列组氨酸营养缺陷型（）菌株，在加入哺乳动物肝微粒体酶（）活化的条件下，测定化学物质诱导组氨酸操纵子回复突变成为组氨酸营养型回复子（向括）的能力，故属于回复突变检测体系。当组氨酸营养缺陷细菌回复突变为原营养型时，细菌从不能合成组氨酸到能合成组氨酸，因此能在不加组氨酸的培养基上生长，极易被鉴定选出。根据在不含组氨酸的培养基上生长的细菌菌落数目，与对照组比较，来测定化学物质诱导微生物基因突变的能力【。由于法简便、易行，不需要

16、特殊器材，因此容易推广。但微生物修复系统不如哺乳动物复杂，基因也不如哺乳动物多，所得结果不能完全代表哺乳动物的实际情况。尽管如此，因存在着上述优势，此法目前在致突变检测试验中仍占有重要的位置，广泛应用于环境样品的致突变检测【。试验方法优化及在环境中应用研究表致突变试验的基本类型检测检测遗传终端指标分析系统终点材料微生物鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（试验）营养缺陷突变的回复试验大肠杆菌色氨酸回复突变试验哺乳动物小鼠淋巴瘤或人体细胞位点基因突变试验正向突变分析基因细胞试验中国仓鼠或人体细胞位点基因突变试验突变果蝇试验生殖细胞基因突变性连锁隐性致死突变（）试验生殖细胞基囚突变和缺失小鼠生化特异基因座试

17、验哺乳动物分析引起小鼠骨骼或晶体缺陷的显性突变试验转基因小鼠中细菌靶基因小鼠、大鼠中突变突变小鼠肠吃突变染色体结构畸变中国仓鼠或人类淋巴细胞中期相分析哺乳动物人类淋巴细胞染色体断裂细胞质裂阻断微核分析细胞试验异常细胞分裂着丝粒、染色体有丝分裂器异常有丝分裂非整倍体染色体计数检测超倍体染色果蝇试验性染色体非整倍体性染色体丢失试验体损体细胞染色体损伤分析嗜多染红细胞微核分析伤试生殖细胞染色体损伤卵母细胞、精原细胞或精母细胞染色体畸变试验验生殖细胞染色体损伤间接哺乳动物小鼠精子细胞微核试验证据试验生殖细胞可遗传的染色体小鼠可遗传易位试验畸变有丝分裂非整倍体小鼠骨髓细胞超倍体检测损伤修复枯草芽孢杆菌修

18、复缺陷与野生型差别杀死分析微生物显色试验试验诱导大肠杆菌试验损伤修复。非程序修复合成（）试验损伤哺乳动物诱发人或中国仓鼠细胞试验细胞分析加合物诱变剂加合物检测哺乳动物诱发啮齿类骨髓细胞试验损伤修复啮齿类肝细胞第一章绪论显色试验（）等人于年首创了该方法，并已进行了大量改进。】。该试验使用大肠杆菌构建含有：融合基因的菌株，用于反应的检测。当受损后，反应启动：融合基因表达，产生半乳糖甘酶，根据该酶的产生量从而估算受试物的遗传毒性。该试验目前已用于环境样品的遗传毒性检测，其检测范围包括空气、食品及水污染物的监测、藻类对工业废水的影响、重要药用植物研究等许多方面【。微核试验（，）微核是由染色体或染色体的

19、无着丝点片断或因纺锤体受伤而失去的整个染色体，在分裂后期，仍留在细胞质中，或因核膜受损后核物质向外突出延伸形成，成为一个或几个规则的圆形或椭圆形小体，其嗜染性与细胞核相似，比主核小，故称微核。进行分裂的细胞，在染色体断裂剂作用下，均能产生微核，因此可用微核率的变化来检测诱变物。由于测定方法比较快速可靠，近年来，该法己作为化学致突变试验的一种常用筛检方法，目前常用的微核测定方法由小鼠骨髓多染性红细胞微核测定（），蚕豆细胞微核测定，胞质分裂阻滞微核测定（）及紫露草花粉母细胞四分体微核测定法。染色体畸变检测法（）染色体畸变测试法用来检测致突变物引起细胞染色体结构和数目的改变。染色体畸变检测的材料有离

20、体培养的细胞株和动、植物体外细胞。核型己确定的任何一种细胞株，几乎都能用于体外细胞遗传学分析。尤其是高等植物细胞染色体畸变检测法，由于其染色体结构与哺乳动物（包括人）相似；同一个体分生的植株可作多项检测，能降低个体异质的影响；植物生活周期短，显示致突变效应所需的时间也短；可在广泛控制的条件（如、温度等）下研究环境致突变物的效应；易观察检测；花费低，因此，近几十年来，该检测法在国内外发展很快【。哺乳类细胞突变检测法（）待测物诱导哺乳类细胞突变与诱导细菌突变在原理上没有根本的区别，但理论上用哺乳类细胞进行检测，更能反映被测物在人体内的作用情况。目前这一检测系统发展较试验方法优化及在环境中应片研究快

21、，已有多个相对完善的检测方法。虽然哺乳类细胞突变检测法与细菌突变检测法的原理相同，但由于细菌与哺乳类细胞在生理、结构和生化代谢上的不同，因此二者的检测结果相互独立。巴奇（）等曾测试过种化合物，沙门氏菌微粒体酶法单独使用时敏感性为，在与哺乳类细胞突变法联测其中种致癌物时，敏感性提高至，】。程序外合成检测法（，）试验是通过测定受损的切除修复合成水平来评价受试物能否对原代哺乳动物细胞和哺乳动物细胞系造成损伤，以及损伤程度。目前检测法己成为化学物质致癌性、诱变性快速预筛的方法之一【彤】。第二章试验方法及应用第二章试验方法及应用自年代以来，环境毒理学研究得到迅猛发展，开发实验、展开分析法、显色反应、分析

22、法、程序合成实验、基因突变分析法等一系列化学物质致突变和遗传毒性检测方法。其中实验得到非常广泛的应用，但是所需菌株多、操作复杂、检测时间长等缺点。及其同事建立的澳试法，克服了上述法的缺点，近年开始应用于环境科学领域【】。试验的原理试验是的缩写形式，其原始含义是经紫外线照射引起的突变。试验（又称试验）是年等【】根据损伤时诱导反应而表达基因这一基本原理建立并发展起来的检测环境诱变质的短期筛选试验。基因来源于大肠杆菌，其主要的两种存在形式是：和。基因的大小为，属于聚合酶，其跨越无碱基位点的合成能力比聚合酶高倍；基因的大小为，也属于聚合酶，它能促进损伤的修复。和是调节子的重要成员，诱导后表达。凭借它的

23、蛋白酶活性，把在和之间切开，得至）的才是活性形式，非但无益，反而有损诱导反应，在诱变中起作用的是元化合物。由于试验具有快速、敏感、廉价等优点，因而被广泛应用于遗传毒理学研究、环境监测与质量评估以及药效评价和新药筛选等方面【，】。损伤修复遗传信息之所以能长期保持高度保真（）即重现精度，是由于细胞能够通过对损伤的修复以保护亲代链，使之避免由于外来因素作用而发生改变。大部分的修复都通过高保真度的修复来完成，修复无误，突变不会发生。但是也有一些是易错（）修复系统，由于修复错误或没有修复，损伤就得以固定下来，于是发生突变。因此，诱变是一个受控过程，而修复的失控才真正能由损伤导致突变。一般来说经过几个细胞

24、分裂周期仍然未能正确修复，损伤才固定。试验方法优化及在环境中应用研究反应修复反应是和（）提出一套复制后的修复系统（该系统主要在链复制时起作用），菌体的受放射线或致突变物质等作用受到损伤后，合成停止，受损诱导产生一系列物质，同时产生修复所需的酶，使受损的修复，重新恢复细胞分裂，这一过程称为修复反应，即反应。此时细胞表现为修复功能增强、细胞生长正常但分裂受到抑制、基因突变增加、呼吸受阻等。这种修复系统必须在损伤因素的诱导下才能发生，而且修复虽使生物体免于死亡，但容易出现修复错误，所以是一种易错修复（）。许多研究都证明通过对菌株修复的测定可以反映化学物质的致癌及致突变性质，。修复系统是由和两个基因调

25、节控制，整个修复过程分为个阶段，如图所示。诱导前期：细胞在受损前基因处于较高的活动水平，其基因产物蛋白质是对基因、基因、操纵子，以及包括、和在内的其他个基因的阻抑物（）。由于基因的高浓度状态，这些基因的产物通常都处于低水平。诱变因素作用期：诱变因素对的某些损伤可成为诱变因素的第二信使，诱导修复系统反应。能作为第二信使的损伤有烷化腺嘌呤、寡核苷酸、缺口、单链片断以及可能尚未知道的某些损伤。诱导过程：当存在上述第二信使，且有三磷酸腺苷（）同时存在时，蛋白质被活化为蛋白酶，具有裂解蛋白质的功能。一旦蛋白质被裂解，所有参与反应的基因、，都将充分表达。其中的表达将产生更多的蛋白质，只要第二信使未消失，蛋

26、白质作为蛋白酶的作用就会持续下去，直至修复完毕。终止：随着第二信使被排除，蛋白质的诱导信号亦同时结束，蛋白质水平又再度上升，并作为阻抑物与操纵基因结合，关闭操纵子，终止过程。第二章试验方法及应用蛋白质蛋中被激活调节子产生反应基因充分表达图修复反应的调节机理试验的原理测试系统正是基于损伤物诱导反应而表达基因的能力，在鼠伤寒沙门氏菌中导入携带”嵌合体的质粒，该质粒携带操纵子，基因和”融合基因的启动子及四环素和氯霉素耐药基因，允许通过药物选择转化株，新构建的细菌为，试验原理如图所示。当菌体由于致突变物作用而受损时，产生修复反应，无活性的蛋白被激活，激活的蛋白可与单链（）结合形成核蛋白体，后者介导蛋白

27、裂解，蛋白水平的下降可诱导调节子，大量转录基因，同时也激活原被蛋白阻遏的相关基因、等。产生半乳糖苷酶的报告基因与操纵子基因相融合，通过质试验方法优化及在环境中应用研究粒整合于鼠伤寒沙门氏菌菌株的中，基因在正常情况下被阻遏蛋白所封闭，一旦环境污染物使细菌的受损，细菌即产生反应，生成具有活性的蛋白水解酶蛋白水解酶，该酶切除，分裂阻遏蛋白，使受封闭的操纵子启动，并带动基因转录、翻译，生成半乳糖苷酶，根据该酶被诱导生成的数量【】，即可判断受损的程度。未诱导的重组基因删嘲器卜淼亡丁工亡工丁了丁卫转录。了。，翻译具有半乳糖苷酶活性的融合基因融合蛋白图试验原理试验方法（试验）试验菌株最常用的菌株是，它是实验

28、的最早被开发的测试菌株【，它也是构建以下测试菌株的基础。（）内含氧一乙酰转移酶（）的：氨基偶氮染料和芳香胺能被乙酰转移酶系统活化成有活性的代谢产物。因而将构建的含有乙酰转移酶基因的质粒导入菌株从而形成第二章试验方法及应用，可以加强检测此类化合物的敏感性【击。（）内含氧一乙酰转移酶（）和硝基还原酶（）的：许多硝基芳烃类物质只有被硝基还原酶，酰转移酶系统激活后才有活性，为构建对此类化学物质高度敏感的细菌菌株，将构建的含有硝基还原酶及一乙酰转移酶（）基因的质粒导入原始而形成，用于检测硝基芳烃类物质【，】。（）：将含有大鼠矛操纵子的质粒导入宿主细菌。的活性比高倍，因而检测那些经代谢活性或失活的环境化学

29、物非常有效【，。（），：将”：和导得到柳，。为了加强对杂环芳香胺类（）的敏感度又将”：矛导入缺乏的，接着将”：和导入缺乏的，形成了；通过实验发现其对含有氨基的化合物（，等）有很好的检测效果；其中：的灵敏度更高，】。实验步骤经典试验的实验步骤如下：（）取一定量冷冻保藏的菌液于培养基中，。下振荡（）培养小时，或者。下振荡（）培养。（）将培养后的菌液用培养液适当稀释后。下振荡（）培养（前培养）。（）取一定量的阴性对照（）、阳性对照（）及样品加入各平行试管中，再加入前培养液摇匀，下振荡（）培养。（）取（）中菌液，在处测定菌液的吸光度值（）另取定量的（）中菌液加入有溶液、三氯甲烷的试管中，振荡摇匀，加入

30、显色剂，在。静置显色。试验方法优化及在环境中应用研究（）加入一定量的溶液，停止反应。（）取反应液，分别在和处测定菌液吸光度值。（）计算半乳糖苷酶诱导活性（一，）。本文在此实验步骤的基础上，对试验方法进行了优化，优化后，实验步骤稍有不同，在方法优化中已作说明，不再一一罗列。活性计算与评价方法（）半乳糖苷酶诱导活性值（）通过、菌液的吸光度、值用下面的公式计算半乳糖苷酶诱导活性值（）：（）（）（）：菌液在波长下的吸光度（菌液浊度）：菌液在波长下的吸光度（显色剂的显色强度）：菌液在波长下的吸光度（细胞破壁后的碎片浊度）：加入后的反应时间（）：反应菌液在显色过程中的稀释倍率（）（）诱导比率（）通过样品及空白对照的半乳糖苷