酶免疫测定常用仪器设备的使用和维护.ppt

1、酶联免疫测定常用仪器设备的使用和维护，卫生部临床检测中心王露楠，主要仪器设备，取样器加系统洗衣机酶标全自动检测系统，酶标酶标的发展，功能的扩大测定更广的吸光度范围。 从可见光扩展到紫外检测。 追加温度调节功能。 追加了酶动力学和凝聚等测定功能。 追加滤波器自动识别功能与颜色测量前的振动板功能相比，追加了2波长或多波长测量功能。 追加定性定量测量统一分析软件的功能。 酶标记物酶标记物的发展、适用性的扩增酶标记物可从常规的96孔检测模式扩增到384，1536孔模式，该酶标记物对功量大、检测项目多的实验室可加快检测速度。 酶标由简单的比色仪器发展为发光、荧光、时间分辨率荧光、紫外检测相结合的多功能检

2、测仪器。 Wallac ViewLux还具有比色、发光、荧光、时间分辨率荧光测定功能。 这些多功能免疫测定仪器的出现，使实验室在进行ELISA测定的同时，可以很容易地展开使用发光、荧光、时间分辨率荧光法的检查项目，不需要追加购买仪器设备，可以大幅节省实验室的空间。 酶标记物-酶标记物的使用，1 .测定波长范围： 400 nm750或800 nm常用波长： 450 nm和492 nm目前国内常见的ELISA试剂盒中使用的标记酶均为辣根过氧化物酶(HRP )。 基质通常为四甲基联苯胺(TMB )和邻苯二胺(OPD )的2波长比色： 620 nm或630 nm或650 nm和405 nm的波长的滤光

3、片， 酶标记物酶标记物的使用2 .测定的吸光度范围通常在： 02.5之间可以满足ELISA的测定放大：3.5以上的要求：不必对酶标记物的吸光度范围有意地追求大的吸光度范围，主要需要看一定吸光度范围内的线性和精度酶标记-酶标记的使用，3 .光学系统：也有酶标记单通道)检查，一般是硅光管或光纤，除了测定通道以外，一部分酶标记也有参照通道，每次测定都可以自我校正。 性能指标：吸光度范围、线性、精密度和准确度的多通道：测量的精密度与测量通道之间的均匀性有直接关系。 单通道：可以避免通道差异造成的差异，酶标记酶标记的使用，4 .检测速度酶标记的检测速度是完成比色测定所需的时间。 有利于检测速度快，提高检

4、测的精密度，即避免由于测定中的测定时间的不同而导致的各细孔间的吸光度的不同。 酶标记物-酶标记物的使用，5 .振动板功能振动板的目的：板孔内颜色均匀6 .温育功能不再需要外接温箱。 温育功能是酶标记的附加功能，是否能够说明酶标记等级的高低和机器的优劣。 是否选择作为实验室，可以根据自己实验室的条件和需要来决定。 酶标记物-酶标记物的使用，7 .软件功能：指酶标记物具有的ELISA定性和定量测定以及其他测定方式，如酶标记物动力学、紫外和凝聚等统一分析和结果报告的功能。 灰区：软件功能是中高级酶标记的非常重要的功能。 如果酶标记具有阳性判定值(CUTOFF )及其测定“灰区”(即测定吸光度在CUT

5、OFF周围的一定区域，该区域内的结果为“可疑”)的统一校正计算功能，则不仅在实验室工作人员，在某些特定情况下也具有较高的实用价值。 定量：四残奥仪方程能较好地反映免疫测定的剂量反应曲线，最适合定量酶联免疫测定的曲线拟合。 选择酶标记的酶标记，(1)工作所需的(2)酶标记的性能：测定波长范围、滤波器配置、检测速度、吸光度范围、线性范围、分辨率、精度、精度等。(3)实验室财力(4)售后服务(5)外语水平、酶标记的酶标记的选择、酶标记的中心标记会自动对酶标记的孔进行中心标记，中心标记是为了消除酶标记的孔底凹凸造成的厚度不均而进行检查的不正确光源的参照通道参照通道用于校正电压不稳定或灯泡磨损的影响，酶

6、标记酶标记的自测和校正，1 .外观酶标记需要仪器名称、型号、编号、厂家、出厂日期和电源电压。 每个调节旋钮、按钮和开关都必须正常工作，外表面没有明显机械损伤的显示文本必须完整。 2 .酶标记的稳定性(漂移)选择492nm的波长，测定吸光度为0.0A、标称值为1.0A的光谱中性滤波器(测定操作按照机器的说明进行)，记录机器的显示值或平均值，10分钟后再次记录机器的显示值或平均值，前后2次的测定值之差为0.5 酶标记-酶标记的自测和校准，3 .吸光度测定的精度选择405、492和620 nm的波长，以空气为参考，分别测定标称值为0.5和1.0A的光谱中性玻璃过滤器，用专用的测试板代替酶标记，设备说

7、明通4 .吸光度测定的再现性酶靶的第1列加入空白溶液，第2列加入浓度200g/ml的重铬酸钾溶液，重复测定5次。 酶标记-酶标记的自测和校准，5 .将酶标记的线性选择540nm波长、标称值0.5、1.0a中性滤波器分别放入专用测试板的样品位置，以空气为参考，各重复测定3次后， 将以上2片中性过滤器重叠放置在专用测试板的同一孔位置，重复测定3次。线性误差6 .测定速度的检定选择492nm波长，放入96孔酶目标进行测定，用秒表校正测定器打印所有数据的时间。 酶标记物-酶标记物的自测和校准，7 .通道差检测：取酶标记物的小孔杯(杯底光滑、透明、无损伤、无污染)，以酶标记物架为载体，分别放入3种不同浓

8、度的甲基橙溶液200 ul，8通道的蒸馏水为零的8 .孔隙差的测定：选择同一制造商、同一批号的酶标板(修订96孔8根)，分别加入200 ul的甲基橙溶液(吸光度调整为0.065 0.070 A )，放入同一通道，蒸馏水为零，采用双波长检查，其酶标记的双波长问题、双波长测定：由于标本中干扰成分的存在及孔杯本身的质量等原因，测定结果的假性多增高，酶标记所提供的双波长测定功能可以消除干扰成分或因素对测定结果的影响。 关于样品中干扰成分的去除，在选择参照波长时，必须研究干扰成分的光谱，正确地选择参照波长，另一方面，为了消除孔杯本身的质量问题等干扰因素，只要选择远离测定波长的参照波长即可，在保证测定结果

9、的正确性方面非常重要。旋切机-旋切机的选择、1 .清洗功能的充分性基本残奥表：旋切机次数、根数、浸渍时间尽可能：底部清洗、两点吸液最小残留量2 .板孔的互换性和扩张性互换性主要是针对国内规格、尺寸稍有不同的微孔板的兼容性， 机器应该具有微孔板的位置调节功能，可扩展性主要是为了适应86式微板等新出现的一些应用情况，很多清洗机不能清洗。旋切机-旋切机的选择，(3)机器本身和清洗效果的可靠性1是机器本身的可靠性，保证机器在使用寿命期内能够正常显示、精确运动，这可以通过调查机器制造商的技术和生产实力来论证，二是洗涤效果的可靠性，即用手代替洗涤(4)部件是否充分提供经常使用的易损件，如清洗头，应该准备8

10、道、12道，定期淘汰，如清洗液瓶、硅胶管等应该能方便购买，清洗机清洗机的选择，5 .售后服务冲压机的注意事项为：1.以一定的清洗次数多次清洗有利于获得良好的效果，一般为6次以下。 2 .每个孔的加液量最好加满，但不要溢出，一般建议在每个孔300微升3 .清洗前进行位置调节，吸针进入细孔底部，降低残留量。 4 .为了获得高清洗效果，建议采用2点吸液和底部清洗方式。 5 .每天使用后，用双蒸水清洗管道。 6 .定期维修、检修设备及配件。采样器-采样器的类型、单通道连续可变式移液管多通道连续可变式移液管单通道移液管组合使用的移液管、采样器-采样器-采样器的校正、校正环境和工具的要求：室温： 2025

11、电子天平：无尘和受振动的影响称量时，为了确保天平内的湿度(相对湿度60-90% )，在天平内放置装有10 ml蒸馏水的小烧杯。 烧杯：体积510 ml。 测定液体：温度2025的脱气双蒸水。 选定的校准体积：取样器校准体积的中间体积最小可调体积(要校准的体积的10%以上)。 对于伪校准体积固定体积取样器，校准体积只有一个。 取样器-取样器的校正、校正步骤：将取样器调整为校正体积，选择适当的吸引头，调节天平，往复吸引蒸馏水3次，使吸引头湿润，用纱布擦拭吸引头，垂直握住取样器，将吸引头浸渍在液面23 mm，缓慢(13秒) 一致吸引蒸馏水的吸引头离开液面，靠近管壁，除去吸引头外部的液体，将模板以30

12、角称量放入烧杯中，慢慢一致，将模板按到第1段，等待13秒后按到第2段， 完全排出吸引头内的液体，擦拭记录称量值的吸收头外部，按照上述顺序称量10次，用最后的取样器吸引10次，将10次的测定值的平均值作为蒸馏水重量，用附表所示的蒸馏水z因子修正体积。 根据校正结果调整取样器。 取样器的注意事项是，根据必要的取液量选择相应的移液管和吸液头吸液时，要慢慢等速吸液，避免液体的回吸。 调整吸取液量的旋钮时，请注意不要过度用力，计数器上显示的数值不要超出可调范围。 连续调整式移液管在没有吸头时不能使用。 吸头有液体时不能弄平或倒置。 操作时必须慢且稳定，吸嘴浸入液体的深度适当，吸液过程必须尽可能保持一定在吸入不同的液体、样品或试剂前更换吸嘴如果发现吸嘴内有残留液，需要更换使用新吸嘴前取样器的注意事项最好是使用有酸或腐蚀蒸汽的溶液后，取下套筒，用蒸馏