实验方案的格式

1、实验方案一.实验标题:土壤中细菌的分离纯化第二，实验设计理念:细菌是具有非常实用价值的微生物，世界各国对其研究和资源开发非常重视。目前有关国内细菌的口腔调查及资源开发有一些报道，但对其他作物根际细菌的研究很少。甘肃天水脉积山海拔1742米，是黄土高原潮湿地区，植物生长土壤地区有机质含量丰富。此次实验以该地区落叶松、马尾松、白松、野豌豆等作物生长地区的土壤为材料，分离细菌进行鉴定，探讨了徐璐不同作物根际土壤中细菌分布的数量和种类差异，分析了各菌种在植物生长过程中的作用，最后据推测，麦积山大面积土壤中微生物的分布丰富，对植物生长贡献很大。三.实验目的:1.学习培养基最基本的制备方法。2.学习最基本

2、的微生物灭菌、接种等基本操作过程。2.掌握最基本的分离，纯化微生物的一系列操作工作。四。测试方法:以天水脉积山不同植物根部的土壤为土壤样品，通过对该土壤中微生物的一系列培养、分离、筛选，最终分离细菌得菌，通过稀释版菌集水法测定数量。四。实验原理：1.菌种来源：由于各种细菌对营养物质的需求不同，与在不同地方筛选所需的细菌含量和其他杂菌含量的杨怡直接相关，因此选择微生物含量可以从丰富的土壤(千手脉赤山植物根地区)取样。2.选择培养基：为了在一定程度上抑制其他微生物的生长，使所需的细菌生长良好，必须选择培养基。要将细菌与其他微生物区分开来，还要使用鉴别培养基。选择牛肉奶油蛋白培养基，实现选择培养基和

3、鉴别培养基。3.培养和分离纯化：通过涂布培养法、木板下划线等实现分离纯化的目的。4.保存：通过分离纯化获得的菌种、接种和倾斜培养基经过一定时间后，进行全代培养保存，不死亡，减少突变引起的生物学特性变化。5.通过形态和染色确认：各种微生物具有特定的殖民地形态特征和单细胞形态特征，因此可以通过这些形态进行鉴定。细胞壁构成不同，可以用鉴别染色法鉴定，也可以不生产孢子而进行孢子染色。通过以上方法，对分离纯化的菌种进行初步鉴定。6.通过生理生化反应进行鉴定。各种微生物在代谢类型上有很大的差异。例如，表达大分子糖类和蛋白质的分解能力、分解代谢最终产物的差异，就表明徐璐还有其他酶系。我们在实验室允许的条件下

4、，进行了糖类发酵和氧化、过氧化氢酶能否生产、细胞色素氧化酶等生理生化实验，重新鉴定。5 .实验材料:1.记载：玻璃杯、天平、搪瓷、三角瓶、量筒、漏斗、试管、培养皿、吸管、培养基分配器、电炉、接种环、移动枪、PH试卷(PH 5.4-9)2.牛肉奶油、蛋白胨、NaCl、1mol/LNaCl、1mol/LHCl。六。实验阶段：1.牛肉奶油蛋白胨培养基组成：(1)。公式及其分布：牛肉奶油0.3g。蛋白胨1gNaCl0.5g。琼脂粉1.5g水100ml注意：PH 7.2-7.4分别根据需要更改的数量进行配置。(2)。据说，约：根据培养、配方和调配量分别采取药品，将小于总量的水放入烧杯，将每个培养和成分(

5、琼脂除外)放入水中溶解。(3)。加热溶解：将玻璃放在石棉网(搪瓷杯可以直接用小火加热)，用小火加热，继续搅拌，使每种药品快速溶解，然后补充水分所需的培养基数量。(4) PH值调节：最初调配的牛肉奶油蛋白培养液为微酸性，需要用1mol/LNaOH将PH调节到7.2-7.4。调整时，为了避免碱性，必须慢慢添加NaOH液。也就是说，在降低NaOH的同时，要均匀地混合培养液，然后用PH试纸对酸度值进行计算。(莎士比亚，Nooh，Northern Exposure(美国电视剧)，)检查培养基的pH，如果有pH偏酸，请下降1mol/L NaOH，搅拌，然后用pH试卷检查，直到达到所需的pH范围。有碱性的话

6、请使用调整到1mol/LHCl。PH调节通常在添加阵地之前进行。要注意不要控制太多的PH值。要防止回调影响培养基中各离子的浓度。(5)。过滤器：液体培养基可以用滤纸过滤，固体培养基可以在4层纱布热的时候过滤，观察结果。但是一般使用的培养基。可以省略此步骤(6)可以将：被实验要求分成配方的培养基放入试管或三角瓶。化妆时可以使用三角漏斗，使培养基埋在喷嘴或瓶口，以免造成污染。分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后形成斜面。分成三角瓶最好不要超过容积我的一半。半固态培养基以试管高度的四分之一为宜。灭菌后垂直凝固。(7)。棉塞试管入口和三角瓶盖里放上用普通棉花(非非脱脂棉塞)做的棉塞，棉塞的形

7、状、大小、松紧度要适中，四面紧贴管壁，不留缝隙，才能防止杂菌入侵和通风作用。要把棉塞总长放在约3/5插件试管入口或瓶口内，确保棉塞不会掉下来。有些微生物需要更好的空气，可以用8层纱布做成通气塞。有时还可以用试管帽或塑料盖代替棉塞。(8)包裹：加税，将三角瓶的棉塞外包成牛皮纸或双层报纸，防止灭菌时冷凝液被棉塞弄湿。把培养基分配给试管，首先要把试管捆成捆，然后外包棉塞-层牛皮纸。然后用标记笔标记培养基名称、组、日期。(9)灭菌：以上述培养为121湿热灭菌20min为基础。如果由于特殊情况不能及时灭菌，应在冰箱里暂时存放。(10)。倾斜杀菌后，培养基冷却到50 60后，要制作坡度，必须在热的时候将试

8、管入口放在长木条上，调整坡度，使坡度长度不超过试管长度的一半。(11)。将无菌检查：灭菌培养基放入37温箱中培养24-48h，在无菌生长时使用，或放入冰箱或干净的碗柜中准备。无菌生理盐水配置：在0.85g NaCl上，将棉塞插入包含100毫升蒸馏水的三角瓶，包裹一层牛皮纸，在加压蒸汽灭菌锅中的121C至20min灭菌，称为无菌生理盐水。3土壤稀释液取样和制备：(1)。土壤预处理；取出采集的土样，去除其中较大的杂质，粉碎它，准备走。(2)制土液：在装有无菌玻璃珠的250毫升锥虫病10g中，用消毒的量筒溶解90毫升无菌水，摇晃约20分钟，充分混合泥土和水。在火焰附近点燃酒精灯，用无菌移动枪吸入1m

9、l的土壤显液，充分混合在装9ml无菌水的大试管中，然后用无菌移动枪吸入试管中1ml，放入装9ml无菌水的另一个试管中，均匀混合，10-1，10-2，10-3，10-3，10-34.涂层接种：上面的9个盘子各贴3个标签，然后无菌移动液枪分别吸收10-4、10-5、10-5、10-6 3管土壤稀释液中的0.1毫升，放在写有稀释度的盘子里，使用无菌玻璃注意：所有接种工作必须无菌5.培养。在摄氏30度的恒温室里培养3天观察和纯化。观察并记录殖民地特征。再倒两盘。点燃的酒精等附近在稀释度适当的培养板上选择有龙仁圈的菌落，在新制作的板上画线，分离，在摄氏30度的温度调节器上培养3天7.倾斜培养放置坡度。选

10、择单个殖民地，接种在三个斜坡上培养。在28 30C孵化器中培养72H。与此同时，用单细胞进行以下情感实验。革兰氏染色1.1涂层现有涂层方法在1.2秒的盐液中，将结晶子(最好完全复盖菌膜)染色在涂层上，染色1-2min，倒入染液，冲洗细水，清洗液无色。1.3媒染剂用碘液媒染约l分钟，水洗。1.4脱色用滤纸吸掉幻灯片上剩下的水，倾斜幻灯片，在白色背景下用吸管脱色95%的乙醇，直到流出的乙醇没有紫色为止，立即水洗，停止脱色和干燥。1.5再染色在涂布中加入半红液，重新染色约2-3min，用水冲洗，然后用吸水纸吸干。1.6检查镜子干燥后用油镜观察。判断两种菌体的染色反应性。菌体染成蓝紫色的是革兰阳性菌(

11、G)，染成红色的是革兰阴性菌(G-)。清洁1.7显微镜。先用镜子纸擦镜片的油，然后用镜子纸沾一点二甲苯擦掉镜片的剩余遗迹，最后用镜子纸擦掉剩下的二甲苯。孢子染色(1)要培养的菌被涂、干燥、固定。(2)将3 5滴孔雀绿色染液放入固定涂层。(3)用木夹子夹住幻灯片，在火焰中加热，使染液产生蒸汽，但不沸腾，蒸出染液渡边杏，必要时可以添加一些染液。加热时间从染液喷出蒸汽开始计算约4-5分钟。这个阶段也不加热，用饱和的孔雀绿水溶液(约7.6%)染色10分钟。(4)倒入染液，冷却幻灯片，水洗，直到孔雀不再褪色为止。(5)用反洪水溶液重新染色1分钟，然后水洗。(6)干燥后，观察油镜，Vii .数量：常用的平

12、板菌计数法是根据每个活细菌均生长菌落的原理设计的。(亚里士多德，伦理学，谚语)取一定容量的菌现液，进行一系列配比稀释，然后将定量稀释液进行平板培养，根据培养的菌群数量计算出培养物中的活菌数。这种方法灵敏度高，是检测污染的生菌数的方法，也是目前国际多个国家采用的方法。使用此方法时要注意，1一般选择30 300的菌落数的板太多或太少，则不准确。为了防止细菌蔓延，影响影响数量，培养基中可以添加O.001% 2，3，5氯化三苯四氮(TTC)。本法仅限于形成殖民地的微生物另一种活细菌计数法的原理是，各活细菌可以在适当的培养基和良好的生长条件下通过生长形成菌落。将测试对象样品稀释一系列10倍，然后选择3个稀释度的菌液，分