附子回阳救逆量效关系的实验研究

1、作者：邓家刚，范丽丽，郝二伟，柳俊辉【摘要】 目的探讨附子回阳救逆功效的量效关系，为临床安全用药提供客观实验依据。方法制备附子供试药液，测定酯型生物碱乌头碱含量、半数致死量，筛选附子有效剂量范围，分别测定失血性休克大鼠模型平均动脉压(map)、心率(hr)，心动过缓小鼠模型hr，统计实验数据绘制量效关系曲线，线性回归分析附子不同剂量与相应实验指标的相关性。结果附子供试药液酯型生物碱乌头碱的含量为0.036 4%，ld50=31.24 g/kg;附子能显著扩张血管升高map，加快hr，在0.56 g/kg剂量范围内，剂量与其升高map作用呈正相关，在0.54 g/kg剂量范围内，剂量与其加快hr

2、作用呈正相关;附子能显著对抗心动过缓，在0.722.89 g/kg剂量范围内，剂量与其对抗普萘洛尔所致心动过缓作用呈正相关。结论附子回阳救逆功效显著，且在一定剂量范围内存在量效关系，一旦超出相应剂量范围动物易出现毒性反应，影响实验动物存活率，提示附子临证用药的可能安全范围为5.5644.44 g/d。【关键词】 附子; 回阳救逆; 量效关系; 相关性附子有“回阳救逆第一品药”之称，与人参、熟地、大黄并称为“中药四维”，是临床常用的中药之一。但同时附子“毒”与“效”的矛盾在临床实践中一直困扰着历代医家，有“最有用而最难用当推附子”之说：有医家坚持“附子大毒，不可用，非用必小”，不可贸然用之;而另

3、有以“火神派”为代表的医家认为“附子为百药之长”，“量小无效”，须重用。目前困惑临床医生的是附子大剂量应用有无必要，是否可行。笔者选用附子完成其回阳救逆功效的实验研究，探讨其量效关系，为临床安全用药规范提供实验依据，进而为中药剂量与功效的相关性研究提供客观实证 参考 。 1 材料与仪器1.1 动物昆明种小鼠，清洁级，雌雄兼有，体质量(282)g ，(202)g，由广西医科大学实验动物中心提供(scxk桂2003-0003)。sd大鼠，清洁级，雌雄兼有，体质量(25020)g，广西药品检验所实验动物中心(scxk桂2003-0001)。1.2 药物附子，购自四川省成都市荷花池药材市场，经广西中医

4、学院中药鉴定教研室鉴定为毛茛科植物乌头aconitmn carlnicadi debx.的子根加工炮制品，采用水煎2次，每次1 h，12乙醇醇沉，减压浓缩，配置成4 g/ml冰箱保存;乌拉坦：上海试剂三厂;普萘洛尔：湖北华中药业有限公司生产;氢化可的松注射液：扬州制药有限公司生产，规格：5 ml25 mg;肝素钠注射液：江苏万邦深化医药股份有限公司生产，规格：2 ml12500单位。1.3 仪器医用压力传感器， 中国 北京航天医学工程研究所生产;bl-410生物机能系统，成都泰盟科技有限公司生产;el204 电子 天平，梅特勒-托利多仪器有限公司生产;hh-4数显恒温水浴锅，国华电器有限公司生

5、产; lambda系列紫外/可见分光光度计,美国perkinelmer公司生产;tgl-16m低温超速离心机，湖南塞特湘仪有限公司生产。 2 方法2.1 酯型生物碱乌头碱的含量测定附子供试药物中酯型生物碱含量的测定方法依中国药典2005版制定1。2.1.1 对照品溶液制备精密称取乌头碱对照品20 mg，置于10 ml容量瓶中，用无水乙醇溶液并稀释至刻度。2.1.2 标准曲线制备精密量取对照品溶液0.25，0.50，1.0，1.5，2.0 ，2.5 ml，分别置25 ml量瓶中，均无水乙醇使成2.5 ml，各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5 ml，摇匀，在6065水浴中保温10 min，放冷，加高

6、氯酸铁试液13 ml，摇匀，放置5 min，精密加入高氯酸试液8 ml，用高氯酸铁试液稀释至刻度，摇匀，放置15 min，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在520 nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。2.1.3 测定法精密量取样品10 ml，低温蒸干。残渣加三氯甲烷2 ml使溶解，转入分液漏斗中，用0.05 mol/l硫酸溶液提取3次，每次5 ml，酸液依次用同一三氯甲烷10 ml振摇洗涤，合并酸液，加氨试液调节ph值至9，再用三氯甲烷提取3次，每次10 ml。三氯甲烷液依次用同一水20 ml振摇洗涤，合并三氯甲烷液，低温蒸干，残渣加无水乙醇适量使溶解

7、，转入5 ml量瓶中，用无水乙醇分次洗涤容器，洗涤液并入量瓶中，再加无水乙醇至刻度，摇匀。精密量取上述溶液及无水乙醇空白溶液各2.5 ml，分别置25 ml量瓶中，照“2.1.2”标准曲线的制备项下的方法，各“各精密加入碱性盐酸羟胺试液1.5 ml”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中酯型生物碱乌头碱的重量(g)， 计算 ，即得。2.2 附子急性毒性实验2.2.1 预试验昆明种小鼠20只，体质量(202)g，随机分成5组，每组4只，选择5组剂量的中药附子水煎醇沉液，每只小鼠以0.4 ml样品溶液进行灌胃，观察小鼠出现中毒反应的症状并记录死亡数，分别找出各样品dm值(100%死亡量)

8、与dn值(0%死亡率)。2.2.2 正式实验昆明种小鼠50只，体质量(202)g，雌雄各半，按体质量和性别随机分成5个组，每组10只，以dm和dn值，根据分组及剂量比值公式确定组间剂量比值，配成5种浓度，每只0.4 ml灌胃给药，给药后观察7 d，观察和记录有无异常反应和死亡情况，计算ld50。2.3 附子剂量对失血性休克大鼠map和hr的影响2sd大鼠，清洁级，雌雄各半，体质量(25020)g。大鼠称重，腹腔注射乌拉坦麻醉后，仰卧固定四肢，尾静脉全身肝素化。接好心电图ii导联，连接bl-410生物机能系统检测hr。大鼠行右颈总动脉插管，接换能器以监测map。分离十二指肠以备给药。在20 min内放血至map 3540 mmhg (1 mmhg=0.133 kpa)，稳定不再回升即为放血终点，记录hr值。随机分为空白对照组、模型对照组、附子各剂量组，每组10只。于十二指肠分组给药，对照组给等量生理盐水，观察记录map值和hr值。2.4 附子剂量对心动过缓小鼠hr的影响3昆明种小鼠，(282)g，心电图筛选hr为540780次/min用于实验，雌雄各半，随机分为空白组、模型组、附子各剂量给药组，共8组，每组12只。小鼠灌胃给予普萘洛尔药液(80 mg/kg)造模。空白对照组及模型对照组10 min后腹腔注射生理盐水(10 ml/kg