第12章 钙、磷、镁和微量元素检验

1、第十二章钙、磷、镁和微量元素的检测，第一节是第二节钙、磷、镁和微量元素的检测，第一节是第一、钙、磷代谢和调节(一)的含量和分布钙是体内含量最多的无机盐，体重的1.5%2%，总量约77 99%以上的钙和86%以上的磷以羟基磷灰石的形式堆积在骨、牙上。 (二)吸收和排泄吸收：在pH值低的小肠上段，钙的吸收率随年龄降低，每增加10岁就减少5%，婴儿的吸收率达到50%以上，孩子达到40%，成人达到20%左右，因此老人容易患骨质疏松症。 磷的吸收率约为70%，低磷可达到90%。 排泄：主要通过肠道和肾脏。 钙： 80%肠道20%肾磷： 30%肠道70%肾脏，(三)血钙和血磷血钙大部分存在于血浆中，正常血

2、清钙为2.252.75mmol/L(911mg/dl )。 离子钙50%可扩散钙血钙H HCO3柠檬酸钙碳酸氢钙结合钙50%蛋白结合钙非扩散钙，发挥生理作用的是离子钙，但在临床实验室测定的是总钙。 血浆中Ca2、h、HCO3的关系由下式表示。 血磷是指血液中的无机磷酸盐(HPO42、H2PO4)健康人血清无机磷0.971.61mmol/L(35mg/dl )，儿童稍高。 CaP=3540比40骨盐沉积大，有利于骨钙化。 溶解小于35骨盐。 (四)钙、磷生理功能钙：1.参与凝血。 2 .参与肌肉收缩。 3 .维持神经肌肉的压力性。 4 .作为第二信使。 磷：1.作为核酸、磷脂、磷蛋白质合成的原料

3、。 2 .参与高能磷酸化合物的合成。 3 .构成核苷酸的辅酶。 4 .构成磷酸盐缓冲对。 (5)钙、磷代谢调节1 .维生素D3 (vitd3) d25-ohd 31，25-(oh ) 2d 3与促进肠道钙、磷吸收的肾小管钙、促进磷再吸收的PTH合作，促进骨重建。肝、肾、1-羟化酶、25-羟化酶、促进溶骨作用，促进间质细胞向破骨细胞的转化，抑制破骨细胞向成骨细胞的转化，促进肾小管对钙的再吸收，抑制磷的再吸收。 3 .降钙素(CT )甲状腺滤胞旁细胞分泌的32肽与PTH拮抗。 促进成骨作用，抑制间质细胞转化成破骨细胞，促进破骨细胞转化成成骨细胞，抑制肾小管对钙、磷的再吸收。 PTH间质细胞破骨细胞

4、CT2，镁代谢和生理功能(1)镁代谢1 .镁的含量和分布占体重的0.03%，正常成人镁总量2028g，其60%存在于骨架中，200%存在于骨骼肌中，剩下的10%存在于其他组织中。 体液中细胞内液镁的含量占全体的39%，细胞外液仅占1%。 血中镁血浆镁的浓度约为0.671.23mmol/L，存在形式主要有3种。 离子镁55%血镁碳酸氢镁、柠檬酸镁、磷酸镁等15%蛋白质与镁结合起30%生理作用的是离子镁。 3 .食物镁吸收和排泄量丰富，人体每天需要300350mg，镁的吸收主要是小肠，吸收率仅30%，吸收率与肠内镁的含量成反比。 体内镁的排泄主要通过肾脏。 (二)镁的生理功能1 .作为酶的辅助因子

5、体内约300种酶的辅助因子为Mg2。 2 .维持神经肌的应激性Mg2可以降低神经肌的应激性。 三、微量元素和疾病(一)的体内化学元素的组成和分类人体中约含有50种元素。 主要元素含量为0.1g/kg体重c、h、o、n、s、p、Ca、k、Na、Cl、Mg等所需要的Fe、Cu、Zn、Mn、Co、Ni、Se、I、f等14种微量元素含量为0.1g/kg体重所不需要的Si、As、Rb、b、Al 微量元素对人体各种生命活动的影响1 .促进生物生长的铁、铜、锌、锰、钴、碘等作为酶2 .影响神经系统结构和功能的铁、铜、锌、锰、钴、碘等不足时，会导致神经系统结构和功能异常，智力下降3 .影响内分泌系统的铜、铁、

6、锌、锰、铬等元素的不足和过剩会引起内分泌功能异常。4 .对免疫系统的影响铁、铜、锌等不足时，可以降低机体免疫力。 5 .影响心血管疾病和创伤的适量锌、锰、铬、硒等元素有利于心血管结构和功能。 例如，食物中的锌/镉比与高血压的发生和预后密切相关。 多种微量元素也影响核酸和蛋白质的生物合成，有利于创伤的愈合和疾病的恢复。 一、钙的血钙的测定方法很多。 化学法滴定法(氧化还原滴定法、络合滴定法)比色法(邻酚酞配合物法、甲基麝香草酚蓝法)。 物理法火焰光度法ISE法原子吸收光度法同位素稀释质谱。 血液钙测定，第二节钙、磷、镁和微量元素测定，1.EDTA-Na2络合滴定法在碱性溶液中把血清钙和钙红指示剂

7、结合成可溶性复合体，使溶液变成淡红色，EDTAna2对钙有很大的亲和力， 与复合体中的钙结合，再次使钙红指示剂游离，使溶液变成蓝色，由EDTAna2滴定量计算血清钙含量。 钙红钙红复合体淡红色钙红复合体EDTA-Na2EDTACa钙红蓝，钙指示剂除了钙红外，铬黑t (红蓝)，钙黄绿素(黄绿)，品红酸氨钙红指示剂终点明显，不受血清镁影响，镁在强碱条件下生成Mg(OH)2，指示剂在强碱条件下不稳定，要在加指示剂后立即滴定。 操作简单，不需要特殊仪器设备，适合基层医院，但终点的判断人为误差大，溶血、黄疸影响终点的判断。 2 .邻酚酞络合酮法(O-CPC )邻酚酞络合酮是金属络合染料，也是酸碱指示剂，

8、在碱性溶液中与钙和镁螯合，生成紫红色螯合物(吸收峰575nm )，生成钙由于Mg2 8-喹啉醇可溶性配合物ca2oo酚酞配合物酮紫红色螯合物灵敏度高，试管、器具如果有微量的钙污染就会引起误差，所以最好使用一次性试管将所有试剂保存在塑料瓶中。 甲基麝香草酚蓝法(MTBB )血清钙在碱性溶液中与甲基麝香草酚蓝(MTB )结合，生成蓝色络合物，加入8-喹啉醇除去镁干扰。 发色稳定，线性范围宽，对溶血、黄疸无影响。 4 .离子选择电极法(ISE )该方法快速、简便、灵敏度高，再现性好，能同时测定总钙和离子钙，离子钙的测定最好用血清，不使用抗凝剂，需要测定结果时用肝素抗凝。 【正常参考值】成人总钙2.2

9、52.75mmol/L离子钙1.151.42mmol/L，二、无机磷的测定不能直接测定现在人体内的磷元素，各种方法可以直接分析2种磷酸盐阴离子(HPO42，H2PO4)哦1 .磷钼酸法用三氯乙酸沉淀蛋白，在无蛋白滤液中加入钼酸铵试剂，与无机磷结合成磷钼酸，以硫酸亚铁为还原剂还原成钼蓝。 (NH4 ) 6mo7o 243 H2 so 44 H2O7H2 moo 43 (NH4 ) 2so 412 H2 moo4H3 po 412 moo3H3 po 412 H2O 12 moo3H3 po 4还原剂钼蓝，还原剂有很多种类，1-氨基-2-萘酚氯化亚锡的灵敏度高，颜色强度随发色时间而变化，偏离了Be

10、er法则。 硫酸亚铁发色稳定。 2、孔雀绿直接显色法用浓尿素溶液稀释血清后，用孔雀绿-钼酸试剂显色，加吐温-20使标准液和血清标本显色反应速度接近。 灵敏度高，但影响因素多，再现性差，显色不稳定。 3 .酶法gn H3 po 4g n1g-1-pg-1-pg-6-pn ADP6-磷酸葡萄糖酸NADPH肌苷h3po4次黄嘌呤R-1-P次黄嘌呤H2OO2尿酸H2O2H2O2N-乙基-N-(3-甲基苯基糖原磷酸化酶、糖酸转位酶6-磷酸葡萄糖脱氢酶、嘌呤核苷氧化酶、黄嘌呤氧化酶、POD、三，镁的测定化学法钙镁试剂比色法、达旦黄比色法、甲嘧啶蓝比色法。传统方法测定方法物理法原子吸收光度法(参考方法)同位

11、素稀释中子活化法(确定方法)酶法取得了新的进展，成为新的自动方法.1.钙镁试剂(Calmagite )比色法血清镁在碱性条件下生成钙镁试剂和紫红色配合物，颜色深浅不同如果加入EGTA乙二醇双(-氨基醚)-N，n，n，N-四乙酸，钙的干扰就消失了。 吸收峰值520纳米。 发色稳定，操作简单，快速，可手动操作，也可用于自动分析。 2 .原子吸收分光光度法用酸性氯化镧溶液稀释血清50倍，直接用原子吸收分光光度计测定285.2nm的吸光度。 操作简单，准确，精度高，可同时进行钙的测定422.7nm。 3 .酶法右旋-葡萄糖MgATP右旋-葡萄糖-6-磷酸MgADP右旋-葡萄糖-6-磷酸NADP右旋-葡

12、萄糖-6-磷酸NADPH【正常基准值】0.671.23mmol/L，四，铁的测定血清铁测定血清铁和总铁的结合力的比例称为铁饱和度。 铁饱和度100%的测定方法，二茂铁比色法。 测定铁蛋白-(Fe3 )2铁蛋白2Fe3 Fe3还原剂Fe2Fe3铁蛋白Fe2 -铁蛋白(紫红色) 562nmTIBC，在血清中加入一定的铁标准液，与不含铁的铁蛋白结合，用轻质碳酸镁粉末吸附除去多馀的铁，血清总铁含量【正常参考值】1 .血清铁男11.631.3mol/L女9.030.4mol/L2.血清总铁结合力48.371.6mol/L3.铁饱和度20U%，酸性，本章总结，1 .钙、磷代谢和调节(含量，分布和生理功能，吸收和排泄，PTH 2 .微量元素和疾病(铁、锌、铜、硒)。 3 .血清钙测定离子钙的测定(离子选择电极法)、总钙测定(邻甲酚肽配合物酮法、甲基甲酚蓝法、EDTA配合物滴定法、原子吸收光度法)的原理和方法评价。 4 .