广西《芒果品种鉴定技术规程SSR分子标记法》编制说明

广西地方标准《芒果品种鉴定技术规程SSR分子标记法》编制说明（征求意见稿）一、制定意义及任务来源1目的意义目前，通过分子生物学和生物信息学相结合的方法在基因水平对种质资源生物多样性进行鉴定已经成为作物学领域研究热点。2015年4月，农业部印发《农作物品种DNA身份鉴定体系构建实施方案》中指出“现代种业是国家战略性、基础性核心产业，品种创新是现代种业发展的核心，品种保护与管理是品种创新的必要保障。目前，生物技术的快速发展，移动互联、大数据引发的产业变革，为品种管理向田间表型身份鉴定与室内基因型（DNA，即脱氧核糖核酸）身份鉴定相结合的方向发展提供了有力的技术支撑”。因此构建品种DNA身份鉴定体系是加强种子管理、保障市场公平竞争、保护农民合法权益、提升品种创新能力和推进种业信息化发展的需要。分子标记鉴定是从DNA水平直接反映品种或亲子间的差异，不受植物发育阶段、组织器官、季节、环境和表达等条件的限制，同时DNA标记数量大、多态性丰富等诸多特点，现已在品种鉴定、图谱构建、基因定位等研究中广泛应用。分子标记技术之一SSR即简单重复序列（SimpleSequenceRepeat）或微卫星DNA（MicrosatelliteDNA)。它通常是指以2~5个核甘酸为单位的多次串联重复DNA序列，长度大多在100~200bp。SSR在基因组中分布广泛，由于重复次数的不同而引起不同材料间的差异，通常表现为共显性。SSR两端有一段相对保守的序列，根据保守序列设计引物进行PCR扩增就可获得SSR片段。由于SSR分布广泛，具有多态性好、表现为共显性、对DNA质量要求低且用量少的诸多特点，已经广泛应用于植物遗传多样性分析、杂种鉴定、指纹图谱构建、基因定位等方面。可以用于植物品种权精准授权、打假与维权，为《种子法》的实施提供了可靠的技术手段。芒果（MangiferaindicaL.），漆树科，杧果属。果皮颜色有红中带黄、黄中带青、青中带黄、纯青色等。果肉为黄色，鲜美多汁，有浓郁的芳香气味。内部有一粒种子，种子为扁平形。素有“热带果王”之美誉，是世界上著名的热带水果，据世界粮农组织（FAO）统计，2016年全世界芒果实际收获面积和产量分别为9616.6万亩和5127.9万吨；芒果亦是我国重要的热带水果之一，我国主要种植地区为广东、广西、海南、云南、福建和台湾等地，5-9月为盛产期。在面积上仅次于香蕉、荔枝和龙眼，居第四位，据农业部南亚办数据显示，2019年全国芒果种植面积达484.2万亩，产量278.2万吨（台湾未计入），产值190.3亿元。2015年，广西芒果产量超过海南成为最大的芒果产地，居全国首位。2020年广西芒果果园面积153.93万亩，产量79.81万吨，产值50.7亿元。广西百色与海南、攀枝花并称我国三大芒果之乡，百色市是我国最大的芒果生产基地，近年来百色为广西芒果贡献了大部分产量，芒果产业已成为当地农业支柱产业之一，是当地农民收入的主要来源。广西芒果品种主要有台农1号芒、金煌芒、红象牙芒、桂热芒82号、桂七芒、贵妃芒、桂热芒10号、凯特芒、新世纪芒等29个品种。单从形态上鉴定存在一定困难，这就给芒果品种的选育、生产、经营和使用等方面造成不同程度的困扰，同时也给种子管理部门带来一定的挑战。我国已出台了一系列主要农作物品种的SSR分子标记鉴定行业标准和地方标准，而目前尚无利用SSR标记技术鉴定芒果品种真伪的方法标准。制定相应的广西地方标准，规范利用SSR标记技术鉴定芒果品种真实性，对品种管理、质量监控等方面具有重要意义，且对杂种优势群的划分、种质创新及新品种的选育等具有指导意义。2任务来源2018年由广西检验检疫标准化技术委员会提出的《芒果品种鉴定技术规程SSR分子标记法》的制定计划，2018年广西壮族自治区质量技术监督局在关于下达《2018年第一批广西地方标准制定项目计划的通知》附件文中批准将其列入2018年第一批广西地方标准制定项目计划(序号：2018-0114)，由广西益谱检测技术有限公司、广西出入境检验检疫局技术中心、南宁维尔凯生物科技有限公司等主要负责起草该地方标准的制定任务。二、工作概述1国内外相关研究杧果（Mango/MangiferaindicaL.)，别名芒果、檬果、望果、漭果、闷果、蜜望子、庵波罗果等，为漆树科（Anacardiaceae）杧果属（Mangifera）植物，常绿果树，有“热带果王”之美誉，世界五大名果之一。由于杧果从起源到驯化的过程复杂、不同地区之间引种、地方品种没有确切的科学名称等，近年来，我国各地科研工作者在种质资源调查和收集研究时，大多都局限于某一地区，各自从不同的角度对杧果进行了种下分类，同一个品种在不同省份的参试和审定的进程往往也不一致，同一品种在不同省份通过审定后该品种的标准样品存在差异，另外，在多个省份审定的情况下，不同单位对同一品种的不同命名，还有窃用他人品种后换名审定的，从而导致一定数量上的仿冒雷同，品种间亲缘关系不明确，而且从形态特征上很难将其准确归类，给杧果品种管理带来一定的混乱。因此，为了更好的保护现有杧果的品种权和新品种的鉴定，应坚持品种命名的唯一性原则，需要建立起一种快速、准确、可靠、高效的杧果种质资源鉴定方法，而传统鉴定评价方法，都有一定的局限性。目前世界上约有杧果品种1000多个，我国约有200个杧果品种或品系。杧果具有丰富的遗传多样性，果实的大小、形状、色泽、纤维多少、核大小等是区别杧果品种的主要依据，但杧果的品种、品系很多，过去多用实生苗繁殖，产生了许多自然杂交种，新的品种又不断地被人工培育出来，由于存在饰变和观察标准不同，依据植物学性状难以对杧果资源进行准确分类，导致同物异名、同名异物和资源重复保存等现象严重。M.T.Wahdan等利用SSR标记对42对引物进行了筛选，其中36对引物具有可重复的多态性DNA扩增模式。在这两个品种的水果中，60.7%的得分片段被认为是假定的基因型特异性标记。多态信息含量（PIC）在0.25~0.75之间，平均为0.51。Hania和Aml品种的水果的杂合度分别为0.68和0.53。通过对这36对引物的条带分析，可以区分出不同的品种的水果，说明利用SSR引物进行PCR是一种有效的基因型鉴定方法，可以利用DNA指纹图谱描述和鉴定两个埃及芒果新品系的园艺初步研究（PreliminaryHorticulturalStudiesToDescribeAndIdentifyOfTwoNewEgyptianMangoStrainsUsingDNAFingerprint.）；A.Sennhenn等用19个简单序列重复标记对38棵芒果干叶片进行分子分类，研究肯尼亚东部和中部芒果地方品种的形态和分子特征。利用Nei’s遗传距离和邻居连接方法建立了芒果样品间的遗传亲缘关系树状图。形态学鉴定得出6个不同的聚类(Identificationofmango(MangiferaindicaL.)landracesfromEasternandCentralKenyausingamorphologicalandmolecularapproach)；ManalEidt等采用-简单序列重复(SSRs)技术对25个埃及芒果品种的遗传变异程度进行了分析，并建立了指纹图谱。根据35个SSR标记的可重复性、可分离性和品种间的分离能力，选择了35个SSR标记。35个SSR位点产生219个多态性高的等位基因(约100%)。通过多态位点百分比、观察到的等位基因数、有效等位基因数、观察到的杂合度、预期杂合度、固定指数和基因流等参数，计算了栽培种质的等位基因初变异率和遗传基础（EfficiencyParametersofSSRMarkersforCharacterizationofSomeMangoCultivarsandTheirSuitabilityinMolecularBar-codingSSR）。石胜友，张燕梅，武红霞等采用SSR标记方法，对来自7个国家的36份杧果品种进行了遗传相似性分析，目的是为杧果育种亲本合理选配、现有国外种质的充分发掘利用提供科学依据；王静毅等人应用SSR技术对广西主要杧果资源遗传关系进行SSR分析，对48个杧果品种（系）的遗传关系进行了检测。广西主要杧果资源品种间的遗传相似系数在0.4559~0.9412之间，平均为0.7053，以桂热杧06-3号与桂热杧06-5号两者之间的相似系数最小，而Keitt与红凯特杧及玉文杧与蜜桃杧之间相似系数最大。UPGMA聚类分析将48个品种分为5大类群。聚类结果表明，在分子水平上，杧果品种间的亲缘关系与胚性无直接关系；且广西本地杧果品种(系)多是象牙杧、青皮杧、吕宋杧或秋杧等的杂交子代或实生后代。芒果种质资源真伪鉴定的相关文献资料有：1、王静毅等.广西主要杧果资源遗传关系的SSR分析[J].热带作物学2009,30(9):1301-1307；2、石胜友,张燕梅.武红霞,等.36个杧果引进品种的遗传相似性研究[J].果树学报2010，27（6）:914-917；3、黄丽芳,雷新涛,姚全胜,等.芒果SSR-PCR反应体系的优化[J].热带作物学2010,31(3):410-414；4、黄丽芳,闫林,范睿,等人.芒果实生资源遗传多样性的SSR分析[J].热带作物学2011,32(10):1828-1832；5、罗纯,武红霞,姚全胜,等人.芒果转录组中SSR位点信息分析与引物筛选[J].热带作物学报2015,36(7):1261-1266;6、覃昱茗,张宇,黄国弟,等.杧果SC-SSR分子标记反应体系的建立与优化[J].农业研究与应用，2021，34（3）：37-43.7、王明,应东山,王琴飞,等.我国芒果主栽品种遗传多样性分析及指纹图谱构建[J].南方农业学报JournalofSouthernAgriculture2015,46(7):1154-1159;8、闫慧清,刘泽标,吉海旺,等.芒果EST-SSR位点分析及引物开发[J].分子植物育种,2020,18(11)9、周立,罗聪,何堂熹,等.基于EST-SSR标记的芒果品种遗传多样性与亲缘关系分析[J].分子植物育种.2020,18(11)10、PreliminaryHorticulturalStudiesToDescribeAndIdentifyOfTwoNewEgyptianMangoStrainsUsingDNAFingerprint(利用DNA指纹图谱描述和鉴定两个埃及芒果新品系的园艺初步研究)[J].JournalofAmericanScience,2011,7(2):641-650;11、A.Sennhenn•K.Prinz•J.Gebauer•,A.Whitbread•R.Jamnadass•K.Kehlenbeck.Identificationofmango(MangiferaindicaL.)landracesfromEasternandCentralKenyausingamorphologicalandmolecularapproach(肯尼亚东部和中部芒果地方品种的形态学和分子鉴定)[J].GenetResourCropEvol,2014,61:7-22.12、ManalEid,M.A.Hussein.EfficiencyParametersofSSRMarkersforCharacterizationofSomeMangoCultivarsandTheirSuitabilityinMolecularBar-codingSSR(标记在芒果品种鉴定中的有效性参数及其在分子条形码中的适用性)[J].NewYorkScienceJournal2017;10(8):68-76.上述这引些研究都表明：SSR标记与毛细管凝胶电泳相结合的分子标记技术可以鉴定芒果品种，可为芒果的遗传分析、指纹图谱构建、杂交效率评定等提供可靠、快速的方法。2标准起草的主要工作过程2.1引物的来源本技术规范编制过程中使用的38对SSR引物主要来源于中国热带农业科学院南亚热带作物研究所、广西大学农学院、农业部热带果树生物学重点实验室等科研院所和高校发表的文章中所使用的，以及查阅其它文献上使用的芒果基因组序列引物。2.2芒果品种类型的收集本实验收集了20个芒果品种，分别是桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七，其主要来源于广西壮族自治区亚热带作物研究所芒果种质资源圃种植基地（南宁市邕武路）。2.3技术路线与实验选取20个广西区内种植的不同芒果品种。用筛选出的38对SSR引物进行PCR扩增，用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测，对SSR引物的扩增稳定性及多态性进行分析，并采用毛细管电泳对扩增产物进行同步分析验证。根据峰图简单易读取、多态性高、扩增稳定性高、染色体上分布均匀的原则，最终确定了38对核心引物用于芒果品种鉴定。2.4技术验证经广西益谱检测技术有限公司、广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室和南宁国拓生物科技有限公司等三家单位，对技术规程的可操作性和检测数据的可重现性进行了验证。其中广西益谱检测技术有限公司对20个广西区内种植的不同芒果品种的38对SSR引物的PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测验证；6个广西区内种植的不同芒果品种的6对SSR引物的PCR扩增产物进行毛细管电泳检测验证。广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室和南宁国拓生物科技有限公司分别对6个广西区内种植的不同芒果品种的38对SSR引物的PCR扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测验证；6个广西区内种植的不同芒果品种的6对SSR引物的PCR扩增产物进行毛细管电泳检测验证。经验证，《芒果品种鉴定技术规程SSR分子标记法》技术规程中的DNA提取、PCR扩增及产物检测方法具有可操作性，按照技术规程中的聚丙烯酰胺凝胶电泳条带明显，清晰可辩；毛细管电泳检测方法中扩增的PCR产物均能获得清晰、稳定的主峰，且易于识别。三、标准编制原则和标准的主要内容1标准编制原则规范性原则：本技术规范的制定符合法律法规，符合有关标准规范的要求，包括GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》、NY/T2594《植物品种鉴定DNA分子标记法总则》、NY/T2440-2013《植物新品种特异性、一致性和稳定性测试指南芒果》、GB/T6682《分析实验室用水规格和试验方法》。适用性原则：本规程的全部内容具有可操作性。统一性原则：本规程与现行相关标准协调统一，不发生冲突。先进性原则：本规程采用目前国际国内外品种鉴定领域均认可的、成熟的SSR标记技术，以非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳平台为主，兼顾毛细管电泳检测平台的芒果品种鉴定技术，与田间小区鉴定方法对比，该方法的先进性在于不受环境影响和季节约束，检验周期短。2标准主要内容标准编写主要内容包括样品处理、聚合酶链式反应法（PCR）、聚丙烯酰胺凝胶电泳、毛细管电泳操作过程以及结果判定，适用于芒果种质资源真伪的检测。标准规程编制的过程主要进行了以下试验和工作：2.1原理不同品种芒果的遗传组成不同，其基因组（DNA）中SSR的重复次数存在差异，根据SSR的差异，通过PCR扩增及电泳技术可以鉴定芒果品种。2.2样品来源样品采自广西壮族自治区亚热带作物研究所芒果种质资源圃种植基地（南宁市邕武路）的芒果叶片。2.3仪器电子天平、高速冷冻离心机、水浴锅、PCR扩增仪、垂直板电泳系统、毛细管电泳仪、凝胶成像系统、胶片观察灯等。2.4试剂液氮、无水乙醇、三氯甲烷、甲醛、三羟甲基氨基甲烷、DNA分子量标准、2×TaqPlusPCR预混试剂、40%丙烯酰胺/甲叉双丙烯酰胺溶液、氯化钠、氢氧化钠、硝酸银、硼酸、过硫酸铵、十六烷基三甲基溴化铵、乙二胺四乙酸二钠、四甲基乙二胺、琼脂糖、去离子甲酰胺、DNA分析仪用丙烯酰胺胶液、DNA分析仪用LIZ500分子量内标、DNA分析仪用电泳缓冲液、DNA分析仪用光谱校准基质。2.5SSR引物引物序列见表1表1引物编号及引物扩增信息序号引物名称条带大小（bp）引物退火温度（℃）引物序列（5’-3’）1mangoES11148-24855正向：CTTCCTTTCTCTCATCACTTCCA反向：CTTCAATAGTAGCCCCATCACTG2mangoES24157-27055正向：CAGTAACTACTACCACCGCAACC反向：ATATTCTCGCTCTCGTTGTTTTG3mangoES35156-24655正向：TCCATTTTTGACAAATCTCCACT反向：TAGCCTTGAATTCCTCAAACAAA4mangoES39143-16355正向：GGTTGTTATCGTCGTTATTGTGG反向：CGGAAAATGTTCGACTTGTAACT5mangoES40144-24455正向：GGGACATTGACTTAACAGCTTTC反向：CTTCTGCCTGAATGTACTGGACT6mangoES69150-21055正向：CCTGTGCTTACCACCCATATTAG反向：AAAGATTGCAAGTCTGAGCAAAA7mangoES71125-18055正向：TGATGAGAATGAACAAGCAGCTA反向：TATCTGCAGTAACAGCACTCAGC8mangoES126143-20055正向：CGGGTAAACCCACTATGTATTCC反向：TGGTGGTGGTAAAAAGAAGAAAA9mangoES170150-15855正向：TCGAGAGCTACTCTTTATCGGAA反向：AATTAAGCGTGCAAACCTGTAGA10mangoES172146-19655正向：TATCATCAGAACTACCGCCATTT反向：CTCTTTTCTTCGCTGTGTTTTGT11EST14175-29050正向：ATTATCCCTATAATGCCCTAT反向：CTCGGTTAACCTTTGACTAC12MCR55170-22058正向：AGGACATCTGTGACCAAGAGC反向：TTCCCACCCACAACTCCAAC13MCR130250-26058正向：TGTCTTTCAGCTTCACCGCT反向：CGCAGTGGAGAGTTGTTGTG14MCR220250-51058正向：CGGGACCATGTCACCAGAAA反向：GGCGAATGCGTAGTCAGAGA15Lmma1205-25550正向：ATGGAGACTAGAATGTACAGAG反向：ATTAAATCTCGTCCACAAGT16Lmma4240-38047正向：AGATTTAAAGCTCAAGAAAAA反向：AAAGACTAATGTGTTTCCTTC表1引物编号及引物扩增信息（续）序号引物名称条带大小（bp）引物退火温度（℃）引物序列（5’-3’）17Lmma5280-39047正向：AGAATAAGCTGATACTCACAC反向：TAACAAATATCTAATTGACAGG18Lmma6105-20550正向：ATATCTCAGGCTTCGAATGA反向：TATTAATTTTCACAGACTATGTTCA19Lmma7210-25050正向：ATTTAACTCTTCAACTTTCAAC反向：AGATTTAGTTTTGATTATGGAG20Lmma8260-36050正向：CATGGAGTTGTGATACCTAC反向：CAGAGTTAGCCATATAGAGTG21Lmma9205-23047正向：TTGCAACTGATAACAAATATAG反向：TTCACATGACAGATATACACTT22Lmma10155-21050正向：TTCTTTAGACTAAGAGCACATT反向：AGTTACAGATCTTCTCCAATT23Lmma11240-41049正向：ATTATTTACCCTACAGAGTGC反向：GTATTATCGGTAATGTCTTCAT24Lmma12210-25047正向：AAAGAATAGCATTTAATTAAGGA反向：GTAAGTATCGCTGTTTGTTATT25Lmma13180-23047正向：CACAGCTCAATAAACTCTATG反向：CATTATCCCTAATCTAATCATC26Lmma15220-27050正向：AACTACTGTGGCTGACATAT反向：CTGATTAACATAATGACCATCT27Lmma16220-25050正向：ATAGATTCATATCTTCTTGCAT反向：TATAAATTATCATCTTCACTGC28AY942818125-15055正向：CCACGAATATCAACTGCTGCC反向：TCTGACACTGCTCTTCCACC29AY94281990-14053正向：AAACGAGGAAACAGAGCAC反向：CAAGTACCTGCTGCAACTAG30AY942820170-23053正向：AGGTCTTTTATCTTCGGCCC反向：AAACGAAAAAGCAGCCCA31AY942821280-41049正向：TGTAGTCTCTGTTTGCTTC反向：TTCTGTGTCGTCAAACTC32AY94282323055正向：AGAATAAAGGGGACACCAGAC反向：CCATCATCGCCCACTCAG33AY942824220-32050正向：TTGATGCAACTTTCTGCC反向：ATGTGATTGTTAGAATGAACTT34AY942825240-39053正向：CGAGGAAGAGGAAGATTATGAC反向：CGAATACCATCCAGCAAAATAC35AY94282624050正向：TGTGAAATGGAAGGTTGAG反向：ACAGCAATCGTTGCATTC36AY942827180-24049正向：GTTTTCATTCTCAAAATGTGTG反向：CTTTCATGTTCATAGATGCAA37AY942828130-29053正向：CTCGCATTTCTCGCAGTC反向：TCCCTCCATTTAACCCTCC38AY942829370-50050正向：GAACGAGAAATCGGGAAC反向：GCAGCCATTGAATACAGAG广西益谱检测技术有限公司表2聚丙烯酰胺凝胶电泳所用的6个品种芒果与19对引物序号芒果品种名称引物名称序号引物名称1桂热芒07-3号AY94281811AY9428282桂热芒290号AY94282312Lmma13金煌芒AY94281913Lmma154圣心AY94282014Lmma135台农AY94282115Lmma96桂七AY94282716Lmma117AY94282917Lmma128AY94282418Lmma49AY94282519Lmma510AY942826表3聚丙烯酰胺凝胶电泳所用的20个品种与19对引物序号芒果品种名称引物名称1桂热芒07-2号mangoES392桂热芒07-3号mangoES403桂热芒08-10号mangoES1264桂热芒10-1号mangoES1705桂热芒16-1号mangoES696桂热芒285号Lmma77桂热芒290号Lmma108三年芒MCR559PULMERmangoES2410安宁红芒mangoES3511金煌芒mangoES7112桂热芒10号mangoES17213圣心MCR13014桂热芒82号Lmma615桂热芒60号Lmma816桂热芒4号EST1417泰国芒14号MCR22018桂热芒08-6号Lmma1619台农mangoES1120桂七广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室和南宁国拓生物科技有限公司表4聚丙烯酰胺凝胶电泳所用的6个品种与38对引物序号芒果品种名称引物名称序号引物名称1桂热芒07-3号AY94281820mangoES112桂热芒290号AY94282321mangoES243金煌芒AY94281922mangoES354圣心AY94282023mangoES395台农AY94282124mangoES406桂七AY94282725mangoES697AY94282926mangoES718AY94282427mangoES1269AY94282528mangoES17010AY94282629mangoES17211AY94282830EST1412Lmma131MCR22013Lmma1532MCR5514Lmma1333MCR13015Lmma934Lmma616Lmma1135Lmma717Lmma1236Lmma818Lmma437Lmma1019Lmma538Lmma16毛细管电泳广西益谱检测技术有限公司、广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室、南宁国拓生物科技有限公司均选择6个芒果品种，6对引物，每个品种分别做6对引物的毛细管电泳，品种名称及引物名称如下表6：表5毛细管电泳验证所用的6个芒果品种与6对引物序号芒果品种名称引物名称1桂热芒07-3号mangoES392桂热芒290号mangoES1263金煌芒mangoES1724圣心Lmma165台农AY9428196桂七AY9428202.6操作步骤2.6.1样品采集用不锈钢剪刀采集种植的已知品种的芒果嫩叶放入塑料样品袋中，做好标识，放入0-8℃保温箱中，带回实验室，于-18℃冰箱中保存备用。2.6.2DNA的提取取2.6.1中适量芒果叶片用自来水冲洗干净，再用去离子水冲洗两遍，自然晾干后用不锈钢剪刀剪碎放入研钵中，加入液氮研磨成粉末状，分取100mg放入1.5mL离心管中，加入750µLCTAB提取溶液，涡旋振荡混匀后于65℃水浴45min~60min，期间每隔15min颠倒离心管混匀；加入500µL的三氯甲烷，颠倒混匀，12000rpm离心3min，转移上清液约0.5mL至新离心管中，加入等体积即0.5mL预冷至约4℃的无水乙醇，颠倒混匀，-18℃冰箱下静置1h，12000rpm离心3min，去上清，室温下干燥沉淀。加入50µL无菌纯水于-18℃中保存备用。注：以上为推荐的DNA提取方法。其他能够达到PCR扩增质量要求的DNA提取方法也适用于本规程。2.6.3PCR扩增PCR反应体系PCR反应体系见表7。表6PCR反应体系试剂终浓度体积灭菌纯水-8.5µL2×TaqTaqPlusPCR预混试剂1×12.5µL10µmol/L正向引物0.4µmol/L1.0µL10µmol/L反向引物0.4µmol/L1.0µL25ng/µLDNA模板2.0ng/µL2.0µL总体积25.0µLPCR反应程序94℃预变性5min；94℃变性30s，退火30s（退火温度见表1推荐引物表），72℃延伸30s，35个循环；最后72℃下延伸7min。2.6.4PCR产物检测非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测.1聚丙烯酰胺凝胶制备在一对玻璃板间插入1.0mm宽的间隔片，在封口处注入1%琼脂糖溶液，让其凝固密封。在50mL量杯中依次加入7.5mL5×TBE缓冲液，7.5mL40%Acryl/BisSolution(29:1)，搅拌并用纯净水定容至30mL；加入200µL10%过硫酸铵和12µL四甲基乙二胺溶液，混匀后倒入凝胶板之间，随即插好样品梳，使其在50min~60min内聚合凝固，凝胶高度应不小于10cm。.2电泳将玻璃板固定于垂直电泳槽上，在电泳槽中加入电泳缓冲液，小心拔下样品梳。用加样器吸取1µL不同引物（表1）PCR产物，加入样品孔中，同时在同一块胶中加入1µLDNAmarker。电泳选用的电压梯度为1~5V/cm，2×TaqPlus预混试剂的蓝色指示带从上到下分别到达胶板1/2、2/3处（大约1h）后结束电泳。.3银染显色将附着凝胶的玻璃板用去离子水冲洗30s~60s后，将凝胶放入方形不锈钢盘中，加入染色液覆盖凝胶，轻摇5min~10min进行染色；倒掉染色液，用去离子水快速漂洗，放入显色液中，轻摇至显色出清晰带纹；取出凝胶用去离子水冲洗两遍，沥干后进行拍照。毛细管电泳检测.1PCR产物样品准备分别取等体积的稀释后不同引物（表5）PCR扩增产物溶液混合，从混合液中吸取1µL按序号加入到DNA分析仪专用96孔板孔中，板中各孔分别再加入0.1µLDNALIZ500分子量内标和8.9µL去离子甲酰胺。将样品在PCR仪上95℃变性5min，取出，迅速置于碎冰块上，冷却10-15min。将整个96孔板置于离心机中，离心10s后放置到DNA分析仪上待检。.2电泳检测按照仪器操作规程，编辑样品表及运行程序，执行运行程序，仪器自动给出检测结果，保存并记录数据。2.7数据记录与统计样品每个SSR位点的等位变异采用扩增片段长度的形式表示。对于毛细管电泳检测方法，通过使用对照品种，消除同型号不同批次间或不同型号DNA分析仪间可能存在的系统误差，使用片段分析软件读取待检样品在该位点的等位变异。对于非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测方法，将每个扩增位点的等位变异与相应的对照品种的等位变异片段大小进行比较，确定待检样品在该位点的等位变异。纯点结合的等位变异大小数据记为X/X，其中X为该位点等位变异的大小；杂合位点的等位变异大小数据记录为X/Y，其中X、Y分别为该位点上的2个等位变异的大小，小片段数据在前、大片段数据在后。缺失位点在等位变异大小数据记录为0/0。示例1：样品在某个位点上仅出现1个等位变异，大小为160bp，则该位点的等位变异数据记录为160/160。示例2：样品在某个位点上仅出现2个等位变异，大小为160bp、165bp，则该位点的等位变异数据记录为160/165。2.8判定方法当待检样品和对照品种间差异位点数≥2，则判定为“不同品种”；当待检样品和对照品种间差异位点数=1，判定为“近似品种”；当样品间差异位点数=0，判定为“极近似品种或相同品种”。2.9结果与记录2.9.1用琼脂糖凝胶检测毛细管电泳和非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，结果见附件原始记录图谱。广西益谱检测技术有限公司结果原始记录图谱（见附件1）广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室结果原始记录图谱（见附件2）南宁国拓生物科技有限公司结果原始记录图谱（见附件3）四、制定标准的原则和依据，与现行法律、法规的关系，与有关国家标准、行业标准的协调情况。本标准的编制依据现行的法律、法规和国家强制性标准，与这些文件中的规定不存在矛盾，协调一致。五、重大意见分歧的处理结果和依据无六、提出标准强制实施或推荐实施的建议和理由本项标准的制订，已经实验室的验证，可作为推荐性地方标准，用于芒果种质资源真伪的检测。广西地方标准《芒果品种鉴定技术规程SSR分子标记法》编写组2022.4.18附件1：广西益谱检测技术有限公司结果原始记录及图谱1非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536373839404142M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536373839404142M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536373839404142M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536373839404142图1.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种顺序依次为：桂热芒07-3号、桂热芒290号、金煌芒、圣心、台农、桂七引物名称：1-6:AY942818，7-12:AY942823，13-18:AY942819，19-24:AY942820，25-30：AY942821，31-36:AY942827，37-42:AY942829。M123456789101112131415161718M192021222324252627282930313233343536373839404142M123456789101112131415161718M192021222324252627282930313233343536373839404142图2.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种顺序依次为：桂热芒07-3号、桂热芒290号、金煌芒、圣心、台农、桂七引物名称：1-6:AY942824，7-12:AY942826，13-18:AY942825，19-24：AY942828，25-30：Lmma1，31-36：Lmma15，37-42：Lmma13。M123456789101112131415161718192021222324252627282930M123456789101112131415161718192021222324252627282930图3.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种顺序依次为：桂热芒07-3号、桂热芒290号、金煌芒、圣心、台农、桂七引物名称：1-6:Lmma9，7-12：Lmma12，13-18：Lmma11，19-24：Lmma4，25-30：Lmma5。MM1234567891011121314151617181920图4.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：mangoES39MM1234567891011121314151617181920图5.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：mangoES40MM1234567891011121314151617181920图6.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：mangoES126MM1234567891011121314151617181920图7.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：mangoES170MM1234567891011121314151617181920图8.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：mangoES69MM1234567891011121314151617181920图9.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：Lmma7MM1234567891011121314151617181920图10.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：Lmma1MM1234567891011121314151617181920图11.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：MCR55MM1234567891011121314151617181920图12.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：mangoES24MM1234567891011121314151617181920图13.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：mangoES35MM1234567891011121314151617181920图14.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：mangoES71MM1234567891011121314151617181920图15.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：mangoES172MM1234567891011121314151617181920图16.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：MCR130MM1234567891011121314151617181920图17.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：Lmma6MM1234567891011121314151617181920图18.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：Lmma8MM1234567891011121314151617181920图19.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：EST14MM1234567891011121314151617181920图20.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：MCR220M1234567891011121314151617181920M1234567891011121314151617181920图21.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：Lmma16MM1234567891011121314151617181920图22.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种编号1-20顺序依次为：桂热芒07-2号、桂热芒07-3号、桂热芒08-10号、桂热芒10-1号、桂热芒16-1号、桂热芒285号、桂热芒290号、三年芒、PULMER、安宁红芒、金煌芒、桂热芒10号、圣心、桂热芒82号、桂热芒60号、桂热芒4号、泰国芒14号、桂热芒08-6号、台农、桂七引物名称：mangoES112.毛细管电泳图谱图1桂热芒07-3号基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图2桂热芒290号基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图3金煌芒基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图4圣心基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图5台农基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图6桂七基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图7桂热芒07-3号基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图8桂热芒290号基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图9金煌芒基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图10圣心基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图11台农基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图12桂七基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图13桂热芒07-3号基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图14桂热芒290号基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图15金煌芒基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图16圣心基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图17台农基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图18桂七基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图19桂热芒07-3号基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图20桂热芒290号基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图21金煌芒基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图22圣心基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图23台农基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图24桂七基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图25桂热芒07-3号基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图26桂热芒290号基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图27金煌芒基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图28圣心基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图29台农基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图30桂七基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图31桂热芒07-3号基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱图32桂热芒290号基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱图33金煌芒基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱图34圣心基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱图35台农基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱图36桂七基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱附件2：广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室结果原始记录及图谱1非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳M123456789101112131415161718M192021222324252627282930313233343536373839404142M123456789101112131415161718M192021222324252627282930313233343536373839404142图1.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种顺序依次为：桂热芒07-3号、桂热芒290号、金煌芒、圣心、台农、桂七引物名称：1-6:AY942818，7-12:AY942823，13-18:AY942819，19-24:AY942820，25-30：AY942821，31-36:AY942827，37-42:AY942829。M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536373839404142M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536373839404142图2.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种顺序依次为：桂热芒07-3号、桂热芒290号、金煌芒、圣心、台农、桂七引物名称：1-6:AY942824，7-12:AY942826，13-18:AY942825，19-24：AY942828，25-30：Lmma1，31-36：Lmma15，37-42：Lmma13123456M789101112131415161718192021222324252627282930123456M789101112131415161718192021222324252627282930图3.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种顺序依次为：桂热芒07-3号、桂热芒290号、金煌芒、圣心、台农、桂七引物名称：1-6:Lmma9，7-12：Lmma12，13-18：Lmma11，19-24：Lmma4，25-30：Lmma5。M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536373839404142M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536373839404142图4.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种顺序依次为：桂热芒07-3号、桂热芒290号、金煌芒、圣心、台农、桂七引物名称：1-6:mangoES11,7-12:mangoES24,13-18:mangoES35,19-24:mangoES39,25-30:mangoES40,31-36:mangoES69,37-42:mangoES71。M123456789101112131415161718M192021222324252627282930313233343536373839404142M123456789101112131415161718M192021222324252627282930313233343536373839404142图5.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种顺序依次为：桂热芒07-3号、桂热芒290号、金煌芒、圣心、台农、桂七引物名称：1-6:mangoES126,7-12:mangoES170,13-18:mangoES172,19-24:EST14,25-30:MCR220,31-36：MCR55,37-42：MCR130。123456M789101112131415161718192021222324252627282930123456M789101112131415161718192021222324252627282930图6.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种顺序依次为：桂热芒07-3号、桂热芒290号、金煌芒、圣心、台农、桂七引物名称：1-6:Lmma6,7-12:Lmma7,13-18:Lmma8,19-24:Lmma10,25-30:Lmma16。2.毛细管电泳图谱PAGEPAGE92图1桂热芒07-3号基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图2桂热芒290号基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图3金煌芒基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图4圣心基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图5台农基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图6桂七基于引物mangoES39的扩增产物毛细管电泳检测图谱图7桂热芒07-3号基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图8桂热芒290号基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图9金煌芒基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图10圣心基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图11台农基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图12桂七基于引物mangoES126的扩增产物毛细管电泳检测图谱图13桂热芒07-3号基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图14桂热芒290号基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图15金煌芒基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图16圣心基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图17台农基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图18桂七基于引物mangoES172的扩增产物毛细管电泳检测图谱图19桂热芒07-3号基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图20桂热芒290号基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图21金煌芒基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图22圣心基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图23台农基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图24桂七基于引物Lmma16的扩增产物毛细管电泳检测图谱图25桂热芒07-3号基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图26桂热芒290号基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图27金煌芒基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图28圣心基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图29台农基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图30桂七基于引物AY942819的扩增产物毛细管电泳检测图谱图31桂热芒07-3号基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱图32桂热芒290号基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱图33金煌芒基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱图34圣心基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱图35台农基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱图36桂七基于引物AY942820的扩增产物毛细管电泳检测图谱附件3：南宁国拓生物科技有限公司结果原始记录及图谱1.非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536373839404142M123456789101112131415161718192021222324M252627282930313233343536373839404142图1.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种顺序依次为：桂热芒07-3号、桂热芒290号、金煌芒、圣心、台农、桂七引物名称：1-6:AY942818，7-12:AY942823，13-18:AY942819，19-24:AY942820，25-30：AY942821，31-36:AY942827，37-42:AY942829。M123456789101112131415161718M192021222324252627282930313233343536373839404142M123456789101112131415161718M192021222324252627282930313233343536373839404142图2.不同芒果品种SSR扩增产物电泳结果备注：芒果品种顺序依次为：桂热芒07-3号、桂热芒290号、金煌芒、圣心、台农、桂七引物名称：1-6:AY942824，7-12:AY942826，13-18:AY942