食品卫生微生物学检验 沙门氏菌检验

GB/T4789.4

食品卫生微生物学检验

沙门自首整脍

主要内衮

修订背景

国内外方法

修订内容

-前增菌

-选择性增菌

-分离平板

-生化鉴定

-血清学鉴定

-报告

修订背最

必要性

由于食品生产及流通的全球化、新的食品加工技

术的应用、东西方饮食习惯的交融、自然环境的改

变等因素的影响，目前沙门氏菌污染的食物种类、

季节及场所发生了重大变化。同时，随着检测技术

的发展，对于沙门菌的快速检测方法层出不穷，有

些方法已通过国际权威机构认证（如AOAC）成为

了国际标准方法。

任务来源

1.修订任务由卫生部全国食品卫生标准委员会

下达，由微生物标准协作组具体实施。

2.兄弟单位、企业、公司为参与单位。

共采集到数据800多个，专家反馈意见50余

条（采纳90%以上）条，形成标准的草案

稿、送审稿。

4.时间跨度2004年—2006年

修定朦则

结合目前的国际标准和原标准的实际使用情况,

针对原标准的修订，我们遵循以下的修订原则：

1.以原国标为基础，保持与原标准的连续性；

2.参照国际分析协会(AOAC)、国际标准组织

(ISO)及美国食品药品管理局(FDA)的有关标

准；

3.结合标准的比对实验和验证实验，积极吸取新方

修定依据

1.GB/T4789.4

2.AOACOfficialMethod：967.26,

967.27,967.28

3.ISO：6579

4.USFDA：BacteriologicalAnalytical

Manual,Chapter5:Salmonellao

修改内衮

1前增菌；

2选择性增菌;

3分离；

4生化鉴定；

5.血清学鉴定;

6.报,告。

内外方法比较

国内外沙门处,检测方法f传统方法）

国家标准

USFDA

FSIS

AOAC

ISO

中华人民共和国国家标准GB/T4789.4-2003

微生物学检验沙门天菌检验

AC'CfWTW*细菌学分析手册（FDA/BAM）

第五章沙门菌属

USDA/FSISMLG4.02

内、禽和蛋品中沙门菌的分肉和鉴定

AOAC沙门菌检测方法

AOACOfficialMethod967.25

SalmonellainFoods

PreparationofCultureMediaand

Reagents

AOACOfficialMethod967.26

SalmonellainProcessedFoods

Detection

AOACOfficialMethod967.27

SalmonellainFoods

Identification

AOACOfficialMethod967.28

SalmonellainFoods

SerologicalTests

AOAC967.25-967.28

今曲中的沙门前检测方法

处理样品

24+2h

ImL+lOmLS||ImL+lOmLTT

r135C24±2h

XLD&HE&BS

35℃24±2h(BS24h&48h)

TSI&LIA

35r24+2h

纯培养物不纯培养物

MAC"XLDorHE非

尿素酶十尿素酶一纯培养物沙

门

H抗原，LIA,酚红卫矛醇肉汤，色氨酸肉汤菌

非沙门菌

（KCN,丙二酸盐，口引珠），O抗原非

补充生化试验沙

门

沙门菌

菌

ISO6579:1993(E)

微生物一沙门菌检测的通用方法

修订内春

沙门处前检除

1前增菌

2选择性增菌

3分离

4鉴定

5报告

沙门氏菌检验程序

检样

25g（mL）样品+225mLBPW

36t±1G8h〜18h___________

1mL+TTB10mL1mL+SC10mL

42匕±lt,18h〜24h961c±1G18h-~24h

BSXLD（或HE、科玛嘉显色培养基）

36lC±ir,40h~48h36七±1灯，18h〜24h

挑取可疑菌落

TSI,赖氨酸，NA,靛基质，尿素（pH7.2）,KCN

商品化生化H,S+靛基质-尿素-&S+靛基质+尿H3酸基质-尿素反应结果与左

鉴定系统KCN-赖氨酸+素-KCN-赖氨酸+-KCN-赖氨酸+/-侧描述不符

甘露醇卜、山梨醇+ONPG-

沙门氏菌,血清学试验非沙门氏菌

报告

前增菌

1取消样品分类，前增菌液统一为“缓冲蛋白陈

水”

原国标：BPW

FDA、AOAC：多种前增菌液

ISO：BPW

前增苗（康）

2对所有样品均进行848h前增菌

原国标只对冻肉、乳品、蛋品等加工食品进

行前增菌，FDA、AOAC、ISO、Canada

MFHPB、CCFRA等组织或国家对所有样品都

进行前增菌。

ProceduresofIsolationSamonellafromfoods

分离食物中沙门菌的过程

Weight25goffoodputitinto225mlofpre

enrichmentmedium(BPW)

称取25g食品样品于225ml前增菌培养基中(BPW)

ProceduresofIsolationSalmonellafromfood

食物中沙门菌分离过程

VortexinStomacherIncubatedin37℃

at250RPM

放入均质器

250RPM混匀

前增黄(^)

3修改了样品处理方式

增加拍击式均质器，均质袋可直接培养。

4增加调整pH值

选择性增首

1使用“TTB、SC55,取消“MM”

原国标："MM或TTB、SC

AOAC：TT、SC

FDA：RV、TT

ISO：RV、SC

少门母前，,

•一种ZE1

隔牌姬I生也概犍般门氏样辘

分富矮恭基

使用BS、XLD、HE、科玛嘉显色培养基

原国标：BS、DHL（或HE、WS、SS）

FDA：BS、XLD、HE

AOAC：BS、XLD、HE

ISO：phenolredbrilliantgreen琼脂、BS或HE

为了最大可能的检出沙门氏菌，原则上必

须使用两种以上选择性分离培养基。

分毒培养基回收率测定(%)

IBS106.6

Shigellaf/exner/Salmonellatyphlmurlum

ATCC™12022ATCC-14028

■

典型菌落一BS

C-BSl-BS

典型菌落一HE

典型菌落一XLD

l-XLDOXLD（变形菌落-错误）

典型,落一XLD

典型菌落一CHRO

Salmonellatyphimurfum

ATCC™14028

样品+BPW+SC+BS

样品+BPW+TTB+BS

S9+WW+Md9+^^

样品+BPW+SC+HE

C-HE

I-HE

样品+BPW+TTB+HE

样品+BPW+SC+XLD

梓晶

+BPW

+MM

+XLD

样品+BPW+SC+CHRO

+BPW

+TTB

+CHRO

+BPW

+MM

+CHRO

生化餐定

1)采纳A7720ET或VitekGNIT为传统

生化鉴定方法的选择性替代方法”。

生化案定（统）

2）生化鉴定项目进行调整

原国标中生化鉴定是将可疑菌落同时接种于

三糖铁（TSI）琼脂、蛋白陈水（供做靛基质试验）、尿素琼

脂（pH7.2）、氧化钾（KCN）培养基和赖氨酸脱竣酶试验培

养基；

现修改为：在接种TSI琼脂和赖氨酸脱竣酶试验培养

基的同时增加一项营养琼脂（NA）,经TSI琼脂和赖氨酸

脱竣酶试验培养基的选择后，可筛掉大部分非沙门氏菌

株，大大减少了工作量，同时也满足了AP/20E7或V"或

GN/7鉴定的需要。

生化餐定（俵）

2）生化鉴定项目进行调整（续）

为保持与原标准的一致性，本标准也保

留了可以同时直接接种蛋白月东水（供做靛基

质试验）、尿素琼脂（pH7.2）、KCN培养基

的内容。本部分还增加了对疑似菌落进行

留样确认的部分，以备必要时复查，这对

生化鉴定不确定的菌落进行进一步验证是

非常必要的。

在TSI,LIA,SIM培养基上的初步生化实验

Pickthreeormorecolonies

fromeachagarplatedepending

onyourexperienceintoTSI,LIA,SIM

从培养基平板上分别挑取三个或

三个以上菌落至TSI,LIA,SIM

LIASIMIncubateat37℃r

18-24hr.

37℃,18-24hr培养

BiochemicalreactionofSalmonellasp.

沙门菌属生化反应

.沙门菌在TSI,LIM上的生化实验结果

Salmonellaspp.沙门菌

沙门菌在TSILIA,SIM上的特征

API20E

结

第位数第2位数第3位数第4位数第5位数第6位数第7位数

1果

判

、

0AL0OFIUTIVGGMIiRSMAA0定

NDDDI2RDNPELAN0GAEMRX

PHCCTSI二ADLUN0RACLYA

124124124124124124124

沙

反应-+++++-----4-++++-+-+-

结果门

菌

应得024124000004124104020

树枝

组合6704752

编码

API20E

沙门氏菌20E鉴定结果

API20E

布氏柠檬酸杆菌20E鉴定结果

API20E

河生肠杆菌20E鉴定结果

VITEKGEN+

应用一系列小的多孔的聚苯乙烯卡片进行测试，

卡片含有干燥的抗菌药物和生化基质。先制备一定

浓度的欲鉴定菌株的菌悬液，然后将菌悬液接种到

各种细菌的小卡上，将其放入具有读数功能的孵箱

内，每隔一定时间，仪器会自动检测培养基的发酵

情况，并换算成能被计算机所接受的生物编码。最

后由计算机判定，打印出鉴定结果。

VITEK

血清学鉴定

1血清学鉴定中的菌体分群为选择性试验

项目

原国标进行0抗原、H抗原鉴定及菌体分群；

FDA、AOAC进行O抗原、H抗原鉴定，菌体分

群为选择性；

ISO进行0抗原、H抗原鉴定。

0:140:150:190:200:220:230:270:340:46

0:10:40:50电O:620:70:80:90:100:12

Vi

OGr.A0Gr.B0Gr.COGr.DOGr.EOGr.FOGr.GOGr.HOGr.l

。群AO群Bo群c。群Do群E0群F0群Go群H。跑

OMAOMBOMCOMDOMEOMFOMG

Seroiest

SalmonellaHAntisera^7/1^Box.\

|沙门菌属H抗血清■1

第2盒

zZZ

H：z6H:ioH:ZisH:23H:24H:z28

H:n,xH:pH:qH:rH:sH:tH:vH:wH:xH:y

H:aH:bH:cH:dH:fH:gH:hH:iH:kH:m

H：LH：EH：GH：Z4H：1

complexcomplexcomplexcomplexcomplexH:2H:5H:6H:7

海合因子混合因子混合因子很合因子混合因子

H

Poly

valentHMAHMBHMCHMDHMF

多价

沙门菌属H抗血清

用于相位逆转(SvenGard)

H:kH:rH:y

H:zH；z6H:Z]10

用r相位逆用于用于用于用于用尸

转相位逆转相位逆转档位逆转相位逆转相位逆转

H:aH;1)H:<H:(1H:eJiH:I

用于用于用于用于用于用于

相应逆传相卜上山

相位逆转相位逆转

H:H：H・H'H:

混合质于混个鬲f

1程合因子EJB畲因子GLZ,混介闪十

用于用于用于用于用于

相位逆礼相位逆转相位逆转相位逆转相位逆转

Day#4血清学实验：

用沙门菌抗血清做初步的玻片凝集试验

伤寒沙门菌非伤寒沙门菌

沙门菌抗血清;

沙门菌多价A』

沙门菌多价

沙门菌多价。MA,ViAI,OMA,OMB,OMC,

沙门菌群A,B,D,E,LOMD,OME,OMF,OMG

沙门菌群A,B,C,D,E,F,G,..............

Salmonellaantigens沙门菌抗原

H-antigensontheflagella

H-抗原位于鞭毛上

Vian显ensonthecapsuleof星

TyphJS.Paratyphi,(£Dublin)

Vi武原位于饬寒、副伤寒

，(都柏林)沙门菌的荚膜

ompC，F

parinO-antigensonthesurfaceaspoly-

ompA尸

Osidechains.

Poiy-

ide。就原形成聚合的支链位于表面.

Lip!d

merrcrane

P'hosproi।plaLPS=lipid+core+poly-Oside

Ddripiasmic|Lipvpvtcin

sgcechain

Deplido-jPerlpJasmlc

glycanIpfoteinLPS=脂质♦核心+。聚合支链

Salmonellaspp.

OantigenorSomaticantigenistheone

ofcellwallconiponeiit.

-antigensThereactionofO-antigenwithantisera

抗原willbethegranularform.

0抗原或菌体抗原是细胞壁的一种成分，0抗原

与相应抗血清反应会出现凝集颗粒.

Vi-antigeiiisaspecialsomaticantigenand

VI-antigens

belongstothegroupofKantigens.

VI抗原

SuchasSalmonellaTyphi,ParatyphiCandDublin.

Vi抗原是一种特殊的朗体抗原，其属于K抗原组.如伤寒沙

门菌，丙型副伤寒沙门菌和都柏林沙门菌有Vi抗原.

J

H-antigenof

FlagellaantigenH抗原（鞭毛抗原）

The।eactionofH-antigenwithantiserawillbethefloccularfotm.

AlmostSa