《医学微生物学》课件-消毒与灭菌VIP

消毒与灭菌复习引入1.细菌群体生长曲线是怎样的？3.与细菌致病性有关的细菌代谢产物有哪些？2.细菌在培养基中的生长现象？4.灭菌的指标是什么？细菌数目的对数培养时间（小时）510152025306.06.57.07.58.08.59.0活菌数总菌数教学内容和目标3.说出影响化学消毒剂作用的因素。2.阐述主要的热力灭菌法、日光与紫外线灭菌法。

1.说出消毒、灭菌、防腐、无菌、无菌操作的概念。4.知道常用消毒剂的种类、使用浓度和用途。消毒(disinfection)：杀死物体上病原微生物的方法,并不一定能杀死细菌的芽孢，用以消毒的化学药品称为消毒剂。消毒剂对芽孢起作用则需要提高消毒剂的作用浓度和延长作用时间。基本概念灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方法，包括杀灭细菌芽胞、霉菌孢子在内的全部病原微生物和非病原微生物。经过灭菌的物品称“无菌物品”。凡需要进人人体内部包括进入血液、组织、体腔的医用器材,如手术器械、注射用具、一切置入体腔的引流管等,都要求绝对无菌。在实验室,培养基和相关的试剂、器材也需要灭菌。防腐(antisepsis)：防止或抑制体外微生物生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。无菌(asepsis)：不存在活的微生物，多是灭菌的结果。基本概念无菌操作：防止微生物进入机体或局部环境的操作技术。大家能举例说出你们知道的消毒与灭菌的操作吗？？？外科无菌手术消毒灭菌法化学消毒灭菌法物理消毒灭菌法(一)热力灭菌法(二)辐射杀菌法(三)滤过杀菌法(四)干燥与低温灭菌法高效消毒剂中效消毒剂低效消毒剂一、物理消毒灭菌法(一)热力灭菌法•热力灭菌法主要是利用高温使菌体蛋白质变性或凝固，酶失去活性，而使细菌死亡。

•热力灭菌是最可靠且普遍应用的灭菌法。

•在同样温度下，湿热灭菌的效果比干热好。

1.干热灭菌法

焚烧：直接点燃或焚烧炉内焚烧烧灼：直接火焰灭菌干烤：利用干烤箱灭菌171℃1h或160℃2h/121℃16h可灭菌，用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品，如玻璃器皿、瓷器、玻璃注射器等。

干烤箱焚烧炉接种环酒精灯操作2.湿热灭菌法煮沸消毒法•100℃、5min----杀死细菌的繁殖体100℃、1~2h----杀死细菌的芽孢•用途：饮水、食具和一般器械（刀、剪、注射器）等的消毒，水中加入2%碳酸钠或2~5%石炭酸增强灭菌效果。流通蒸汽消毒法•又称常压蒸汽灭菌法，利用1个大气压下100℃的水蒸气进行消毒细菌繁殖体15~30分钟可被杀灭,常不能杀灭全部细菌芽胞。2.湿热灭菌法间歇灭菌法•利用反复多次的流动蒸汽间歇加热以达到灭菌的目的。将需要灭菌的物品置于流通蒸汽灭菌器内,100℃加热15~30分钟,杀死其中的繁殖体取出后放37℃孵箱过夜,使残存的芽胞发育成繁殖体,次日再蒸一次。如此连续三次以上,可达到灭菌的效果。•此法适用于一些不耐高热的含糖,牛奶等培养基。巴氏消毒法：

用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物、以保持物品中所需的不耐热成分不被破坏的消毒方法。用于消毒牛乳酒类61.1～62.8℃30min；71.7℃15～30s。2.湿热灭菌法高压蒸汽灭菌法•最普遍、最有效的灭菌方法•压力蒸汽灭菌器(autoclave)是一个密闭、耐高压蒸锅。灭菌的温度取决于蒸汽的压力,在1个标准大气压下,蒸汽的温度是100℃。如果蒸汽被限制在密闭的容器中,随着压力升高,蒸汽的温度也相应升高。在超过标准大气压103.4kPa(1.05kg/cm”)蒸汽压下,温度达到121.3℃，维持15-20分钟,可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。高压灭菌锅•常用于一般培养基、生理盐水、手术敷料等耐高温、高压、耐湿物品的灭菌。一、物理消毒灭菌法(一)辐射灭菌法红外线•是一种0.77~1000μm波长的电磁波,尤以1~10um波长的热效应最强。有较好的热效应，但只能在照射到的表面产生。•杀菌作用与干热相似，多用于医疗器械和食具的灭菌。•操作时应戴防护镜。日光与紫外线(二)辐射灭菌法紫外线波长240~300nm的紫外线具有杀菌作用(包括日光中的紫外线),其中以265-266nm最强,这与DNA的吸收光谱范围一致。紫外线主要作用于DNA,使一条DNA链上两个相邻的胸腺嘧啶以共价键结合,形成二聚体,干扰DNA的复制与转录,导致细菌的变异或死亡。紫外线穿透力较弱,可被普通玻璃、纸张、尘埃、水蒸气等阻挡,故一般用于手术室、传染病房、无菌实验室的空气消毒,或用于不耐热物品的表面消毒。杀菌波长的紫外线对人体皮肤、眼睛有损伤作用,使用时应注意防护。(二)辐射灭菌法微波微波是波长为1~1000mm的电磁波,可穿透玻璃、陶瓷和薄塑料等物。主要用于食品、非金属器械、检验室用品、食品用具、药杯等消毒。微波主要靠热效应发挥作用,微波通过介质时,使极性分子快速运动,摩擦生热,里外温度同时上升。但微波的热效应必须在有一定含水量的条件下才能显示出来,在干燥条件下,即使再延长消毒时间也不能达到有效灭菌。金属具有导电性，会导致微波辐射在金属表面产生电流，从而产生火花，引起火灾！！！！！！NONONO!!!电离辐射(二)辐射灭菌法•主要包括β射线、γ射线，产生游离基破坏DNA，破坏细胞膜。•电离辐射常用于大量的一次性医用塑料制品的消毒;亦可用于食品、药品和生物制品的消毒灭菌,而不破坏其营养成分•具有较高的能量与穿透力，对各种细菌均有致死作用。(三)滤过除菌法

滤过除菌法是用物理阻留的方法除去液体或空气中的细菌、真菌,以达到无菌目的,但不能除去病毒和支原体。液体除菌所用的器具是滤菌器(flter),滤菌器含有微细小孔,只允许液体通过,而大于孔径的细菌、真菌等颗粒不能通过。滤过法主要用于一些不耐高温的血清、毒素、抗生素的除菌。滤菌器的种类很多,目前常用的有薄膜滤菌器,由硝基纤维素膜制成,依孔径大小分为多种规格用于除菌的滤膜孔径在0.45μm以下,最小为0.1μm。此外还有玻璃滤菌器、石棉滤菌器、素陶瓷滤菌器等。(三)干燥和低温抑菌法•有些细菌的繁殖体在空气中于燥时会很快死亡,例如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、霍乱弧菌、苍白密螺旋体等。但有些细菌的抗干燥力较强,如溶血性链球菌在尘埃中可存活25天,结核分枝杆菌在干痰中数月不死。细菌芽胞的抵抗力更强,如炭疽芽胞杆菌的芽胞耐干燥20余年，干燥法常用于保存食物,浓盐或糖渍食品可使细菌体内水分逸出,造成生理性干燥,使细菌的生命活动停止,从而防止食物变质。干燥法常用于保存食物。•多数细菌耐低温，低温常用作保存菌种，当温度回升至适宜范围时，细菌又能生长繁殖。为避免解冻时对细菌的损伤,可在低温状态下真空抽去水分,此方法称为冷冻真空干燥法。该法是目前保存菌种的最好方法,一般可保存微生物数年至数十年。超低温冰箱冷冻真空干燥器二、化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法是使用化学消毒剂,其原理是:①促进菌体蛋白质变性或凝固;②干扰细菌的酶系统和代谢;③损伤细菌的细胞膜而影响细菌的化学组成、物理结构和生理活动,从而发挥防腐、消毒甚至灭菌的作用。化学消毒剂一般都对人体组织有害,只能外用或用于环境的消毒。需要强调的是,化学消毒剂的应用要适度、适量和消毒时间不能过长。要注意消毒剂对人类的毒副作用、对环境的污染作用和对物体的腐蚀作用。使之既达到消毒目的,又不造成对环境污染和对人类健康的损害。（一）高效消毒剂（high-leveldisinfectants）杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物，适用于不耐热力灭菌，但要进入人体内部的物品，如内镜，塑料外科器材消毒等的消毒。二、化学消毒灭菌法1.含氯消毒剂：次氯酸钠、漂白粉等可用于物品表面、饮用水、皮肤、地面、排泄物、污水的消毒。但对金属制品有腐蚀作用。2.过氧化物消毒剂：二氧化氯3.醛类消毒剂：戊二醛和甲醛，其杀菌机制是对细菌蛋白质和核酸的烷化作用，2%戊二醛适用于精密仪器/内镜的消毒。4.环氧乙烷：气体消毒剂/易燃/对人体有害。（二）中效消毒剂(intermediate-leveldisinfectants)不能杀灭细菌芽胞,但能杀灭细菌繁殖体(包括结核分枝杆菌)、真菌和大多数病毒。适用于纤维内镜、喉镜、阴道窥器、麻醉器材等。二、化学消毒灭菌法1.含碘消毒剂:常用为碘酊和碘伏。杀菌作用主要依靠其沉淀蛋白和强大的氧化能力。碘酊为碘的乙醇溶液;碘伏为碘与载体的结合物(常为聚维酮碘)。多用于皮肤黏膜、体温计以及其他物品表面的消毒。碘酊对皮肤有刺激性,消毒后需以75%乙醇将其擦净;碘伏着色易洗脱,刺激性较轻微。2.醇类消毒剂:醇类的杀菌活性随碳链的长度增加而增加(最高活性见于5~8个碳原子)。乙醇(alcohols)或异丙醇最为常用,可迅速杀死细菌繁殖体、结核分枝杆菌、某些真菌和有包膜病毒。

杀菌机制在于去除细菌胞膜中的脂类,并使菌体蛋白质变性。乙醇浓度为70%~75%时杀菌力最强。异丙醇的杀菌作用比乙醇强,且挥发性低,但毒性较高。一般多用于医疗护理器材、皮肤的消毒和浸泡体温计，二、化学消毒灭菌法（三）低效消毒剂(Low-leveldisinfectants)可杀灭多数细菌繁殖体,但不能杀灭细菌芽胞、结核分枝杆菌及某些抵抗力较强的真菌和病毒。季铵盐类消毒剂：苯扎溴铵/新洁尔灭，可用于皮肤、黏膜、物品表面、地面消毒。氯已定/洗必泰可用于皮肤、黏膜、物品表面、地面消毒。高锰酸钾：多用于皮肤、黏膜冲洗、浸泡消毒以及食(饮)具、蔬菜水果的消毒。1.高危器械物品

进入无菌组织的物品，所有这些物品都应该灭菌。最好用高压蒸汽灭菌。

2.中危器械物品

接触黏膜的器械。采用消毒即可。3.低危器械物品

只接触未损伤皮肤一般用后清洗、消毒即可。4.快速周转的医疗器械三、化学消毒灭菌法四、影响消毒灭菌效果的因素（一）微生物的种类（二）微生物的物理状态（三）微生物的数量（四）消毒剂性质、浓度与作用时间（五）温度（六）酸碱度（七）有机物（一）微生物的种类微生物对消毒灭菌的敏感性高低排序大致如下:真菌、细菌繁殖体、有包膜病毒、无包膜病毒、分枝杆菌、细菌芽胞。然而,不同种或同种不同株间微生物内在的抗性相差也很大。（二）微生物的物理状态消毒灭菌前微生物的生长情况显著影响它们的抵抗力。在营养缺陷下生长的微生物比在营养丰富的情况下生长的微生物具有更强的抵抗力。细菌繁殖体的抵抗力从开始直到对数期的后期通常较强,自稳定期才开始不规则地下降，（三）微生物的数量微生物最初的数量越大,所需消毒的时间就越长。消毒灭菌前严格的洗涤和清洁是保证消毒灭菌成功的基本步骤。如果这点不可能做到,如实验室的培养物,就必须延长消毒灭菌时间。四、影响消毒灭菌效果的因素（四）消毒剂性质、浓度与作用时间（五）温度（六）酸碱度（七）有机物氧化剂中的过氧乙酸和含氯化合物对环境和空气中的病毒作用效果好。绝大多数消毒剂在高浓度时杀菌作用大,当降低至一定浓度时只有抑菌作用,如含氯消毒剂浓度增加一倍,杀菌时间减少30%。但醇类例外,70%乙醇或50%~80%异丙醇的消毒效果最好,因过高浓度的醇类使菌体蛋白质迅速脱水凝固,影响了醇类继续向内部渗入,降低了杀菌效果。消毒剂在一定浓度下,对细菌的作用时间愈长,消毒效果也愈好。消毒剂杀菌的实质是化学反应，温度升高能提高消毒效果。消毒剂杀菌的作用受酸碱度的影响。环境中有机物的存在,能够显著影响消毒剂的效果。病原菌常随同排泄物、分泌物一起存在,这些物质如脓、痰、血液和尿可阻碍消毒剂与病原菌的接触,并消