《医学微生物学》课件-寄生虫实验

人体寄生虫学实验显微镜使用了解显微镜的基本构造；掌握正确使用显微镜的方法；掌握油镜的原理和使用方法。显微镜的基本构造

显微镜的构造机械装置光学系统镜座载物台镜臂标本夹和标本移动尺粗调螺旋和细调螺旋聚光镜升降螺旋接目镜接物镜及镜头转换器聚光镜虹彩光圈电光源操作步骤放置好显微镜调节光源低倍镜观察高倍镜观察油镜观察清洁和还原显微镜1.放置好显微镜

显微镜置于平稳的实验台上，镜座距实验台边沿约为3~4cm。镜检者姿势要端正。取、放显微镜时应一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳。切忌用单手拎提；且不论使用单筒显微镜或双筒显微镜均应双眼同时睁开观察。2.调节好光源接通电源，打开光源。-弱光：无色标本或未染色标本；低倍镜；

强光：染色标本；高倍镜光线调节：

拨动反光镜：调节至视野最亮无暗影；

光源较强时用平面，较弱时用凹面；

需要强光：将聚光器提高，光圈放大；

需要弱光：将聚光器降低，光圈缩小。3.低倍镜观察将标本玻片放在载物台上，用标本夹夹住，调节标本推进器，使观察对象处于物镜正下方。调节粗调螺旋，使物镜（10×）与标本靠近，眼睛在测向注视物镜，防止物镜和载玻片相碰。张开双眼向目镜里观察，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细准焦螺旋调节，至目的物清晰为止。通过标本推进器慢慢移动玻片，认真观察标本各部分，找到合适的目的物，仔细观察并记录所观察到的结果。4.高倍镜的观察使用高倍镜前，必须先用低倍镜观察，发现目的物后将它移至视野正中处。旋动转换器换高倍镜。如果高倍镜触及载玻片立即停止旋动，这说明原来低倍镜并没有调准，目的物并没有真正找到，必须用低倍镜重新调节。如果高倍镜下观察目的物有点模糊，调节细准焦螺旋，直到视野清晰。调节细准焦螺旋时要注意旋转方向与载物台上升或下降的关系，防止镜头与载玻片强力接触，损坏镜头或载玻片。5.油镜的观察如果用高倍镜目的物未能看清，可用油镜。先用低倍镜和高倍镜检查标本片，将目的物移到视野正中。下降载物台，在载玻片上滴一滴香柏油，将油镜移至正中，缓慢调节粗调螺旋使油镜头浸没在油中，刚好贴近载玻片。然后再用细准焦螺旋微微向上调（切忌用粗准焦螺旋）即可。（应特别注意不要在升降载物台时用力过猛，或者调焦时误将粗调节螺旋向反方向转动而损坏镜头及载玻片）6.清洁显微镜和还原显微镜观察结束后，调节光源到最小再关掉电源开关。调节粗调螺旋，使载物台下降到最低，取下玻片。把油镜转离光轴，擦镜纸擦1～2次，去油，用二甲苯滴湿的擦镜纸擦2次，再用擦镜纸擦1～2次，顺镜头直径方向擦，不要圆周擦和来回擦。擦干净镜体，罩上防尘罩，然后放回原处。用擦油镜头的方法擦玻片。显微结构图的绘制

严格按光学显微镜的操作方法，依低倍、高倍及油镜的次序观察常见虫卵或寄生虫示教片，并绘出其形态图。生物绘图中绘出的图要清楚，并正确的表示出形态构造的特点，绘图注意事项如下：(1)绘图要用黑色硬铅笔，不要用软铅笔，一般用2H铅笔为宜。(2)图的大小及在纸上分布的位置要适当。一般画在靠近中央稍偏左方，并向右方引出注明各部名称的线条。各引出线条要整齐平列，各部名称写在线条右边。(3)画图时先用轻淡小点或轻线条画出轮廓，再依照轮廓一笔画出与物象相符的线条。线条要清晰，比例要准确。较长的线条要向顺手的方向运笔，或把纸转动再画。同一线条粗细相同，中间不要有断线或开叉痕迹，线条也不要涂抹。(4)绘出的图要正确，观察时要把混杂物、破损、重叠等现象区别清楚，不要把这些现象绘上。(5)图的明暗及浓淡，应用细点表示，不要采用涂抹方法。点细点时，要点成圆点，不要点成小撇。(6)整个图要美观、整洁，还要特别注意准确性。病原学检查B选择适宜的采血时间恶性疟在发作前半小时至发作时间日疟在发作后数小时至10余小时A血膜染色镜检：取外周血制作厚、薄血膜姬氏或瑞氏染剂染色

镜检

疟原虫疟原虫：

环状体、滋养体、裂殖体、配子体1）疟原虫的基本构造为核、胞质、胞膜和疟色素2）用瑞氏或姬氏染液染色后

核呈紫红色胞质为天蓝至深蓝色疟色素呈棕黄色、棕褐色或黑褐色胞核1个，较小，位于虫体一侧；胞质少、中间有空泡、虫体多呈环状，1/31、环状体（早期滋养体）细胞核细胞质红内期间日疟原虫Plamodiumvivax(Pv)红细胞：体积胀大、颜色变浅、出现薛氏小点2、大滋养体（晚期滋养体）胞核增大、胞质增多、有时伸出伪足、开始出现疟色素薛氏点疟色素细胞核细胞质3、裂殖体（成熟）核反复分裂（12-24个）、胞质随之分裂、核被胞质包裹成为裂殖子细胞核细胞质薛氏点疟色素4、配子体经过数次裂体增殖后，部分裂殖子进入红细胞后、核增大而不再分裂，胞质增多而无伪足、发育为圆形、卵圆形（或新月形）的个体。雄配子体（小配子体）圆形或椭圆形；虫体较小；胞质稀薄；核质疏松，较大，位于虫体中央；疟色素少而细小。雌配子体（大配子体）圆形或椭圆形；虫体较大；胞质致密；核质致密，较小，偏于虫体一侧或居中；疟色素多而粗大。溶组织阿米巴1.滋养体(trophozoite)直径12～60µμm；内外质：外质透明（凝胶），内质颗粒状（溶胶），可见吞噬的红细胞（组织内）；泡状核：核仁小，居中；核膜内缘有染色质粒；核仁与核膜间有时可见网状核纤丝；运动器官为叶状伪足；滋养体（铁苏木素染色）2.包囊(cyst)未成熟成熟未成熟：近似圆形、1~2个核、拟染色体、糖原泡；成熟：圆形、4个泡状核，与滋养体相似但稍小。单核包囊二核包囊四核包囊二分裂增殖阴道毛滴虫活体无色透明，有折光性，体态多变，固定染色后呈梨形；体长7~23μm；有4根前鞭毛和1根后鞭毛。波动膜位于虫体前1/2处，为虫体作旋转式运动器官；椭圆形泡状核1个；轴柱纤细透明，纵贯虫体，向后伸出。成虫寄生于人或哺乳动物的静脉内；口腹吸盘位于虫体前端；雌雄异体；雄虫雌虫血吸虫毛蚴卵壳小棘/侧刺分泌物日本血吸虫虫卵椭圆形，淡黄色；卵壳厚薄均匀，无小盖；卵壳一侧有逗点状小棘；表面常有宿主组织残留物；薄层胚膜内含成熟毛蚴，

毛蚴前端有锥形顶突；中间宿主——湖北钉螺猪带绦虫牛带绦虫长度2-4m4-8m节片700-1000节，较薄1000-2000节，较厚头节球形，有顶突及小钩略呈方形,无顶突及小钩成节卵巢分三叶卵巢分二叶孕节子宫每侧7-13支子宫每侧15-30支囊尾蚴可寄生人体不寄生人体虫卵在形态上难以区别猪带绦虫牛带绦虫成虫猪带绦虫牛带绦虫

猪带绦虫牛带绦虫成节：卵巢分三叶卵巢分二叶猪带绦虫牛带绦虫

猪带绦虫

牛带绦虫

孕节：子宫每侧7-13支

子宫每侧15-30支球形，直径(31～43)μm。卵壳薄而透明，内为胚膜。胚膜较厚，棕黄色，由许多棱柱体组成，在光镜下呈放射状的条纹。胚膜内含球形的六钩蚴，具3对小钩。完整虫卵不完整虫卵虫卵卵壳六钩蚴胚膜六钩蚴胚膜完整带绦虫卵不完整带绦虫卵碱性消化液囊尾蚴囊尾蚴头节翻出即猪囊尾蚴(cysticercuscellulosae),俗称囊虫(bladderworm),为白色半透明、卵圆形的囊状体,约黄豆大小(8~10)mmx5mm,囊内充满透明的囊液。囊壁分两层,外为皮层,内为间质层,间质层有一处向囊内增厚形成米粒大小的白点,是向内翻卷收缩的头节,其形态结构和成虫头节相同。幼虫标本观察1.蛔虫成虫大体标本（示教）

Female:20-35cmMale:15-31cm形似蚯蚓，雌虫长20~40cm,乳白色，两端略尖，表面光滑，尾部挺直而钝圆。雄虫较小，长15~30cm，尾端向腹侧弯曲，可见一交合刺。蛔虫2.蛔虫成虫解剖标本（示教）3.蛔虫性肠梗阻大体标本（示教）实验方法直接涂片法在洁净的载玻片上滴一滴生理盐水，用竹签挑取米粒大小的粪便，在生理盐水中涂抹均匀，涂片的厚度以透过涂片隐约看到书上的字迹为宜。然后在显微镜下观察，观察时采用阅读式顺序检查以防漏检。4.受精蛔虫卵（实验）蛋白质膜卵壳卵细胞新月形空隙受精蛔虫卵的发育5.未受精蛔虫卵（实验）蛋白质膜卵壳折光颗粒1.成虫

（示教）

外形似马鞭，前端细长，约占虫体的3／5，后端明显粗大。雌虫长3～5cm，尾端钝圆。雄虫长3～4cm，尾端向腹面弯曲呈螺旋形。鞭虫透明栓（盖塞)卵壳卵细胞1)腰鼓形2)棕黄色3)中等偏小4)中等厚度5)卵细胞2.鞭虫卵（实验）1.钩虫成虫大体标本十二指肠钩虫美洲钩虫钩虫2.钩虫成虫解剖标本十二指肠钩虫口囊十二指肠钩虫交合伞美洲钩虫口囊美洲钩虫交合伞卵壳卵细胞空隙钩虫钩虫卵钩虫诊断1直接涂片法用竹签挑取米粒大小的粪便，在生理盐水中涂抹均匀，在洁净的载玻片上滴一滴虫卵悬液。然后在显微镜下观察，观察时采用阅读式顺序检查以防漏检。钩虫诊断2饱和盐水浮聚法先在漂浮管中加入1／4量的饱和盐水，用竹签挑取蚕豆大小的粪便放入管中调匀，然后慢慢地加人饱和盐水至管口，再用吸管加饱和盐水至液面略高于管口而不外溢为止。静置15分钟，取一洁净玻片轻轻扣压液面，垂直提起，并迅速翻转玻片，使液面朝上，置显微镜下检查。钩虫诊断3钩蚴培养法将滤纸剪成与试管等宽但较试管稍长的T字型纸条，用竹签挑取约黄豆大小的粪便，均匀地涂抹在纸条上段2／3处，将纸条插入试管中，用滴管将清水从没有纸条的一边沿管壁加入底部,使水浸泡滤纸条的下段，以粪便不接触水面为准。放入30℃温箱中孵育，3～5天后观察试管下段的清水中有无钩蚴活动。可寄生人体丝虫共有八种，中国只有两种：班氏吴策线虫Wuchereriabancrofti

(班氏丝虫）马来布鲁线虫Brugiamalayi(马来丝虫）均寄生于人淋巴系统，引起淋巴丝虫病。临床表现有淋巴管炎、乳糜尿、象皮肿等丝虫是由节肢动物传播的一类寄生性线虫。丝虫引起丝虫病，是我国五大寄生虫病之一；世界十大热带病之一。简介形态♀♂1.成虫1)乳白色，细丝线状，体表光滑，长50~100mm2）雌虫大于雄虫，雄虫尾部卷曲成圈。形态2.幼虫头间隙体核鞘膜1微丝蚴（microfilaria)班氏微丝蚴班氏微丝蚴头间隙马来微丝蚴马来微丝蚴头间隙尾核班氏微丝蚴马来微丝蚴2.幼虫2感染期幼虫（丝状蚴）成熟的丝状蚴从蚊子的喙中逸出。形态成虫微丝蚴腊肠期蚴腊肠期蚴丝状蚴成虫(淋巴系统)蚊吸血班氏:2周马来:1周（夜晚）（蚊胸肌内）（蚊喙）蚊吸血2-3月成虫寿命：4-10年蚊刺吸人血时，微丝蚴——胃(1-7h)——脱去鞘膜(穿过胃壁)——胸肌——腊肠期幼虫（蜕皮2次）——感染期幼虫（离开胸肌）——蚊体各部——口器蚊当蚊刺吸人血时，感染期幼虫经吸血的皮肤伤口（侵入）——淋巴系统——成虫（交配）——微丝蚴，随淋巴液经胸导管至血循环。人中华按蚊淡色库蚊VectorofB.malayiVectorofW.bancrofti微丝蚴→丝状蚴：26-32℃

班氏丝虫：10-14d，马来丝虫：6-6.5d只发育，不增殖⒈终宿主：人⒉保虫宿主：

班氏丝虫：无，人是唯一的终宿主 马来丝虫：多种脊椎动物⒊中间宿主：蚊⒋感染阶段：丝状蚴(感染期蚴)⒌感染方式：经蚊叮咬接种感染⒍致病阶段：成虫、微丝蚴⒎诊断阶段：微丝蚴、成虫生活史生活史要点：夜现周期性：微丝蚴白天滞留在肺毛细血管中，夜晚则出现在外周血液。这种微丝蚴在人体外周血液内昼少夜多的现象称为夜现周期性。班氏微丝蚴：晚上10时~次晨2时马来微丝蚴：晚上8时~次晨4时生活史高峰时间致病•病程主要是成虫引起潜隐期+微丝蚴血症期

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