2025年高考生物三轮复习之发酵工程

第46页（共46页）2025年高考生物三轮复习之发酵工程一．选择题（共15小题）1．（2025•盐城二模）下列有关发酵技术的叙述，正确的是（）A．制作泡菜过程中，泡菜盐水浓度过高可能会导致泡菜咸而不酸 B．传统制作果酒时，葡萄要尽量清洗干净，以免杂菌污染使果酒变质 C．以大豆为主要原料制作酱油，应选择分泌脂肪酶能力强的黑曲霉 D．果酒和果醋发酵过程中均有pH值先升高后明显下降的现象2．（2025•长沙校级一模）某研究小组通过基因工程技术对传统酵母中与乙醇合成相关的基因进行了优化，从而了提高酵母菌的代谢效率和乙醇生产能力。并比较了传统酵母菌（野生型）和经过基因改造后的酵母菌（改造型）在不同的发酵条件下的表现，实验结果如下。酵母菌类型乙醇产量（g/L）乙醇产率（g乙醇/g葡萄糖）发酵时间（h）初始葡萄糖浓度（g/L）野生型250.504850改造型400.603650下列说法正确的是（）A．实验室分离酵母菌常用牛肉膏蛋白胨培养基 B．通过基因工程改造酵母菌的核心步骤是将重组载体转入酵母菌中 C．与野生型酵母菌相比，改造型酵母菌虽提高了乙醇的产量但没能提高乙醇的生成速率 D．乙醇是酵母菌发酵的主要产物，然而在发酵过程中乙醇的积累会抑制酵母菌的生长和发酵效率3．（2025•长沙校级一模）泡菜和酸奶是常见的发酵食品。下列关于家庭中发酵制作酸奶或泡菜的叙述，错误的是（）A．用酒精擦拭容器能使微生物蛋白变性失活 B．发酵装置要封装以抑制乳酸菌的有氧呼吸 C．可将菜料完全淹没在煮沸后冷却的盐水中 D．原料中的营养物质为发酵菌提供了碳源和氮源4．（2025•辽阳模拟）传统发酵技术与传统文化紧密相连，是中华饮食文化的重要组成部分。果酒、果醋、泡菜、腐乳、馒头、酸奶的制作等离不开传统发酵技术。下列相关叙述错误的是（）A．果酒、馒头的制作离不开酵母菌 B．果醋、酸奶、泡菜的酸味都来自醋酸 C．参与腐乳制作的酵母、毛霉、曲霉都是真核生物 D．酒精发酵以及泡菜的制作都需要无氧条件5．（2025•广州一模）陈醋中的川芎嗪是治疗血栓等疾病的新型药物，能活血化瘀并对已聚集的血小板有解离作用。研究人员为提高陈醋药用价值，分别探究了传统、机械生产工艺对川芎嗪含量的影响，结果如下。下列叙述错误的是（）生产工艺川芎嗪含量/（mg•L﹣1）发酵后熏醅前发酵后进行传统熏醅（80﹣90℃4﹣5d）发酵后进行机械熏醅（110﹣120℃12﹣24h）传统醋酸发酵0.383.1511.18机械醋酸发酵1.334.7317.63A．陈醋发酵过程中需要提供碳源、氮源并通入空气 B．传统熏醅时提高熏醅的温度可以提高川芎嗪的产量 C．受皮外伤的患者在伤口愈合期间建议减少对陈醋的食用 D．选用机械醋酸发酵和机械熏醅方式酿造的食醋药用价值更高6．（2025•抚顺模拟）传统固态发酵食醋过程包括酒曲和麦曲的糖化，然后通过酵母菌、醋酸菌等多菌种的发酵，最终陈酿而成。现代工业化生产食醋是基于传统发酵方法，将菌种接种到大型发酵罐中，并在计算机系统的监测和控制下完成。下列有关食醋发酵的叙述正确的是（）A．醋酸菌在无氧条件下发酵，能将酒精转化为乙醛，再转化为醋酸 B．与传统发酵方式相比，食醋的工业化生产需要接种单一菌种进行发酵 C．醋酸菌可利用充足的糖源和氧气，在其细胞质基质和线粒体中进行发酵 D．在工业化生产中，发酵罐需要严格消毒，可避免杂菌污染影响食醋品质和风味7．（2025•承德一模）甜酒酿（醪糟）是江南地区的传统小吃，是用蒸熟的糯米拌上酿酒酵母发酵而成的一种甜米酒，其制作流程为：浸米→蒸米→凉饭→拌酿酒酵母→发酵→检查→甜酒酿。下列有关叙述正确的是（）A．“蒸米”的主要目的是通过杀灭杂菌，延长甜酒酿的保质期 B．“凉饭”后再拌入酿酒酵母，可避免高温杀死发酵所需菌种 C．“发酵”时应将拌有酿酒酵母的凉饭装满密闭的容器 D．在发酵过程中酒精的浓度会持续增加，pH值会持续降低8．（2025•阿拉善盟一模）MRS肉汤培养基是青贮微生物常用培养基，但成本较高，难以作为青贮添加剂的主要成分开发利用。为筛选廉价培养基，研究人员分离纯化青贮微生物，并分别接种到不同培养基中培养48h，得到如图结果。下列叙述错误的是（）A．应将接种青贮微生物的培养基置于适宜温度下厌氧培养 B．本实验还可用血细胞计数板对青贮微生物的活菌数进行统计 C．培养初期，青贮微生物OD值较低可能与缺乏代谢所需酶有关 D．初步判断乳清粉培养基较适合作为青贮微生物的廉价培养基9．（2025•定州市校级一模）科研人员发现某个敞口被真菌M污染的培养皿中出现了大部分细菌能正常生长，唯独真菌M附近没有细菌生长的现象。科研人员认为这可能是真菌M产生了抑制细菌生长的物质。为验证该猜想，科研人员做了如图所示的实验。下列有关分析正确的是（）A．过程①使用了平板划线法接种真菌M，该过程中接种环至少要灼烧4次 B．若甲、乙和丙组的滤纸片周围都出现了抑菌圈，则说明上述猜想正确 C．过程②应取平板a中的单菌落置于培养基b中，其主要目的是选择培养 D．真菌M在培养基b中培养时，培养基中应加入琼脂10．（2025•抚顺模拟）某兴趣小组欲对牛奶制品中乳酸菌的多样性进行研究，他们采集菌种并做了相关实验。下列叙述正确的是（）A．将分离后的乳酸菌接种到含有抗生素的培养基中培养 B．筛选菌种时，可选用牛肉膏蛋白胨液体培养基观察菌落特征 C．在稀释涂布平板法操作中，需用已灭菌冷却的涂布器蘸取少量菌液进行接种 D．鉴定细菌种类时，除观察菌落特征外，还可借助PCR等方法11．（2025•项城市模拟）从传统发酵技术到发酵工程，经历了漫长的历史过程。下列叙述错误的是（）A．自制泡菜时泡菜坛装八成满可防止发酵液溢出 B．发酵工程需要严格控制温度、pH和罐压等条件 C．发酵获得的单细胞蛋白可用于生产微生物饲料 D．啤酒生产过程中，加入啤酒花可提供发酵菌种12．（2025•湖北模拟）大豆发酵食品豆瓣酱是我国传统发酵美食，它能让麻婆豆腐热辣鲜香，也能让回锅肉滋味醇厚，好似舌尖上的时光胶囊，封存着先辈们代代相传的生活智慧。豆瓣酱的制作流程如图所示，下列叙述错误的是（）A．保温发酵过程中，酱豆中有机物的种类增加，有机物含量减少 B．米曲霉发酵过程中，添加面粉主要是为米曲霉的生长提供氮源 C．米曲霉发酵时需不断翻酱，由此推测米曲霉属于需氧型微生物 D．后期发酵中乳酸菌产生乳酸，能抑制杂菌生长并赋予豆瓣酱独特酸味13．（2025•石家庄模拟）蛭弧菌能使污水中的嗜水气单胞菌（异养型）裂解，将其接种在长满嗜水气单胞菌的平板上会出现噬菌斑。某兴趣小组将嗜水气单胞菌接种到固体培养基上，培养形成薄层，再接种采集的污水用以分离蛭弧菌。下列叙述错误的是（）A．可用干热灭菌法对平板进行灭菌 B．可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌 C．出现噬菌斑一定是蛭弧菌作用的结果 D．污水可为自然环境中的嗜水气单胞菌提供碳源14．（2025•漳州模拟）研究人员拟筛选出优良的酵母菌菌株用于发酵，其部分实验流程如图所示。下列叙述错误的是（）A．图中涂布、划线过程需在酒精灯火焰附近进行 B．培养基A上的菌落可先通过菌落特征进行筛选 C．进行平板划线时，后一次划线应从前一次的末端开始 D．涂布时用灭菌后的接种环将菌液均匀涂布于培养基A表面15．（2025•长沙校级一模）野生型大肠杆菌能够在基本培养基上生长，经诱变获得了两种营养缺陷型的突变体M、N，且单独培养时均不能在基本培养基上生长。若将两种突变体在完全培养基（液体）中混合培养一段时间后，再采用稀释涂布平板法接种在基本培养基平板上，培养后长出了大肠杆菌菌落。下列有关叙述正确的是（）A．野生型大肠杆菌诱变时发生了基因突变或染色体变异 B．突变体M和N能相互为对方提供所缺营养物质 C．在混合培养期间突变体M和N发生了遗传物质的交流 D．混合培养获得的大肠杆菌都能在基本培养基中生长二．解答题（共5小题）16．（2025•山东模拟）金黄色葡萄球菌（简称Sa）可引起皮肤伤口感染、败血症、细菌性肺炎等疾病。不规范使用抗生素易出现多重抗药性Sa。（1）A、B、C、D四种抗生素均可治疗由Sa引起的肺炎，为选出最佳疗效的抗生素，研究者分别将含等剂量抗生素A、B、C、D的四张大小相同的滤纸片a、b、c、d置于均匀分布Sa的平板培养基上，在适宜条件下培养48h，结果如图1。配制培养基时，需要加入的营养成分除了水和无机盐外，还应包括；A、B、C、D四种抗生素中，抑菌效果最佳的是。（2）Sa产生抗药性可遗传变异的来源有基因突变、（答出2点）。（3）推测Sa产生头孢霉素抗性与其R基因有关。为验证该推测，以图2中R基因的上、下游片段和质粒1构建质粒2，然后通过同源重组（质粒2中的上、下游片段分别与Sa基因组中R基因上、下游片段配对，并发生交换）敲除Sa的R基因。注1：1kb＝1000碱基对2：Y是可被脱水四环素（不作为抗生素起作用）诱导表达的Sa致死基因①根据图2信息，质粒2的构建过程中需选择限制酶对PCR产物进行酶切，然后回收上、下游片段，再与SacⅡ酶切质粒1所得大片段连接，获得质粒2。②用质粒2转化临床分离的具有头孢霉素抗性、对氯霉素敏感的Sa，然后涂布在含氯霉素的平板上，经培养获得含质粒2的Sa单菌落。③将②获得的单菌落多次传代以增加同源重组敲除R基因的概率，随后稀释涂布在含的平板上，筛选并获得不再含有质粒2的菌落。从这些菌落中分别挑取少许菌体，依次接种到含的平板上，若无法增殖，则对应菌落中细菌的R基因可能被敲除。④以③获得的菌株基因组为模板，采用不同引物组合进行PCR扩增，电泳检测结果如图3，表明R基因已被敲除的是。17．（2025•长沙校级一模）白色污染问题已引起全社会广泛关注，降解塑料的研究和开发是解决白色污染的理想途径之一。地膜的主要成分是聚乙烯[化学式为（C2H4）n]。残留在土壤中的地膜难以被降解，为筛选出高效降解地膜的细菌，研究人员进行了如图所示的操作。X培养基是选择培养基，聚乙烯分解菌在该培养基上会形成抑菌圈。回答下列问题：（1）在筛选聚乙烯分解菌过程中，应选择的土壤，制作培养基时，应将作为X培养基中的唯一碳源，并使用灭菌法对培养基进行灭菌。（2）为了证明所配制X培养基具有选择作用，在恒温培养前，需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养，待两种培养基平板上的菌落生长稳定时，比较两种平板培养基上的菌落数。若结果为，则可证明上述观点。（3）可挑选X培养基中的（填序号）中的单菌落接种到Y培养基上进行培养。配制Y培养基时，其pH一般调至。（4）用稀释涂布平板法对细菌进行计数时，所统计的菌落数往往会比活菌的实际数目偏小，原因是。在5个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为28、50、52、54、313，则每升原菌液样品中细菌数为个。18．（2025•长沙校级一模）活性黑5是一种低毒性、难褪色的含氮染料。欲利用生物酶处理染料废水中的活性黑5，具体操作流程如图。从染料废水堆积池的污泥中获得优势菌群，采用浓度梯度驯化法，进一步培养获得具备强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，并进行基因表达分析。回答下列问题：（1）培养基Ⅰ和培养基Ⅱ均以为唯一氮源，从用途上来看均属于培养基，该类培养基的特点是。培养基Ⅱ是利用法将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的。（2）假单胞杆菌中，BVU5蛋白分解活性黑5的场所最可能为（填“细胞质基质”“溶酶体”或“核糖体”）；据题推测，驯化后的假单胞杆菌增强了过程。（3）假单胞杆菌分解活性黑5能力的强弱可能与（答出2点）因素有关。19．（2025•马鞍山模拟）脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）具有一定的致癌性，DON广泛存在于谷物类原料及其制品中。为筛选具有高效降解DON能力的微生物，科研人员进行了相关实验，部分流程为：土壤稀释液→MSD培养基富集培养→筛选→分离→纯化→鉴定。回答下列问题。（1）富集培养时，以DON为唯一碳源的MSD培养基从功能上属于。科研人员通过平板划线法将培养液中的微生物接种在固体培养基上，实验操作进行连续划线的目的是。（2）通过筛选获得了由两种微生物组成的混合菌体。为了鉴定两种微生物，科研人员对两者16SrDNA序列进行PCR扩增。在PCR反应体系中加Mg2+作用是。对PCR扩增结果进行凝胶电泳分析，出现多种条带，可能原因是。（3）改进实验后，结果显示该混合菌体由Y1和S1两种微生物组成。为明确DON被降解的原因，科研人员提出一种假设：混合菌体分泌了相关物质将DON降解。请设计实验验证以上假说，写出实验思路。。（4）实验表明混合菌体分泌了相关物质将DON降解。当科研人员将Y1和S1单独接种在DON培养基上时，发现两者均不能很好的降解DON，推测其原因是。20．（2025•天津模拟）磷是植物生长的重要元素，施入土中的磷大多数与Ca2+等离子结合形成难溶性磷酸盐。科研人员从贡柑果园土中选出可以将难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程见图1，请回答下列问题：（1）步骤③将土壤悬浮液稀释了倍。经步骤③最后一次稀释之后若在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，得到的结果是：39、38、37，则每克土样中的活菌数为个。运用这种方法统计的结果往往较实际值，原因是。（2）步骤④中待菌落长好后挑出溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较的菌落。通常情况下，对获得的纯菌种可以依据对细菌进行初步的鉴定和分类。（3）为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基中，并在37℃、200r•min﹣1摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到如图2所示曲线。用摇床进行培养的好处、。结果表明最优良的解磷菌株是。

2025年高考生物三轮复习之发酵工程参考答案与试题解析一．选择题（共15小题）题号1234567891011答案ADBBBBBBBDD题号12131415答案BCDB一．选择题（共15小题）1．（2025•盐城二模）下列有关发酵技术的叙述，正确的是（）A．制作泡菜过程中，泡菜盐水浓度过高可能会导致泡菜咸而不酸 B．传统制作果酒时，葡萄要尽量清洗干净，以免杂菌污染使果酒变质 C．以大豆为主要原料制作酱油，应选择分泌脂肪酶能力强的黑曲霉 D．果酒和果醋发酵过程中均有pH值先升高后明显下降的现象【考点】制作泡菜；果酒、果醋的制作．【专题】对比分析法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】A【分析】1、葡萄酒的制作运用的是酵母菌的无氧呼吸。在葡萄酒制作的过程中，酵母菌的培养温度控制在18℃到30℃。2、以大豆为主要原料，利用产生蛋白酶的霉菌（如黑曲霉），将原料中的蛋白质水解成小分子的肽和氨基酸，然后经淋洗、调制成的酱油产品。【解答】解：A、制作泡菜过程中，泡菜盐水浓度过高会抑制乳酸菌的繁殖，从而导致泡菜咸而不酸，A正确；B、果酒制作利用水果表面野生型酵母菌，因此不能清洗的太干净，B错误；C、以大豆为主要原料制作酱油，应选择分泌蛋白酶能力强的黑曲霉，C错误；D、果酒制作过程中会产生二氧化碳，二氧化碳溶于水，使pH降低，果醋制作过程中产生醋酸，同样会使pH下降，D错误。故选：A。【点评】本题考查腐乳的制作、泡菜的制作，对于此类试题，需要考生注意的细节较多，如实验的原理、实验采用的方法、实验现象及结论等，需要考生在平时的学习过程中注意积累。2．（2025•长沙校级一模）某研究小组通过基因工程技术对传统酵母中与乙醇合成相关的基因进行了优化，从而了提高酵母菌的代谢效率和乙醇生产能力。并比较了传统酵母菌（野生型）和经过基因改造后的酵母菌（改造型）在不同的发酵条件下的表现，实验结果如下。酵母菌类型乙醇产量（g/L）乙醇产率（g乙醇/g葡萄糖）发酵时间（h）初始葡萄糖浓度（g/L）野生型250.504850改造型400.603650下列说法正确的是（）A．实验室分离酵母菌常用牛肉膏蛋白胨培养基 B．通过基因工程改造酵母菌的核心步骤是将重组载体转入酵母菌中 C．与野生型酵母菌相比，改造型酵母菌虽提高了乙醇的产量但没能提高乙醇的生成速率 D．乙醇是酵母菌发酵的主要产物，然而在发酵过程中乙醇的积累会抑制酵母菌的生长和发酵效率【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用．【专题】数据表格；从生物材料提取特定成分；理解能力．【答案】D【分析】酵母菌的代谢类型为异养兼性厌氧型，有氧气存在时进行有氧呼吸，繁殖增加菌体数量，无氧气时，进行无氧呼吸，产生酒精和二氧化碳。【解答】解：A、实验室分离酵母菌常用麦芽汁琼脂培养基等，而不是牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏蛋白胨培养基是培养细菌常用的培养基，A错误；B、基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，而不是将重组载体转入酵母菌中，B错误；C、野生型酵母菌乙醇产量为25g/L，发酵时间为48h，则乙醇生成速率为2548≈0.52g/（L•h），改造型酵母菌乙醇产量为40g/L，发酵时间为36h，则乙醇生成速率为4036≈1.11g/（L•D、乙醇是酵母菌发酵的主要产物，当乙醇积累到一定浓度时，会对酵母菌的生长和发酵效率产生抑制作用，这是发酵过程中的常见现象，D正确。故选：D。【点评】本题考查发酵工程的相关知识，要求考生理解识记有关技术的原理及操作步骤，掌握各操作步骤中需要注意的细节，能将教材中的知识结合题中信息进行迁移应用。3．（2025•长沙校级一模）泡菜和酸奶是常见的发酵食品。下列关于家庭中发酵制作酸奶或泡菜的叙述，错误的是（）A．用酒精擦拭容器能使微生物蛋白变性失活 B．发酵装置要封装以抑制乳酸菌的有氧呼吸 C．可将菜料完全淹没在煮沸后冷却的盐水中 D．原料中的营养物质为发酵菌提供了碳源和氮源【考点】制作泡菜．【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】B【分析】泡菜制作过程中，乳酸发酵过程即为乳酸菌进行无氧呼吸产生乳酸的过程。【解答】解：A、酒精可以使蛋白质变性失活，则用酒精擦拭容器，使微生物蛋白变性失活，杀死容器表面附着的微生物，从而保证发酵过程不受杂菌污染，A正确；B、乳酸菌是厌氧菌，进行无氧呼吸，发酵装置要封装是为了保证乳酸菌的无氧呼吸，B错误；C、制作泡菜是利用乳酸菌无氧呼吸产生乳酸，所以为制造无氧环境，制作泡菜的菜料要完全淹没在煮沸后冷却的盐水，C正确；D、原料中一般含有糖类等含碳物质，可为发酵菌提供碳源；同时含有蛋白质等含氮物质，可为发酵菌提供氮源，满足乳酸菌等发酵微生物生长和代谢的需要，D正确。故选：B。【点评】本题考查泡菜的制作的相关知识，学生掌握泡菜制作的原理和流程等是解答本题的关键。4．（2025•辽阳模拟）传统发酵技术与传统文化紧密相连，是中华饮食文化的重要组成部分。果酒、果醋、泡菜、腐乳、馒头、酸奶的制作等离不开传统发酵技术。下列相关叙述错误的是（）A．果酒、馒头的制作离不开酵母菌 B．果醋、酸奶、泡菜的酸味都来自醋酸 C．参与腐乳制作的酵母、毛霉、曲霉都是真核生物 D．酒精发酵以及泡菜的制作都需要无氧条件【考点】果酒、果醋的制作；发酵与传统发酵技术；制作泡菜．【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】B【分析】制作果酒利用的是酵母菌进行无氧呼吸产生酒精的原理，在发酵初期通入空气可以使酵母菌进行有氧呼吸并大量繁殖；醋酸菌是好氧微生物，在果醋发酵过程中必须持续通入空气；参与腐乳发酵的青霉、毛霉、曲霉等都属于真核生物；泡菜、酸奶制作过程中使用的乳酸菌是一种厌氧细菌。【解答】解：A、酵母菌是兼性厌氧微生物，能进行有氧呼吸，也能进行无氧呼吸，果酒、馒头的制作离不开酵母菌，A正确；B、果醋的酸味来自醋酸，而酸奶、泡菜的酸味都来自乳酸，B错误；C、腐乳的制作过程中，多种微生物参与了豆腐的发酵，如酵母、毛霉、曲霉等，它们都是真核生物，C正确；D、酒精发酵利用的是酵母菌的无氧呼吸，泡菜制作利用的是乳酸菌发酵，乳酸菌为厌氧菌，所以酒精发酵以及泡菜的制作均需无氧条件，D正确。故选：B。【点评】本题主要考查果酒、果醋、腐乳、酸奶、泡菜等的制作的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。5．（2025•广州一模）陈醋中的川芎嗪是治疗血栓等疾病的新型药物，能活血化瘀并对已聚集的血小板有解离作用。研究人员为提高陈醋药用价值，分别探究了传统、机械生产工艺对川芎嗪含量的影响，结果如下。下列叙述错误的是（）生产工艺川芎嗪含量/（mg•L﹣1）发酵后熏醅前发酵后进行传统熏醅（80﹣90℃4﹣5d）发酵后进行机械熏醅（110﹣120℃12﹣24h）传统醋酸发酵0.383.1511.18机械醋酸发酵1.334.7317.63A．陈醋发酵过程中需要提供碳源、氮源并通入空气 B．传统熏醅时提高熏醅的温度可以提高川芎嗪的产量 C．受皮外伤的患者在伤口愈合期间建议减少对陈醋的食用 D．选用机械醋酸发酵和机械熏醅方式酿造的食醋药用价值更高【考点】果酒、果醋的制作．【专题】数据表格；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】B【分析】参与果醋制作的微生物是醋酸菌，其新陈代谢类型是异养需氧型。果醋制作的原理：当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的果糖分解成醋酸。当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。【解答】解：A、醋酸菌是需氧型微生物，陈醋发酵过程中需要提供碳源、氮源并通入空气，A正确；B、由表格数据可知，并未提及升高温度对传统熏醅川芎嗪的产量的提高的影响，B错误；C、陈醋中的川芎嗪是治疗血栓等疾病的新型药物，能活血化瘀并对已聚集的血小板有解离作用，受皮外伤的患者在伤口愈合期间建议减少对陈醋的食用，C正确；D、由表格数据可知，选用机械醋酸发酵和机械熏醅方式酿造的食醋川芎嗪含量高，药用价值高，D正确。故选：B。【点评】本题考查发酵技术的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。6．（2025•抚顺模拟）传统固态发酵食醋过程包括酒曲和麦曲的糖化，然后通过酵母菌、醋酸菌等多菌种的发酵，最终陈酿而成。现代工业化生产食醋是基于传统发酵方法，将菌种接种到大型发酵罐中，并在计算机系统的监测和控制下完成。下列有关食醋发酵的叙述正确的是（）A．醋酸菌在无氧条件下发酵，能将酒精转化为乙醛，再转化为醋酸 B．与传统发酵方式相比，食醋的工业化生产需要接种单一菌种进行发酵 C．醋酸菌可利用充足的糖源和氧气，在其细胞质基质和线粒体中进行发酵 D．在工业化生产中，发酵罐需要严格消毒，可避免杂菌污染影响食醋品质和风味【考点】果酒、果醋的制作；发酵工程的基本环节．【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】B【分析】发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品，主要包括微生物的代谢物、酶及菌体本身。发酵工程一般包括菌种的选育，扩大培养，培养基的配制、灭菌，接种，发酵、产品的分离、提纯等方面。【解答】解：A、醋酸菌是好氧菌，在有氧条件下发酵，才能将酒精转化为乙醛，再转化为醋酸，A错误；B、传统发酵是多菌种发酵，现代工业化生产需要接种单一菌种进行发酵，B正确；C、醋酸菌属于原核生物，没有线粒体，C错误；D、在工业化生产中，发酵罐严格灭菌，能避免杂菌污染，因为杂菌可能会与发酵菌种竞争营养物质等，从而影响食醋品质和风味，D错误。故选：B。【点评】本题考查传统发酵技术的相关知识，要求考生识记果酒、果醋的制作原理等知识，意在考查考生的识记和分析能力。7．（2025•承德一模）甜酒酿（醪糟）是江南地区的传统小吃，是用蒸熟的糯米拌上酿酒酵母发酵而成的一种甜米酒，其制作流程为：浸米→蒸米→凉饭→拌酿酒酵母→发酵→检查→甜酒酿。下列有关叙述正确的是（）A．“蒸米”的主要目的是通过杀灭杂菌，延长甜酒酿的保质期 B．“凉饭”后再拌入酿酒酵母，可避免高温杀死发酵所需菌种 C．“发酵”时应将拌有酿酒酵母的凉饭装满密闭的容器 D．在发酵过程中酒精的浓度会持续增加，pH值会持续降低【考点】果酒、果醋的制作．【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】B【分析】果酒的制作离不开酵母菌，酵母菌是兼性厌氧微生物，在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖，把糖分解成二氧化碳和水；在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。故果酒的制作原理是酵母菌无氧呼吸产生酒精。【解答】解：A、“蒸米”的主要目的是使淀粉更易分解，便于微生物发酵，A错误；B、“凉饭”后再拌入酿酒酵母，可避免高温杀死发酵所需菌种，B正确；C、酒精发酵需要在无氧条件下进行，发酵时应将拌有酿酒酵母的凉饭装在密闭的容器中，但不能装满容器，应该适当留出约13的空间，CD、酵母菌细胞呼吸释放的CO2使得pH值降低以及酒精含量增多，对发酵起抑制作用，导致一段时间后酵母菌发酵停止，所以酒精浓度不会持续增加，pH值也不会持续降低，D错误。故选：B。【点评】本题主要考查果酒、果醋的制作的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。8．（2025•阿拉善盟一模）MRS肉汤培养基是青贮微生物常用培养基，但成本较高，难以作为青贮添加剂的主要成分开发利用。为筛选廉价培养基，研究人员分离纯化青贮微生物，并分别接种到不同培养基中培养48h，得到如图结果。下列叙述错误的是（）A．应将接种青贮微生物的培养基置于适宜温度下厌氧培养 B．本实验还可用血细胞计数板对青贮微生物的活菌数进行统计 C．培养初期，青贮微生物OD值较低可能与缺乏代谢所需酶有关 D．初步判断乳清粉培养基较适合作为青贮微生物的廉价培养基【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．【专题】坐标曲线图；正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．【答案】B【分析】由图可知，培养48h后，乳清粉培养基pH小于4.2，且OD值仅次于MRS培养基，说明其较适合作为青贮微生物的廉价培养基。【解答】解：A、青贮为厌氧生物，故应将接种青贮微生物的培养基置于适宜温度下厌氧培养，保证青贮微生物正常发酵，A正确；B、血细胞计数板不能只计数活菌，B错误；C、培养初期，青贮微生物OD值较低可能与缺乏代谢所需酶导致微生物繁殖较慢有关，C正确；D、分析题图，培养48h后，乳清粉培养基pH小于4.2，且OD值仅次于MRS培养基，由此可知其较适合作为青贮微生物的廉价培养基，D正确。故选：B。【点评】本题主要考查微生物的选择培养的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。9．（2025•定州市校级一模）科研人员发现某个敞口被真菌M污染的培养皿中出现了大部分细菌能正常生长，唯独真菌M附近没有细菌生长的现象。科研人员认为这可能是真菌M产生了抑制细菌生长的物质。为验证该猜想，科研人员做了如图所示的实验。下列有关分析正确的是（）A．过程①使用了平板划线法接种真菌M，该过程中接种环至少要灼烧4次 B．若甲、乙和丙组的滤纸片周围都出现了抑菌圈，则说明上述猜想正确 C．过程②应取平板a中的单菌落置于培养基b中，其主要目的是选择培养 D．真菌M在培养基b中培养时，培养基中应加入琼脂【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．【专题】模式图；正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．【答案】B【分析】1、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【解答】解：A、每次划线前都需要灼烧接种环，分析题图可知过程①使用了平板划线法接种真菌M一共画线4次，并且该过程结束时还需要灼烧一次接种环，因此该过程中接种环至少要灼烧5次，A错误；B、分析题图可知，甲、乙和丙组均为不同种类的细菌，若甲、乙和丙组的滤纸片周围都出现了抑菌圈，则说明真菌M可能产生了抑制细菌生长的物质，B正确；C、过程②应取平板a中的单菌落置于培养基b中，主要目的是扩大培养，获得更多的纯培养物，C错误；D、真菌M在培养基b中培养时，培养基b是液体培养基，不需要加入琼脂，D错误。故选：B。【点评】本题主要考查微生物的选择培养的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。10．（2025•抚顺模拟）某兴趣小组欲对牛奶制品中乳酸菌的多样性进行研究，他们采集菌种并做了相关实验。下列叙述正确的是（）A．将分离后的乳酸菌接种到含有抗生素的培养基中培养 B．筛选菌种时，可选用牛肉膏蛋白胨液体培养基观察菌落特征 C．在稀释涂布平板法操作中，需用已灭菌冷却的涂布器蘸取少量菌液进行接种 D．鉴定细菌种类时，除观察菌落特征外，还可借助PCR等方法【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．【答案】D【分析】微生物接种的方法最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作。将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体，这就是纯化的菌落。稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。【解答】解：A、抗生素会抑制乳酸菌生长，故分离后的乳酸菌需接种到不含抗生素的培养基中培养，A错误；B、观察菌落特征需要选用固体培养基，B错误；C、在稀释涂布平板法操作中，需将菌液滴在培养基上，再用涂布器涂布均匀，C错误；D、不同种类细菌的理化特性一般不同，鉴定细菌种类时，除观察菌落特征外，还可以借助PCR等生物化学的方法进行鉴定，D正确。故选：D。【点评】本题主要考查微生物的选择培养的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。11．（2025•项城市模拟）从传统发酵技术到发酵工程，经历了漫长的历史过程。下列叙述错误的是（）A．自制泡菜时泡菜坛装八成满可防止发酵液溢出 B．发酵工程需要严格控制温度、pH和罐压等条件 C．发酵获得的单细胞蛋白可用于生产微生物饲料 D．啤酒生产过程中，加入啤酒花可提供发酵菌种【考点】发酵工程在食品、医药、农牧业等工业上的应用；制作泡菜；果酒、果醋的制作；发酵工程的基本环节．【专题】正推法；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】D【分析】发酵工程是指采用现代化工程技术手段，利用微生物的某些功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种技术；发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的配制、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。发酵工程的中心环节是发酵罐内发酵，在该过程中要及时添加必需的营养组分，严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件。【解答】解：A、自制泡菜时泡菜坛装八成满，是因为在发酵初期，由蔬菜表面带入的大肠杆菌、酵母菌等较为活跃，它们的呼吸产物中有较多的二氧化碳，若泡菜坛装得太满，发酵液可能会溢出坛外，A正确；B、发酵工程的中心环节是发酵罐内发酵，该过程要及时添加必需的营养组分，严格控制温度、pH和溶解氧等发酵条件，B正确；C、微生物含有丰富的蛋白质，且细菌生长繁殖速度很快。所以许多国家以淀粉或纤维素的水解液、制糖工业的废液等为原料，通过发酵获得了大量的微生物菌体，即单细胞蛋白，用单细胞蛋白制成的微生物饲料，能使家畜、家禽增重快，产奶或产蛋量显著提高，C正确；D、啤酒生产过程中，通过接种酵母菌提供发酵菌种，加入啤酒花不可提供发酵菌种，D错误。故选：D。【点评】本题主要考查发酵的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。12．（2025•湖北模拟）大豆发酵食品豆瓣酱是我国传统发酵美食，它能让麻婆豆腐热辣鲜香，也能让回锅肉滋味醇厚，好似舌尖上的时光胶囊，封存着先辈们代代相传的生活智慧。豆瓣酱的制作流程如图所示，下列叙述错误的是（）A．保温发酵过程中，酱豆中有机物的种类增加，有机物含量减少 B．米曲霉发酵过程中，添加面粉主要是为米曲霉的生长提供氮源 C．米曲霉发酵时需不断翻酱，由此推测米曲霉属于需氧型微生物 D．后期发酵中乳酸菌产生乳酸，能抑制杂菌生长并赋予豆瓣酱独特酸味【考点】发酵与传统发酵技术．【专题】模式图；果酒、果醋、腐乳和泡菜的制作；理解能力．【答案】B【分析】蚕豆中含有大量蛋白质，主要为微生物的生长提供碳源（提供碳元素）和氮源（提供氮元素）类营养物质；加入的蚕豆经蒸熟、冷却后使用，这样既可以对蚕豆进行消毒，消灭蚕豆表面的杂菌，又能防止蚕豆温度过高导致接种的微生物死亡。【解答】解：A、在保温发酵过程中，米曲霉等微生物会分泌多种酶来分解有机物，复杂的有机物会被逐步分解成小分子有机物，因此有机物的种类会增加，发酵过程中微生物的呼吸作用会消耗有机物来获取能量，导致有机物含量减少，A正确；B、在米曲霉发酵过程中，添加面粉主要是为米曲霉的生长提供碳源，B错误；C、米曲霉发酵时需不断翻酱，其目的是让米曲霉接触到充足的氧气，由此推断米曲霉属于需氧型微生物，C正确；D、后期发酵中乳酸菌会进行发酵产生乳酸，降低环境的pH值，很多杂菌在酸性环境中生长会受到抑制，乳酸还能赋予豆瓣酱独特的酸味，D正确。故选：B。【点评】本题主要考查发酵的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。13．（2025•石家庄模拟）蛭弧菌能使污水中的嗜水气单胞菌（异养型）裂解，将其接种在长满嗜水气单胞菌的平板上会出现噬菌斑。某兴趣小组将嗜水气单胞菌接种到固体培养基上，培养形成薄层，再接种采集的污水用以分离蛭弧菌。下列叙述错误的是（）A．可用干热灭菌法对平板进行灭菌 B．可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌 C．出现噬菌斑一定是蛭弧菌作用的结果 D．污水可为自然环境中的嗜水气单胞菌提供碳源【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）；无菌技术常用的消毒和灭菌方法．【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．【答案】C【分析】微生物常见的接种的方法：（1）平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。（2）稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【解答】解：A、干热灭菌适用于能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具等，故可用干热灭菌法对平板进行灭菌，A正确；B、接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法，故可用涂布平板法接种嗜水气单胞菌，B正确；C、出现噬菌斑说明有能分解嗜水气单胞菌的微生物，但不一定是蛭弧菌作用的结果，C错误；D、污水中含有氨氮，可以为微生物提供氮源，D正确。故选：C。【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。14．（2025•漳州模拟）研究人员拟筛选出优良的酵母菌菌株用于发酵，其部分实验流程如图所示。下列叙述错误的是（）A．图中涂布、划线过程需在酒精灯火焰附近进行 B．培养基A上的菌落可先通过菌落特征进行筛选 C．进行平板划线时，后一次划线应从前一次的末端开始 D．涂布时用灭菌后的接种环将菌液均匀涂布于培养基A表面【考点】微生物的纯培养．【专题】模式图；微生物的分离、培养和应用；理解能力．【答案】D【分析】平板划线法：把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞，用接种环在平板表面上作多次由点到线的划线稀释而获得较多独立分布的单个细胞，并让其成长为单菌落的方法。【解答】解：A、由图可知，培养基A上进行的操作是涂布平板，培养基B上进行的操作是平板划线，这说明该实验对优良酵母菌菌株进行的筛选方法是先进行稀释涂布平板法获得单菌落，再用平板划线法继续进行纯化，其接种的过程应在酒精灯火焰附近进行，A正确；B、培养基A的菌落不一定只含酵母菌，可以先通过菌落的形态初步筛选酵母菌，再通过镜检选择菌落，B正确；C、进行平板划线时，后一次划线应从前一次的末端开始，这样可以实现通过连续划线操作获得单菌落，C正确；C、涂布时用灭菌后的涂布器将菌液均匀涂布于培养基A表面，D错误。故选：D。【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。15．（2025•长沙校级一模）野生型大肠杆菌能够在基本培养基上生长，经诱变获得了两种营养缺陷型的突变体M、N，且单独培养时均不能在基本培养基上生长。若将两种突变体在完全培养基（液体）中混合培养一段时间后，再采用稀释涂布平板法接种在基本培养基平板上，培养后长出了大肠杆菌菌落。下列有关叙述正确的是（）A．野生型大肠杆菌诱变时发生了基因突变或染色体变异 B．突变体M和N能相互为对方提供所缺营养物质 C．在混合培养期间突变体M和N发生了遗传物质的交流 D．混合培养获得的大肠杆菌都能在基本培养基中生长【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）．【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用．【答案】B【分析】基因突变是指基因中碱基对的增添、缺失或替换，这会导致基因碱基序列的改变，进而产生新基因。【解答】解：A、野生型大肠杆菌是原核生物，其遗传物质主要位于拟核的DNA上，并没有像真核生物那样的染色体结构。因此，野生型大肠杆菌在诱变时不可能发生染色体变异，只能发生基因突变，A错误；B、根据题目描述，突变体M和N都是营养缺陷型，且单独培养时均不能在基本培养基上生长。然而，当它们在完全培养基中混合培养一段时间后，再接种到基本培养基上却长出了大肠杆菌菌落。这说明在混合培养期间，突变体M和N能够相互为对方提供所缺失的营养物质，从而使得双方都能在基本培养基上生长，B正确；C、根据题目描述，突变体M和N都是营养缺陷型，且单独培养时均不能在基本培养基上生长，所以在混合培养期间，突变体M和N能够相互为对方提供所缺失的营养物质，并不一定是发生了遗传物质的交流，C错误；D、虽然混合培养后接种到基本培养基上长出了大肠杆菌菌落，但这并不意味着混合培养获得的所有大肠杆菌都能在基本培养基中生长。只有那些通过相互提供缺失营养物质而恢复了生长能力的突变体或重组体才能在基本培养基上生长，D错误。故选：B。【点评】本题考查学生从题中获取相关信息，并结合所学微生物实验室培养的知识作出正确判断，属于识记和理解层次的内容，难度适中。二．解答题（共5小题）16．（2025•山东模拟）金黄色葡萄球菌（简称Sa）可引起皮肤伤口感染、败血症、细菌性肺炎等疾病。不规范使用抗生素易出现多重抗药性Sa。（1）A、B、C、D四种抗生素均可治疗由Sa引起的肺炎，为选出最佳疗效的抗生素，研究者分别将含等剂量抗生素A、B、C、D的四张大小相同的滤纸片a、b、c、d置于均匀分布Sa的平板培养基上，在适宜条件下培养48h，结果如图1。配制培养基时，需要加入的营养成分除了水和无机盐外，还应包括碳源、氮源；A、B、C、D四种抗生素中，抑菌效果最佳的是抗生素A。（2）Sa产生抗药性可遗传变异的来源有基因突变、基因重组、表观遗传（甲基化等）（答出2点）。（3）推测Sa产生头孢霉素抗性与其R基因有关。为验证该推测，以图2中R基因的上、下游片段和质粒1构建质粒2，然后通过同源重组（质粒2中的上、下游片段分别与Sa基因组中R基因上、下游片段配对，并发生交换）敲除Sa的R基因。注1：1kb＝1000碱基对2：Y是可被脱水四环素（不作为抗生素起作用）诱导表达的Sa致死基因①根据图2信息，质粒2的构建过程中需选择限制酶SacⅡ和EcoRⅠ对PCR产物进行酶切，然后回收上、下游片段，再与SacⅡ酶切质粒1所得大片段连接，获得质粒2。②用质粒2转化临床分离的具有头孢霉素抗性、对氯霉素敏感的Sa，然后涂布在含氯霉素的平板上，经培养获得含质粒2的Sa单菌落。③将②获得的单菌落多次传代以增加同源重组敲除R基因的概率，随后稀释涂布在含脱水四环素的平板上，筛选并获得不再含有质粒2的菌落。从这些菌落中分别挑取少许菌体，依次接种到含头孢霉素的平板上，若无法增殖，则对应菌落中细菌的R基因可能被敲除。④以③获得的菌株基因组为模板，采用不同引物组合进行PCR扩增，电泳检测结果如图3，表明R基因已被敲除的是D。【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）；基因表达载体的构建．【专题】图文信息类简答题；正推法；微生物的分离、培养和应用；基因工程；理解能力；解决问题能力．【答案】（1）碳源、氮源；抗生素A（2）基因重组、表观遗传（甲基化等）（3）SacⅡ和EcoRⅠ；脱水四环素；头孢霉素；D【分析】可遗传变异来源有：基因突变、基因重组、染色体变异及表观遗传。Sa是原核生物，没有染色体。基因表达载体构建过程，利用PCR扩增目的基因时，需要目的基因两端的一段已知序列构建引物，质粒1及Sa的基因组中都含有SacII酶识别位点，还有质粒2上含有R基因上下游片段。筛选含质粒2的Sa菌落，用标记基因筛选目的菌，已知质粒2上有氯霉素抗性基因，筛选并获得不再含有质粒2的菌落，用标记基因筛选目的菌质粒2中的上、下游片段分别与Sa基因组中R基因上、下游片段配对，并发生交换，R基因被交换至质粒2上，则Sa的基因组中没有了R基因；Sa产生头孢霉素抗性与其R基因有关，失去R基因，Sa没有头孢霉素抗性；质粒2上含有的Y是可被脱水四环素诱导表达的Sa致死基因，则含质粒2的Sa在含脱水四环素的培养基中会死亡。筛选R基因被敲除的Sa，PCR扩增目的基因时需要目的基因两端的一段已知序列构建引物，发生同源重组时，质粒2中的上、下游片段分别与Sa基因组中R基因上、下游片段配对，并发生交换，敲除Sa的R基因，但R基因两端的上、下游片段仍在Sa基因组中。【解答】（1）配制培养基时，需要加入的营养成分除了水和无机盐外，还应包括碳源、氮源，这是培养基的基本成分；在含等剂量不同抗生素的滤纸片置于均匀分布Sa的平板培养基上培养后，抑菌圈越大，说明该抗生素的抑菌效果越好。A、B、C、D四种抗生素中，抑菌效果最佳的是抗生素A，因为滤纸片a的抑菌圈最大；（2）Sa为原核生物，没有染色体，不能进行有性生殖，产生抗药性可遗传变异的来源有基因突变、基因重组（例如通过获取外源DNA片段等方式发生基因重组）、表观遗传等；（3）①由图1可知，质粒2上依次接有SacⅡ、EcoRⅠ、SacⅡ三个酶切位点，而质粒1上只有SacⅡ酶切位点，R基因的上下游依次含有SacⅡ、EcoRⅠ、EcoRⅠ、SacⅡ酶切位点，若要构建质粒2，可以采用引物1和4进行PCR扩增可得到整个R基因，以及上下游片段（或采用引物1和3以及引物2和4分别进行PCR扩增），用SacⅡ和EcoRⅠ对PCR产物进行酶切，然后回收上、下游片段，再与SacⅡ酶切质粒1所得大片段连接，获得质粒2。②用质粒2转化临床分离的具有头孢霉素抗性、对氯霉素敏感的Sa，因为重组的质粒2上含有氯霉素抗性基因，所以可以将重组后的含质粒2的菌落涂布在含氯霉素（或氯霉素+头孢霉素）的平板上，能生存下来的菌落就是，含质粒2的Sa单菌落。③推测Sa产生头孢霉素抗性与其R基因有关。为验证该推测需要敲除R基因，因为质粒2上含有Y可被脱水四环素又到表达的Sa致死基因，所以将②获得的单菌落多次传代以增加同源重组敲除R基因的几率，随后稀释涂布在含脱水四环素的平板上，可诱导R基因死亡，若无法增殖，则对应菌落中细菌的R基因疑似被敲除。④若R基因已被敲除，用引物1和3扩增，由于上、下游片段连接在一起，长度为0.7+1.2＝1.9kb；用引物2和4扩增，由于R基因被敲除，没有对应的模板，不会有扩增产物；用引物2和3扩增，也没有对应的模板，不会有扩增产物；用引物1和4扩增，长度为0.7+1.2＝1.9kb。观察图3，只有D选项符合上述情况，所以表明R基因已被敲除的是D。故选：D。故答案为：（1）碳源、氮源；抗生素A（2）基因重组、表观遗传（甲基化等）（3）SacⅡ和EcoRⅠ；脱水四环素；头孢霉素；D【点评】本题是一道综合性很强的实验探究题，围绕金黄色葡萄球菌（Sa）的抗生素抗性展开，涉及微生物培养、可遗传变异来源、基因工程操作及验证实验设计等多方面知识。学生需牢记微生物培养基的基本成分，如碳源、氮源、水和无机盐等，在分析配制培养基所需成分时，避免遗漏；理解通过抑菌圈大小判断抗生素抑菌效果的原理，观察实验结果图时要仔细，准确找出抑菌圈最大的抗生素，防止观察失误；对基因工程中限制酶的选择、质粒构建、转化等操作过程要清晰掌握。本题中根据基因片段和质粒上的酶切位点准确选择限制酶；理解各步骤中筛选所用试剂的作用，如氯霉素用于筛选含质粒2的菌落，脱水四环素用于去除含质粒2的菌落等，防止逻辑混乱。17．（2025•长沙校级一模）白色污染问题已引起全社会广泛关注，降解塑料的研究和开发是解决白色污染的理想途径之一。地膜的主要成分是聚乙烯[化学式为（C2H4）n]。残留在土壤中的地膜难以被降解，为筛选出高效降解地膜的细菌，研究人员进行了如图所示的操作。X培养基是选择培养基，聚乙烯分解菌在该培养基上会形成抑菌圈。回答下列问题：（1）在筛选聚乙烯分解菌过程中，应选择含废旧地膜丰富的土壤，制作培养基时，应将聚乙烯作为X培养基中的唯一碳源，并使用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。（2）为了证明所配制X培养基具有选择作用，在恒温培养前，需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养，待两种培养基平板上的菌落生长稳定时，比较两种平板培养基上的菌落数。若结果为X培养基平板上的菌落数明显少于完全培养基平板上的菌落数，则可证明上述观点。（3）可挑选X培养基中的⑤（填序号）中的单菌落接种到Y培养基上进行培养。配制Y培养基时，其pH一般调至中性或弱碱性。（4）用稀释涂布平板法对细菌进行计数时，所统计的菌落数往往会比活菌的实际数目偏小，原因是当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。在5个平板上各接种稀释倍数为103的菌液样品0.1mL，培养一段时间后，平板上的菌落数分别为28、50、52、54、313，则每升原菌液样品中细菌数为5.2×108个。【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）；微生物的数量测定．【专题】图文信息类简答题；微生物的分离、培养和应用；理解能力．【答案】（1）含废旧地膜丰富聚乙烯高压蒸汽（2）X培养基平板上的菌落数明显少于完全培养基平板上的菌落数（3）⑤；中性或弱碱性（4）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落5.2×108【分析】微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。【解答】解：（1）筛选聚乙烯分解菌，依据题干信息，地膜的主要成分是聚乙烯，所以应选择含废旧地膜丰富的土壤制作样品，制作培养基时，应该聚乙烯作为X培养基中的唯一碳源，并使用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌。（2）为了证明所配制X培养基具有选择作用，在恒温培养前，需要将接种后的X培养基平板和接种后的完全培养基平板同时进行培养，待两种培养基平板上的菌落生长稳定时，比较两种平板培养基上的菌落数。如果X培养基平板上的菌落数明显少于完全培养基平板上的菌落数，说明该培养基具有选择作用。（3）透明圈直径/菌落直径越大，说明该菌的降解能力越强，所以应选择⑤中单菌落接种到Y培养基上进行培养，培养细菌时，其pH一般调至中性或弱碱性。（4）由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，所以当用稀释涂布平板法对细菌进行计数时，所统计的菌落数往往会比活菌的实际数目偏小。平板上的菌落数应介于30﹣300之间，故28、313数值无效，所以每升原菌液样品中的细菌数为（50+52+54）÷3÷0.1×103×103＝5.2×108。故答案为：（1）含废旧地膜丰富聚乙烯高压蒸汽（2）X培养基平板上的菌落数明显少于完全培养基平板上的菌落数（3）⑤；中性或弱碱性（4）当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落5.2×108【点评】本题考查微生物的培养与分离等相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。18．（2025•长沙校级一模）活性黑5是一种低毒性、难褪色的含氮染料。欲利用生物酶处理染料废水中的活性黑5，具体操作流程如图。从染料废水堆积池的污泥中获得优势菌群，采用浓度梯度驯化法，进一步培养获得具备强分解活性黑5能力的假单胞杆菌，并进行基因表达分析。回答下列问题：（1）培养基Ⅰ和培养基Ⅱ均以活性黑5为唯一氮源，从用途上来看均属于选择培养基，该类培养基的特点是允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长。培养基Ⅱ是利用平板划线法将单个微生物分散在固体培养基上，之后经培养得到的单菌落一般是由单个微生物繁殖形成的纯培养物。（2）假单胞杆菌中，BVU5蛋白分解活性黑5的场所最可能为细胞质基质（填“细胞质基质”“溶酶体”或“核糖体”）；据题推测，驯化后的假单胞杆菌增强了BVU5基因的转录和翻译过程。（3）假单胞杆菌分解活性黑5能力的强弱可能与BVU5蛋白的含量、BVU5蛋白对活性黑5的分解速率、BVU5蛋白的空间结构（答出2点）因素有关。【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）；微生物的纯培养．【专题】图文信息类简答题；微生物的分离、培养和应用；理解能力．【答案】（1）活性黑5选择允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长平板划线纯培养物（2）细胞质基质BVU5基因的转录和翻译（3）BVU5蛋白的含量、BVU5蛋白对活性黑5的分解速率、BVU5蛋白的空间结构【分析】培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质；分为固体培养基和液体培养基，培养基中一般含有水、碳源、氮源和无机盐，其中碳源和氮源常采用蛋白胨和牛肉膏，因为它们来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营养物质。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对特殊营养物质和氧气的要求。【解答】解：（1）培养基Ⅰ和培养基Ⅱ均为选择培养基，均以活性黑5为唯一氮源；该培养基能筛选到能利用活性黑5的微生物，从用途上来看均属于选择培养基；选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设计的培养基。具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能；培养基Ⅱ是利用平板划线法将单个微生物分散在固体培养基上；一般由单个微生物繁殖形成的一团肉眼可见的纯培养物称为菌落。（2）假单胞杆菌为原核生物，没有溶酶体，核糖体是合成蛋白质的场所，没有分解蛋白质的功能，细胞质基质中由于存在多种酶，因此最可能为BVU5蛋白分解活性黑5的场所；驯化后的假单胞杆菌增强了BVU5基因的转录和翻译过程，使得BVU5蛋白的含量大大提高。（3）BVU5蛋白的含量、BVU5蛋白对活性黑5的分解速率、BVU5蛋白的空间结构都可能会影响到假单胞杆菌分解活性黑5的能力。故答案为：（1）活性黑5选择允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长平板划线纯培养物（2）细胞质基质BVU5基因的转录和翻译（3）BVU5蛋白的含量、BVU5蛋白对活性黑5的分解速率、BVU5蛋白的空间结构【点评】本题考查微生物培养的相关知识，意在考查学生的识记能力和判断能力，运用所学知识综合分析问题的能力是解答本题的关键。19．（2025•马鞍山模拟）脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）具有一定的致癌性，DON广泛存在于谷物类原料及其制品中。为筛选具有高效降解DON能力的微生物，科研人员进行了相关实验，部分流程为：土壤稀释液→MSD培养基富集培养→筛选→分离→纯化→鉴定。回答下列问题。（1）富集培养时，以DON为唯一碳源的MSD培养基从功能上属于选择培养基。科研人员通过平板划线法将培养液中的微生物接种在固体培养基上，实验操作进行连续划线的目的是将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。（2）通过筛选获得了由两种微生物组成的混合菌体。为了鉴定两种微生物，科研人员对两者16SrDNA序列进行PCR扩增。在PCR反应体系中加Mg2+作用是激活DNA聚合酶。对PCR扩增结果进行凝胶电泳分析，出现多种条带，可能原因是引物特异性不强、引物较短、引物浓度较高、复性温度较低等。（3）改进实验后，结果显示该混合菌体由Y1和S1两种微生物组成。为明确DON被降解的原因，科研人员提出一种假设：混合菌体分泌了相关物质将DON降解。请设计实验验证以上假说，写出实验思路。取混合微生物培养液添加到含有一定量的DON溶液中，一段时间后检测溶液中DON含量。（4）实验表明混合菌体分泌了相关物质将DON降解。当科研人员将Y1和S1单独接种在DON培养基上时，发现两者均不能很好的降解DON，推测其原因是降解DON可能需要多步反应，Y1和S1分泌的物质可以将对方无法分解的中间产物进一步分解，分解产物可以作为下一反应的底物，两者分泌的物质起到协同作用。【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）；DNA片段的扩增与电泳鉴定；微生物的纯培养．【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；理解能力．【答案】（1）选择培养基；将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面（2）激活DNA聚合酶；引物特异性不强、引物较短、引物浓度较高、复性温度较低等（3）取混合微生物培养液添加到含有一定量的DON溶液中，一段时间后检测溶液中DON含量（4）降解DON可能需要多步反应，Y1和S1分泌的物质可以将对方无法分解的中间产物进一步分解，分解产物可以作为下一反应的底物，两者分泌的物质起到协同作用【分析】PCR原理：目的基因DNA受热变性后解为单链，引物与单链相应互补序列结合；然后以单链DNA为模板，在DNA聚合酶作用下进行延伸，即将4种脱氧核苷酸加到引物的3'端，如此重复循环多次。【解答】解：（1）富集培养时，以DON为唯一碳源的MSD培养基从功能上属于选择培养基；进行连续划线的目的是将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面。（2）在PCR反应体系中加Mg^{2+}的作用是激活DNA聚合酶；对PCR扩增结果进行凝胶电泳分析，出现多条带，可能原因是引物特异性不强、引物较短、引物浓度较高、复性温度较低等。（3）实验思路：取混合微生物培养液添加到含有一定量的DON溶液中，一段时间后检测溶液中DON含量；另取等量的Y1和S1的培养液分别添加到含有等量DON溶液的两组容器中，相同时间后检测两组容器中DON含量，并与混合微生物培养液组进行对比。（4）原因是降解DON可能需要多步反应，Y1和S1分泌的物质可以将对方无法分解的中间产物进一步分解，分解产物可以作为下一反应的底物，两者分泌的物质起到协同作用。故答案为：（1）选择培养基；将聚集的菌种逐步分散到培养基的表面（2）激活DNA聚合酶；引物特异性不强、引物较短、引物浓度较高、复性温度较低等（3）取混合微生物培养液添加到含有一定量的DON溶液中，一段时间后检测溶液中DON含量（4）降解DON可能需要多步反应，Y1和S1分泌的物质可以将对方无法分解的中间产物进一步分解，分解产物可以作为下一反应的底物，两者分泌的物质起到协同作用【点评】本题考查了微生物的选择培养、PCR技术以及实验设计等知识点，意在考查学生对微生物培养和分子生物学技术的理解，以及实验设计和分析能力。20．（2025•天津模拟）磷是植物生长的重要元素，施入土中的磷大多数与Ca2+等离子结合形成难溶性磷酸盐。科研人员从贡柑果园土中选出可以将难溶性或不溶性磷转化成可溶性磷的高效解磷菌，主要流程见图1，请回答下列问题：（1）步骤③将土壤悬浮液稀释了1000倍。经步骤③最后一次稀释之后若在3个平板上分别接入0.1mL稀释液，经适当培养后，得到的结果是：39、38、37，则每克土样中的活菌数为3.8×106个。运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小，原因是一个菌落可能来自于两个或多个细胞。（2）步骤④中待菌落长好后挑出溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较大的菌落。通常情况下，对获得的纯菌种可以依据菌落（的形状、大小、颜色等）特征对细菌进行初步的鉴定和分类。（3）为进一步测定初步筛选的三种菌株实际溶解磷的能力，研究人员将它们接种到基础培养基中，并在37℃、200r•min﹣1摇床培养，定期取上清液，测定溶液中可溶性磷含量，得到如图2所示曲线。用摇床进行培养的好处增加培养液中的溶氧量、使菌株与培养液充分接触，有利于物质交换。结果表明最优良的解磷菌株是M﹣3﹣01。【考点】微生物的选择培养（稀释涂布平板法）；微生物的数量测定．【专题】正推法；微生物的分离、培养和应用；实验探究能力．【答案】（1）10003.8×106偏小一个菌落可能来自于两个或多个细胞（2）大菌落（的形状、大小、颜色等）特征（3）增加培养液中的溶氧量使菌株与培养液充分接触，有利于物质交换M﹣3﹣01【分析】微生物的营养物质主要有碳源、氮源、水和无机盐等。筛选目的微生物必须使用选择培养基。从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株常用的接种方法主要有稀释涂布平板法和平板划线法。【解答】解：（1）步骤③进行了3次稀释，每次稀释了10倍，则共将土壤悬浮液稀释了1000倍。（39+38+37）÷3÷0.1×104＝3.8×106个。由于两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，因此该数值与活菌的实际数目相比偏低。（2）溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较大，说明细菌分解磷酸盐的能力较强，所以选择溶磷圈直径（D）与菌落直径（d）比值较大的菌落。不同的微生物具有特定的菌落特征，所以可通过观察菌落的形状、大小、颜色等特征对细菌进行初步的鉴定和分类。（3）摇床培养是实验室培养需氧微生物的常用方法，使用摇床培养，不仅可以增大培养液中溶氧量，促进微生物的有机呼吸，而且能够增加菌体与培养液的接触，有利于物质交换，提高营养物质的利用率。根据实验曲线图，培养相同时间后，M﹣3﹣01的上清液中可溶性磷含量较高，可知M﹣3﹣01实际溶解磷能力最强。故答案为：（1）10003.8×106偏小一个菌落可能来自于两个或多个细胞（2）大菌落（的形状、大小、颜色等）特征（3）增加培养液中的溶氧量使菌株与培养液充分接触，有利于物质交换M﹣3﹣01【点评】本题考查微生物培养的相关内容，要求学生能结合所学知识正确作答。

考点卡片1．发酵与传统发酵技术【知识点的认识】（1）发酵工程是指利用微生物的特定功能，通过现代工程技术，规模化生产对人类有用的产品。它涉及菌种的选育和培养、产物的分离和提纯等方面。（2）发酵是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需要的产物的过程。（3）传统发酵技术是直接利用原料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的面团、卤汁等发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术。【命题方向】下列关于发酵与传统发酵技术的叙述，正确的是（）A．发酵过程中有机物的干重和种类均减少B．传统发酵技术都是直接利用天然原料中的微生物C．传统发酵是以混合菌种的固体发酵及液体发酵为主D．发酵是将原料通过微生物的代谢转化为人类所需的产物的过程分析：发酵工程是指采用现代工程技术手段，利用微生物的某些特定功能，为人类生产有用的产品，或直接把微生物应用于工业生产过程的一种计数。发酵工程的内容包括菌种的选育、培养基的制备、灭菌、扩大培养和接种、发酵过程和产品的分离提纯等方面。解答：A、发酵过程中微生物代谢会消耗有机物，导致有机物的干重减少，但会有中间物质的产生，有机物种类会增加，A错误；B、传统发酵技术是指直接利用原材料中天然存在的微生物，或利用前一次发酵保存下来的发酵物中的微生物进行发酵、制作食品的技术，B错误；C、传统发酵是以混合菌种的固体发酵和半固体发酵为主，C错误；D、发酵是指人们利用微生物，在适宜的条件下，将原料通过微生物的代谢转化为人类所需的产物的过程，D正确。故选：D。点评：本题主要考查传统发酵技术的应用的内容，要求考生识记相关知识，并结合所学知识准确答题。【解题思路点拨】掌握发酵与传统发酵技术的相关知识是解题的关键。2．制作泡菜【知识点的认识】泡菜的制作及亚硝酸盐含量的测定1、原理（1）泡菜的制作原理泡菜的制作离不开乳酸菌．在无氧条件下，乳酸菌将葡萄糖分解成乳酸．（2）测定亚硝酸盐含量的原理在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料．将显色反应后的样品与已知浓度的标准液进行目测对比，可以大致估算出亚硝酸盐的含量．2、流程（1）泡菜的制作（2）亚硝酸盐含量的测定操作过程3、实验分析（1）乳酸菌的种类分析乳酸菌属原核生物，它是能通过发酵将糖类转化成乳酸的细菌的总称，常见的有乳酸杆菌和乳酸链球菌，所以乳酸菌不是一个种群，而是一类生物．（2）泡菜在腌制过程中，乳酸菌、乳酸和亚硝酸盐的变化①发酵初期：以不抗酸的大肠杆菌和酵母菌的活动为主，同时还有一部分硝酸盐还原菌活动．该时期利用了氧气，产生了厌氧环境，乳酸菌才开始活动．此时乳酸菌和乳酸的量都比较少，而由于硝酸盐还原菌的活动，亚硝酸盐含量有所增加．②发酵中期：由于乳酸菌产生了大量乳酸，其他细菌活动受到抑制，只有乳酸菌活动增强．此时期乳酸菌数量达到最高峰，乳酸的量继续积累．由于硝酸盐还原菌受抑制，同时形成的亚硝酸盐又被分解，因而亚硝酸盐含量下降．所以在整个发酵过程中，亚硝酸盐的含量表现为先增加后下降的趋势（如图所示）．③发酵后期：由于乳酸的积累，酸度继续增长，乳酸菌活动也受到抑制．乳酸菌数量下降，而硝酸盐还原菌完全被抑制．提醒放置时间长的蔬菜中的硝酸盐易被滋生的硝酸还原菌还原成亚硝酸盐．3．果酒、果醋的制作【知识点的认识】（1）利用酵母菌制作果酒的原理是：在有氧条件下，酵母菌进行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O6+6O2→酶6CO2+12H2O+在无氧条件下，酵母菌能进行酒精发酵。C6H12O6→酶2CO2+2C2H5OH+（2）利用醋酸菌制作果醋的原理当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。C6H12O6+2O2→酶CH3COOH（醋酸）+2H2O+2CO2+C2H5OH+O2→酶CH3COOH（醋酸）+H2O+（提示：在变酸的酒的表面观察到的菌膜是醋酸菌在液面大量繁殖而形成的）【命题方向】下列关于果酒、果醋制作的叙述，错误的是（）A．糖源不足时乙醇可以作为果醋发酵的底物B．酵母菌和醋酸杆菌都属于异养型微生物C．乙醇发酵后期可向培养液中加入无菌水进行适当稀释再制作果醋D．在变酸的果酒表面观察到的菌膜是酵母菌在液面大量繁殖形成的分析：1、果醋制作中起到主要作用的微生物是醋酸菌，醋酸菌是一种好氧细菌，只有当氧气充足时，才能进行旺盛的生理活动，其代谢类型属于异养需氧型。当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解为醋酸；当缺少糖源时，醋酸菌将乙醇变为乙醛，再将乙醛变为醋酸。醋酸菌的最适生长温度为30～35℃