北京大学1991年攻读硕士学位研究生入学试题生物化学

北京大学1991年攻读硕士学位研究生入学试题生物化学

一.名词解释

1.拼接体2.复制子3.反馈调节4.别构效应5.抗体酶

二.英译汉

1.THF2.ddTPP3.ACTH4.Hbs5.tRNAm6.micRNA7.ACP8.NADPH9.AGo;10.Cotl/2

三.填空

1.NAD+和NADP+还原时在______增加一个吸收峰.

2.常用的DNA超螺旋结构的嵌合剂是

3.在癌变过程中同工酶谱发生______

4.哺乳动物的必须脂肪酸为和

5.某些蛋白质前体都具有它的肽,它们大都相当于______左右氨基酸的长度.残基侧链

一般是,位于肽链的末端.

6.糖蛋白中糖基与蛋白质肽链之间可通过酰糖昔键相结合,即和

7.DNA序列的末端终止法所用的工具酶是

8.E.ColiRNA聚合酶的亚基组成为，没有______亚基的酶称为核心酶，该亚基的功能为

9.线粒体DNA的复制为方式,大肠杆菌染色体的复制为方式，0X174环状染色体

和噬菌体XDNA后期复制为方式,真核生物染色体DNA复制为方式

10.呼吸链电子传递速度受浓度控制的现象称为

H.胆固醇合成的限速酶是,浓度升高其活性下降

12.喀咤环由和合成的

13.丙酮脱氢酶系统受和.______三种调节控制

14.神经递质5-羟色胺是由衍生而成

15.乙酰辅酶A进入三竣酸循环,还是形成酮体，由细胞中浓度决定

16.生物固氮是微生物利用转变成氨的作用

四.是非题

1,编码区的翻译效率彼此不同（）

2,酶的Kcat型抑制剂比Ks型抑制剂专一性更强（）

3,紫外线照射可使DNA互补双链间形成T'T（）

4,一个氨基酸残基就是一个肽单元（）

5,DNA复制需要RNA引物,RNA复制则不需要引物（）

6,蛋白质进化过程中构象是易变的（）

7,由于遗传的密码兼并性，一个氨基酸可以有几种tRNA,但常只有一种氨酰-tRNA合成酶（）

8,蛋白质在热力学上最稳定的构象是自由能最低的结构（）

9,当一种大肠杆菌突变型为DNA聚合酶III的3'-5'外切酶缺陷时,该突变型表现的特征为对紫外线

敏感（）

10,在酸性条件下,DNA分子上的喋吟不稳定,易被水解下来（）

11,严重糖尿病患者因其糖异生作用加强血酮症（）

12,杀鼠药氟乙酸的毒性是由于其抑制了顺乌头酸酶从而阻断了三竣酸循环（）

13,无糖膳食中用含有奇数碳脂肪酸比含有偶数脂肪酸作为食物更好（）

14,高胆固醇血患者因服用B-谷固醇而引起血浆胆固醇水平升高,增加动脉硬化危险（）

15,若amytal和抗霉素A阻断呼吸链的抑制百分数相同，amytal的毒性更大（）

五,分析与计算

1,当谷氨酸C3上标记C14,氨基标记15N,在肝脏中氧化降解，同位素将出现在下列代谢物的哪个原

子上，（1）,琥珀酸，（2）,天冬氨酸，（3）,精氨酸，（4）,尿素

2,今有以下四种蛋白质的混合物：(1)分子量为15,000,pI=10；(2),分子量为62,000,pI=4；(3),分

子量为28,000,pl=8；(4),分子量为9,000,pl=6；若不考虑其它因素,当(A)用CM-纤维素层析柱分

离时，(B)用SephadexG50凝胶层析柱分离时,试写出这些蛋白的洗脱顺序

3,在以下修饰碱基中,何者在形成双链时氢键结合的性质不同于和它相关的普通碱基

(1)2-甲基腺嘿吟⑵5-甲基胞喀咤⑶5-羟甲基胞喀咤(4)1-甲基鸟喋吟

4,假定下面的DNA双链分子是从右向左进行转录,写出RNA转录产物的序列

5'——ATTCGCTTAAGCAA——3'

3'——TAAGCGAATTCGTT——5'

5,某酶制剂的比活力为42单位/mg蛋白质,每ml含12mg蛋白质，

(1)计算1ml反应液中含5u1酶制剂时的反应初速度

(2)若1ml反应液内含5tli酶制剂,在10分钟内消耗底物多少?为保证测定酶的初速度,所需要的

最低底物浓度是多少？

6,有一酶分子使其变性后,用澳化氟降解,在降解产物种得到一个未知氨基酸顺序的九肽,试根据以

下实验结果,推断出此九肽的氨基酸顺序

(1)氨基酸分析表明，它含有Ala,Arg,Cys,Glu,Lys,Met,Pro,Phe2,

(2)用Edman法降解得到一个Pro的衍生物

(3)用胰蛋白酶水解得到一个游离Arg,一个二肽和一个六肽，此六肽在PH6.4时呈电中性状态

(4)用胰凝乳蛋白酶降解得到一个二肽,一个三肽和一个四肽

A,二肽在PH6.4时呈负电荷

B,分析三肽发现里面含有硫

C,在PH6.4时分析四肽，静电荷为+2,在280nm分析表明不含有芳香氨基酸

六.第一题非生化专业，第二题生化专业。

(一)1.如何判明DNA制剂的纯度和是否为天然双链分子

2.如果细菌环状染色体的复制是双向的，并且从固定的复制起点开始，每个复制叉以16um

/min的速度移动，细菌染色体长1280um,完成整个染色体复制所需的时间是多少？当细菌在营养

丰富的培养基中每20分钟分裂一次，也就是说第一轮复制尚未完成就开始第二轮复制，此时染色

体有几个复制叉？

(二)1.利用标记的16SrRNA和未标记的细菌DNA进行分子表明，在饱和时lOOugDNA能结合0.071ug

的16SrRNA(分子量为5.3x10s),该细菌Cell含有2.6x10,道儿顿DNA.试计算每个细菌基因组所含

16SrRNA基因的拷贝数.

2.用琼脂糖凝胶电泳分离制备质粒，分出三条带。请设计实验，判断何者是开环DNA,何者为线形

DNA,何者为闭环环DNA。

参考答案：

、

1.拼接体：也叫剪接体，由mRNA前体及多种其他组分如细胞核小分子RNA(SnRNA)和多种蛋白因

子组成。真核mRNA前体的剪接是在剪接体形成之后进行的。

2.复制子：也叫复制单位。从一个复制起点到一个复制终点所包括的DNA序列。

3.反馈调节：一种作用的结果或起因对这种作用的影响叫反馈，常见的反馈是作用结果对这一作用

的抑制一-负反馈。

4.别构效应：也叫变构效应。酶和蛋白质分子发挥生物活性时具有的一种构象变化，常见于寡聚酶

或蛋白质。由于一个或多个亚基受调节物作用构象改变，进而使其余亚基构象改变，别构效应是可

逆的。

5.抗体酶：具有酶活性的抗体。

1.THF四氢叶酸；2.ddTPP2',3'-双脱氧核甘三磷酸；3.ACTH促肾上腺激素

4.Hbs镰刀形血红蛋白；5.tRNAm蛋氨酸tRNA；6.micRNA干扰mRNA的互补RNA

7.ACP脂酰载体蛋白；8.NADPH还原态尼克酰胺二核甘酸磷酸9.AGo)标准自由能变化；

10.Cotl/2表示复性一半时，DNA单链初始浓度与时间的乘积

--、

1.340nm；2.澳化乙咤；3.改变；4.亚油酸、亚麻酸；5.信号肽、20个、疏水性、N；

6.0-糖昔键，N-糖音键；7.Klenow；8.aBB'o,o,辨认起始点

9.D-环复制,0,滚环复制，双向复制；10.ADP,呼吸控制；ILHMG-CoA还原酶，胆固醇

12.氨甲酰磷酸，天冬氨酸；13.产物抑制，核甘酸的反馈调节，可逆磷酸化的共价调节

14.色氨酸；15.草酰乙酸；16.其体内固氮酶系的作用将分子氮

四、

1.V；2.V；3.X；4.X；5.V；6.X；7.V；8.V；9.X；10.V

11.X；12.V；13.V；14.X；15.V

五、

1.15N出现在尿素中，14C出现在琥珀酸中。

2.CM-纤维素是阳离子交换层析树脂，所以A的顺序为2-4-3-1

当用SephadexG50凝胶时，为分子筛层析，分子量大的先下来，B的顺序是2-3-1-4

3.(4)1-甲基鸟喋吟，鸟嘿吟的第一位引入甲基后，不能和胞嚏咤形成3个氢键了。

4.根据题意，转录模板是上面的那条链，所以RNA转录产物的序列是：

3'-UAAGCGAAUUCGUU-5,

5.(1)5)1含活力单位:5*10-3*42*12=2.52单位，初速度为2.52umol/(ml.min)

(2)10min消耗的底物是10*2.52=25.2umol/mb为保证测定酶的初速度，底物消耗要低于5%,

25.2*1O「7O.05=0.504,所以最低底物浓度为0.504mol/L.

6.(1)由CNBr降解，可知C末端是Met；(2)由Edman法可知N端是Pro；(3)由胰蛋白酶水解

得知C端三肽是Lys-Arg-Met；(4)由胰凝乳蛋白酶可知cC端含有Glu,含有S的氨基酸是Cys,

该四肽的顺序是Tyr-Arg-Glu-Meto所以此肽的顺序是：

Pro-Phe-Ala-Cys-Phe-Lys-Arg-Glu-Met

六、第一■组：

1.(1)可以测定该溶液在260nm和280nm处的光吸收，纯DNA的0D260/0D280=l.8,

(2)可进行碱基含量分析，当为双链时A=T,C=G

2.(1)完成复制所需的时间：1280/32=40min,(2)20/40=0.5,说明前一轮复制一半时，有开始新

一轮的复制，第二轮的起始会有4个复制叉，所以染色体上有6个复制叉。

第二组：

1.0.071/100=X/⑵6*109)X=0.1846*107

16SrRNA拷贝数=0.1846*107/(503*105)=3048

2.一般情况下超螺旋DNA迁移率快，线性DNA其次，开环DNA最慢。

§北京大学1992年攻读硕士学位研究生入学试题生物化学

一.名词解释

1.ribozyme2.衰减子3.第二信使4.酮体5.钠钾离子泵

二.英译汉

1.DHU2.GHS3.cccDNA4.NADP5.GH6.MSH7.cGMP8.LTR9.ATCase10.PRPP

三填空

1.DNA的合成方向,RNA的转录方向,蛋白质合成方向

2.hnRNA经过RNA拼接过程去掉留下

3.原核生物蛋白质合成的起始tRNA是，它携带的氨基酸是而真核生物蛋白质合

成的起始tRNA是,它携带的氨基酸是

4.将重组DNA引入受体细胞这一过程称为

5.tRNA的二级结构呈______形状,它的3'末端为,5'末端为

6.胰岛素受体蛋白存在于

7.胰凝乳蛋白酶的亲和标记试剂为,它作用于酶活性中心的

8.维持蛋白质三级结构最主要的作用是

9.高等动植物含有一个不饱和键的脂肪酸,其双键位置一般在第碳原子之间

10性激素与靶细胞受体结合后,进入细胞核与作用从而调节基因表达

11.维生素D3的活性形式是

12.纤维素和淀粉分子结构的区别在于，纤维素的葡萄糖分子是以连接而成,而淀粉是以

连接而成..

13.在脂肪酸生物合成中,酰基的载体为在脂肪酸氧化中酰基的载体为

14.氨基酸代谢的一碳单位由供给,核甘酸生物合成中的一碳单位由供给.

15.糖酵解过程在细胞的部位进行,TCA循环在细胞的部位进行,氧化磷酸化在细

胞的部位进行.

四是非题

1.激素鸟二醇的原初作用在细胞核（）

2.在细胞培养物由供氧条件转为厌氧条件时葡萄糖利用速度增加（）

3.氟化物引起缺氧是由于抑制底物磷酸化（）

4.细胞液中脂肪酸的合成是需要线粒体产生乙酸，而乙酸是由乙酰辅酶A将它带出线粒体膜（）

5.所有蛋白质的克分子消光系数都是一样的（）

6.促甲状腺激素是由垂体前叶分泌的,含糖基的单链蛋白质（）

7.抑制剂对酶的抑制作用是酶变性失活的结果.（）

8.糖昔键对碱稳定,而易被酸水解.（）

9.限制性内切酶的生物学作用是分解外源DNA（）

10别构酶的动力学曲线特点是都为S型（）

H.DNA是遗传物质,而RNA不是遗传物质（）

12.双螺旋DNA复制后,子代DNA不含亲代成分（）

13.在蛋白质合成中,起始合成时起始tRNA结合核糖体的A位（）

14.每个原核细胞染色体上只有一个复制起点,而每个真核细胞染色体是有多个复制起点.

15原核生物转录启动子有3个重要部位:-10区,-35区,SD序列（）

五.分析计算

1.含有一个九肽，分别用（1）胰蛋白酶（2）胰凝乳蛋白酶（3）竣肽酶（4）澳化氟处理，试标

出对肽链的作用部位LeuMetArgProAluLysTrySenTry

2.一个大肠杆菌中含有106个蛋白分子，假设每个蛋白分子，平均分子量为40000,并且所有分子都

处于a螺旋,试计算大肠杆菌中蛋白质肽链的长度.

3.lug纯酶（分子量为92000）.在最适条件下催化反应速度为0.5umol/min,计算（1）酶的比活力（单

位/蛋白质）（2）转换数

4.请分别指出（l）DNA复制（2）RNA复制（3）蛋白质合成三个过程的忠实性如何保持的

5.用纯化的脂肪酸合成酶进行脂肪酸的合成（1）假设底物乙酰辅酶A的甲基为3H所标记,那么形成

的软脂酸（16:0）中哪些H原子将被3H标记.（2）假设用底物为丙二酰辅酶A,其两个H都被标记呢？

六.附加题

1.E.Coli的一种体外蛋白合成系统中，由多聚核甘酸AUGUUUUUUUUUUUU指导fMETPhePhePhe

Phe合成,在某种抗生素存在下，这个多聚物只能指导合成fMETPhe,试问1,这种抗生素抑制了多肽

合成的那一步.2,设有受抑制的寡肽或二肽，在合成终止时与什么tRNA相连？

2.假定有一只体重为250克的大白鼠,其呼吸强度为500vl02/g体重/小时，请计算24小时能产生

多少克ATP(ATP分子量为507)

参考答案

、

1.核酶：具有酶活性的RNA。

2.衰减子：大肠杆菌色氨酸操纵子中一段DNA序列，既是终止信号，也是调节信号，只有当缺少色

氨酸时，该操纵子中的结构基因才能通过衰减子而进行转录。

3.第二信使：激素和细胞膜受体结合，受体将激素信号通过细胞内的物质如cAMP、cGMP等传递到

细胞内部，信号逐渐放大，引起细胞内反应。这些传递激素信号的物质如cAMP、cGMP称为第二信

使。

4.酮体：乙酰乙酸、8-羟基丁酸和丙酮3种物质的总称，酮体过多会导致中毒。

5.钠钾离子泵：是跨膜转运钠钾离子的膜蛋白，需要ATP,是四聚体蛋白质。

-•、

1.DHU二氢尿喀咤；2.GHS还原型谷胱甘肽；3.cccDNA共价闭合环状DNA

4.NADP尼克酰胺二核甘酸磷酸；5.GH生长激素；6.MSH促黑素细胞激素

7.cGMP环鸟甘酸；8.LTR长末端重复序列

9.ATCase天冬氨酸转氨甲酰酶10.PRPP1'焦磷酸-5'磷酸核糖

--、

1.5'-3'5'-3'N-C；2.内含子，外显子；3.fMet,fMet,tRNAMet,Met

4.转化/转染；5.三叶草，CCA,多数为G；6.细胞质膜；

7.DFP(二异丙基氟磷酸)，Ser残基；8.疏水作用力；9.9〜10；10.染色体

11.1,25-二羟D3；12.0-1,4-糖昔键，a-1,4-糖昔键；13.ACP,CoA-SH；

14.S-腺昔蛋氨酸，四氢叶酸；15.细胞浆，线粒体，线粒体内膜，叶绿体内膜

四、

1.X；2.X；3.X；4,V；5.X；6.X；7.X；8.V；9.V；10.X；

11.X；12.X；13.X；14.V；15.X

五、

1.LeuMet--ArgProAlaLysTyrSerArg

澳化富胰蛋白酶胰蛋白酶胰凝乳蛋白酶竣肽酶B

2.此蛋白质残基数为：4000/110=363.6,以螺旋存在时的长度为：363.6*0.15=54.54nm,106个蛋

白质的总长度为：54.54nm*106=5.5cm

3.已知此酶1ug催化反应速度0.5umol/分,活力单位是0.5U,比活力是0.5U/1ug,

0.5*103U/mg,转换数是0.5/60=0.0083umol/秒。

4.(1)DNA复制的忠实性保持机制是：以母链为模板，通过碱基互补配对合成新的DNA,修复机制

有光修复、切除修复、重组修复等。

(2)RNA合成的忠实性保持机制是：以DNA的一条链为模板，按照碱基互补配对进行转录，顺式作

用元件的作用，转录后加工中酶的作用。

(3)蛋白质合成的忠实性保持机制是：mRNA自身序列的稳定性(mG帽子、poly-A结构等)，密码

子和反密码子通过氢键配对，氨酰-tRNA合成酶的选择性，副密码子的作用，翻译后运输、分泌、

加工中信号肽、导肽及各种酶的作用。

5.(1)脂肪酸从左侧开始，奇数位上的碳原子带有3H.

(2)标记物为00C-C3H2-C0SCoA,合成的软脂酸有14个3H,3H在奇数位上。

第一组

1.（1）抑制多肽合成移位这一步骤。

（2）和Phe-tRNA相连，在肽链合成终止前，肽链和最后一个加入的tRNA相连，当tRNA和肽链分

离后才能离开核糖体。

2.500*250*24*3/（22.4*106）=0.402mol,507*0.402=203.71

§北京大学1998年攻读硕士学位研究生入学试题生物化学

一，填空题（应该是选择题，但是原题没有收录选择项，只有正确答案）。

1,用前三酮试剂确定氨基酸是靠它与下面（）功能集团起作用。

2,影响酶催化效率的因素是（）»

3,在适当条件下，盐酸服变性球蛋白的可逆性，可证明（）。

4,蛋白质中形成肽键平面的原因是（）。

5,三个氨基酸（Asp,Leu,Lys）的混合物，经过一个sulphonotedpolysturene阳离子交换树脂粒，

用PH5的缓冲液洗脱，洗脱液中氨基酸出现的顺序是（）。

6,溶液A的PH为7.0,溶液B的PH为6.0的两个溶液的体积相等，则其H+的含量（）。

7,0.01N醋酸的PH为3.4,0.01NHC1的PH是2,用0.01NNaOH分别去中和15mL的以上醋酸和

盐酸，试问需用（）NaOH。

8,酶活性的国际单位（I.U.）定义为在30。C下，将底物转化为产物，在（）速度时的酶量。

9,在pH5.0的经DEAE-纤维素柱纯化酶，此酶的比活从2.2U/mg提高到303U/mg,表明（）

10,10-5毫克分子的乳酸脱氢酶，每秒催化10微克分子丙酮酸的生成，此酶的turnovernumber是

（）。

H,胰凝乳蛋白酶中电荷延迟系统是指（）。

12,在整体代谢的调节环节调节中，别构效应可调节（）。

13,A因子存在时，一个酶的初速度对底物浓度曲线为S形，而当A因子浓度增高时，此线左移，

说明A因子是（）。

14,一个酶的Km为3X10-5M,Vmax为转化8000克分子底物/分/克分子酶，底物浓度为3X10-5M时，

初速度是（）

15,在一个2底物-2产物酶反应系统中，对其中一个底物的Km值是（）。

16,一氧化碳有毒是因为（）。

17,胶原蛋白的特性是（）。

18,a螺旋与B折叠的区别（）。

19,促进酶分子催化反应的机制是（）。

20,酶可以改变（）。

21,转化丁二酸根为反丁二烯酸根所需要的酶是（）。

22,激素17雌二醇发挥效应的位置在（）o

23,3'-5'cAMP的性质是（）。

24,谷氨酸+丙酮酸=a酮戊二酸+丙氨酸，需要的辅酶为（）。

25,细胞液中脂肪酸的合成需要线粒体产生乙酸，乙酸是由（）带出线粒体膜。

26,氨对哺乳类细胞有害是因为（）o

27,U第一位上N原子来源是（）。

28,嘿吟生物合成关键步骤是（）o

29,当一个蛋白质样品不纯时，要测定它的性质，可用的方法有（）。

30,在同一细胞中，RNA和DNA杂交性质是（）。

31,DNA的Maxam-Gilbert化学法序列分析对底物的要求是（）。

32,单链DNA分子溶液形成双链的复性过程是（）级反应。

33,真核细胞中的RNA聚合酶III负责（）的合成。

34,DNA和RNA的差别在于（）。

35,一个操纵子的启动区产生一个降低的突变后会（）。

36,一个B珠蛋白mRNA的cDNA克隆可以在大肠杆菌中正确的进行肽的生物合成，而染色体基因的

克隆不能，这是因为（）。

37,分析了一个细胞中的蛋白质发现其lie少于正常的情况，这是因为有好多Ue为Vai所代替，

这可能发生了（）突变。

38,大肠杆菌核糖体的性质（）。

39,许多细胞含有一种酶，可以使DNA上少数C甲基化，产生5'-甲基-C,这种甲基化部位成为CG

转变成AG的突变热点，这是因为（）。

40,限制性内切酶的性质（）。

41,DNA生物合成的过程（）。

42,如由5'-脱氧尿喀咤所引起的突变使一种喀咤为另一种喀咤所替换，这种转变叫做（）o

43,假如一个mRNA样品，其G占29%,贝ijC为（）。

44,在大肠杆菌中合成蛋白启始过程（）反应是必需的。

45,遗传密码的兼并性是指（）。

二，填空

1,蛋白质的最低自由能构型经常为残基之间的共价交连而加强。

2,非极性环境中，例如膜的内部，蛋白质可以折叠成侧链向外侧链彼此相互作

用。

3,糖原异生受抑制，被激活。

4,由于调控酶而加速脂肪合成。

5,维生素B12是,它是酶的辅基，其作用是。

6,尿素循环中的调控酶是,存在于中，是此酶的正调节物。

7,由于酶的遗传缺陷使_______在尿中积累，加FeC13使尿变成橄榄色。

8,由于酶的遗传缺陷使在尿中积累,见氧气变成黑色。9,膳食中抑制

酶从而影响胆固醇酯的合成。

三，问题

1,一个激素多肽链有29个氨基酸,顺序为Glu,Vai,Lys,Asn,Cys,Phe,Arg,Trp,Asp,Leu,

Gly,Ser,Leu,Glu,Ala,Thr,Cys,Arg,His,Met,Asp,Gin,Cys,Tyr,Pro,Gly,Glu,Glu,Lys,

a,若没有二硫键存在，胰蛋白酶水解可有几个肽。b,在pH7.5时激素净电荷是多少，若PKa值已知。

c,提出一个设计方案证明上述激素有二硫键。

2,为什么SDS电泳中小分子迁移得最快？

3,如何解释酶活性与PH的变化关系，假如其最大活性在pH=4或pH=ll时，酶活性可能涉及那些

侧链？

4,写出下列生化反应式，并注明催化的酶及辅酶。

a,hydrolysisf,reductionofadoublebond

b,Oxidativedecarboxylation,g,isomerigation

c,phosphorolysish,dehydration

d,nonoxidativedecarboxy1ationi,condensation

e,thiolysisj,phosphorylation

5,胃液大约pH2而分泌H+到胃中，分泌细胞内为pH7,假定H+梯度没有膜电势影响，计算形成梯度

的AG（RT=620卡/mol）。若ATP水解使H+分泌，计算每个ATP水解分泌的H+数目，若ATP水解为

-7.3千卡/克分子，细胞内ATP浓度为10-3M,ADP为10-5M和磷酸为10-3M.

6.T1核糖核酸酶水解一个纯的tRNA,得到一个寡聚核昔酸，再用蛇毒二脂酶水解此寡聚核昔酸，

产生pA,pC,pU和U,其比例是1：2：2：1,仅靠此以及tRNA分子3'端核甘酸序列的知识，请写出

此寡聚核昔酸序列。

7,在设计测定酶活性实验时，希望测得的最初速度对底物浓度的小量波动并不敏感，S/Km应该大

于多少才能使底物浓度有10%差别时，所测得的初速度的误差小于1%?（假定符合米氏公式）

8,你克隆了一个有机体的cDNA基因，并标记此cDNA作为探针。此基因在基因组中只含有一个，

并且基因上无插入序列，也无EcoRI位点。如用此探针去与EcoRI切割的基因组DNAsouthern转

移膜杂交。那么你最可能找到几条放射性条带？如果你把此机体基因组DNA的一个BamHI片段克隆,

并能与你原有的cDNA探针杂交。现在你用这个标记的BamHI片段去与刚才的southern转移膜杂

交，你得到了几条放射性条带。请用图示说明EcoRI和BamHI位点与此基因末端的可能相互关系。

参考答案

一、1.氨基2.温度、pH、底物浓度、酶浓度；3.蛋白质的空间结构是靠次级键维持的；

4.肽键的偏双键性质；5.Asp>Leu>Lys；6.氢离子浓度为10-7和10-6；

7.1分钟转化1微摩尔底物所需的酶量。8.初速度；9.酶的纯度提高了137.7倍；

10.10/0.01=1000微摩尔/秒；11.Aspl02-His57-Serl9512.反应的方向和速度；

13.激活剂；14.4000克分子底物/分/克分子酶；

15.远远小于其底物浓度时，这一双底物反应可以看做单底物反应；

16.一氧化碳可以使细胞色素c和血红蛋白中的二价铁氧化为三价铁

17.耐水解；18.主链的弯曲不同；19.降低活化能；20.反应速度，但不改变平衡点；

21.差向异构酶；22.细胞核中的DNA分子；23.第二信使；24.磷酸毗哆醛；25.柠檬酸；

26.中枢神经系统中毒，机理是头部氨和a-酮戊二酸结合生成谷氨酸，a-酮戊二酸减少，三竣酸

循环减弱，ATP减少，引起脑功能障碍。

27.天冬氨酸；28.第一步反应和次黄口票吟之后的分支反应；29.抗原-抗体亲和反应；

30.DNA的转录过程；31.需要大量的高纯度的末端标记的DNA样品；32.一级反应；

33.5SrRNA、tRNA和多数小分子RNA组成；34.DNA中的核糖变为脱氧核糖，T变成U；

35.导致该操纵子内结构基因的转录速度下降；

36.染色体DNA分子远远大于一个珠蛋白基因，表达载体无法携带大的DNA片段；

37.He密码子的一个碱基发生突变，使lie密码子变成Vai的密码子；38.70S

39.DNA分子中甲基化C在DNA复制时被误当作T,结果新合成链同一位置的G错误变成A；

40.对自身DNA的标记和限制外来DNA的作用。41.DNA的合成过程就是复制过程；

42.替换；43.29%；44.第一个进入肽链的蛋氨酸甲基化；45.密码子的第三位具有摆动性。

-*、

1.半胱氨酸；2.a-螺旋或6-片层，前者更为普遍，疏水侧链朝外，亲水侧链相互作用。

3.ATP,柠檬酸；4.胰岛素，脂肪合成酶；5.钻氨素，甲基丙二酸单酰CoA基团变位；

6.氨基甲酰磷酸合成酶，肝线粒体，乙酰谷氨酸；7.苯丙氨酸4-单加氧酶，苯丙酮酸；

8.尿黑酸氧化酶，尿黑酸；9.胆固醇，3-羟-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶

--、

1.①3个片段，胰蛋白酶水解精氨酸、赖氨酸竣基参与的肽键。

②7个酸性氨基酸，4个碱性氨基酸，全分子静电荷为3-。

③对角线电泳。

2.小分子进入分子筛胶粒内部，SDS电泳时移动速度取决于分子的大小，分子越小移动的速度越快。

3.酶活性和pH的关系在于：首先影响酶活性中心氨基酸残基的R基团的解离状态；其次影响酶的

空间构象。在PH4时酶活性最大，有可能酶的活性中心包含天冬氨酸和谷氨酸；在pHH时酶活性

最大，有可能呢此酶的活性中心包含精氨酸、赖氨酸。

4.写出结构式

a,hydrolysisf,reductionofadoublebond水解反应，比如降解一■个双键

b,Oxidativedecarboxylation,g,isomerigation氧化脱竣，

c,phosphorolysish,dehydration磷酸水解

d,nonoxidativedecarboxylationi,condensation非氧化脱竣

e,thiolysisj,phosphorylation硫解作用

5.

AG=2.303*RT*logl0-2/10-7=2.303*620*5=7130卡/mol,7300/7130=lmol

6.T1核糖核酸酶切割RNA后，产生T-磷酸尿喀咤为末端的单核甘酸或寡核甘酸；

蛇毒磷酸二酯酶切割DNA/RNA,产生5'-单核甘酸

根据题意，所有tRNA3'末端碱基序列是3'-ACC,整体序列为3'-ACCUUU-5,

7.S/Km应该大于50.

8.对于基因组中只有一个基因，且无插入序列和EcoRI位点，此探针与EcoRI切割的基因组DNA进

行Southern转膜杂交，可能找到1条放射性条带。

当用标记的BamHI作为探针与刚才的EcoRI切割的基因组DNA片段进行Southern转膜杂交，由于

此探针和原有的cDNA杂交，说明BamHI片段探针的切点在这一基因序列之内，仍然可以得到1条

放射性条带。

§北京大学1999年攻读硕士学位研究生入学试题生物化学

一.名词解释

米氏常数(Km)磷酸戊糖途径调节子酶辅助因子cori循环与巴斯德效应滚动环复制

—.结构式

TPCK；尼克酰胺；GC配对；IP3

三.填空

1,蔗糖是否为还原糖。

2,糖背键的两种类型________和o

3,DNA的一条链序列为GTCAATG,那么另一条链的序列为。

4,常数表征酶的催化效率。

5,P因子的催化活性是和o

6,常见的遗传缺陷病有,,,；常见的放射性标记的同位素

，，，o

7,DNA复制过程中动物是以为能源，E.Coli以为能源。

8,生物体中产能最多的生化反应过程是=

9,发现TCA循环，发现化学渗透学说。

10,真核生物rRNA拼接过程中左端的拼接点顺序为——右端为切除——结构。

11,生长激素是由_______产生的。

12,E.ColiDNAPolI经酶切，得到大小片段，其中大片段具有酶活性和酶活

性，小片段具有酶活性。

13,必需脂肪酸有和-

四.回答

1，作动力学曲线区分酶的可逆性抑制与不可逆抑制？

2,比较ATP与ppi在磷酸键及生物学功能方面的异同。

3,真核生物至少需要31种tRNA才能识别61种密码子，而线粒体中tRNA只有22种，为什么？

4,阐明衰减子对操纵子的调控。

5,糖酵解和糖异生过程中涉及的不可逆反应和限速步骤。

五.计算

3,DNA半保留复制。15NDNA在14N培养基上培养一代后，14NDNA与14N-15NDNA杂交分子之比是

多少？

4,正常DNA的超螺旋密度为-0.05,在无拓扑异构酶条件下当复制到超螺旋密度为0.07时，由于

正超螺旋的阻力而不能继续复制，求此时的复制百分数。

5,2ADP===ATP+AMP,已知[ADP][AMP][ATP]求：1,该反应的能荷。2,Keq(各浓度为平衡态浓

度)。

6,L=T+W,若a=-0,05,则DNA可以复制的百分比。

参考答案：

、

1.米氏常数：即Km,是酶的特征常数，当反应速度达到最大反应速度一半时底物的浓度。

2.磷酸戊糖途径：糖分解代谢途径之一，6-磷酸葡萄糖首先脱氢、脱竣转变为5-磷酸核糖，经过一

系列分子重排，产生不同的磷酸单糖，进入糖酵解。

3.调节子：受一种调节蛋白控制的几个操纵子构成的调节系统。

4.酶的辅助因子：酶分子中非蛋白质组成成分，包括维生素和无机离子等。

5.cori循环与巴斯德效应：在耗氧的同时葡萄糖消耗减少，乳酸堆积终止的现象称为巴斯德效应。

肌肉厌氧分解产生的乳酸进入血液，经肝脏转变为丙酮酸参与糖异生后再变为葡萄糖，葡萄糖再次

经过血液送回到肌肉的过程。

6.滚动环复制：复制时首先形成共价闭环双链，然后正链切开，产生游离的3'-羟基和5'-磷酸

末端，5,-磷酸末端细胞膜结合固定，DNA聚合酶以环状负链为模板，从正链的3,-羟基末端加入

脱氧核甘酸，使新生链延长，通过滚动合成新的正链。

二、TPCK：尼克酰胺：维生素pp；GC配对：G和C形成3个氢键；IP3：肌醇三磷酸

三、1.不是还原糖；2.N-糖昔键，0-糖昔键；3.3'-CAGTTAC-5'；4.米氏常数；

5.终止转录因子，NTPase活性；6.血友病，苯丙尿酮症，白化病，糖尿病，3H,32P,32S,1311,14C；

7.三磷酸核昔,三磷酸核昔；8.氧化磷酸化;9.Krebs,Mitchell；10.GGAGGG,CUCUCU,内含子；

11.垂体前叶；12.聚合酶，3,-5,外切核酸酶，5,-3,外切核酸酶；

13.亚油酸，亚麻酸

四、

2.ATP和ppi的比较：ATP含有3个磷酸酯键，ppi有一个，ATP末端的2个磷酸酯键水解放出较多

的能量，生物需要能量时ATP水解，ppi为无机物，不具有生物功能。

3.(1)线粒体DNA编码的蛋白质数量少于核基因，大部分线粒体蛋白质是由核基因编码的。

(2)线粒体的遗传密码不同于细胞核。

4.衰减子：大肠杆菌色氨酸操纵子中一段DNA序列，既是终止信号，也是调节信号，只有当缺少

色氨酸时，该操纵子中的结构基因才能通过衰减子而进行转录。

色氨酸操纵子mRNA的前导区编码一个14肽，前导区的RNA以1、2和3、4配对的形式出现，转录

停止在终止信号区，。当环境中缺少色氨酸，前导肽不能形成，但有其他氨基酸时，Trp-tRNA不能

形成，前导肽翻译到色氨酸密码子时候停止，前导区的2、3配对，终止信号不能形成，转录继续。

当色氨酸存在或者过量时，前导肽正常合成，3、4配对，使得核糖体在区段1、2之间结合，转录

终止。

5.糖酵解不可逆有3个步骤：(1)丙酮酸一磷酸烯醇式丙酮酸；

(2)1,6-二磷酸果糖——6-磷酸果糖；(3)6-磷酸葡萄糖一一葡萄糖

五、

3.14N和14N-15N的比值为0：2

4.复制百分数=(0.07+0.05)/0.02=0.024=2.4%

§北师大2000年攻读硕士学位研究生入学试题生物化学

一.名词解释(2/20)

1.亚基；2.酶的必须基团；3.修饰核昔；4.酵解；5.氧化磷酸化

6.DNA的半不连续复制；7.聚合酶链式反应；8.核酸杂交；9.分子伴侣；10.增强子

二.填空（1/20）

1.稳定蛋白质胶体状态的因素是蛋白质分子上的及.

2.氢键有两个主要特征__________和.

3.两条相当伸展的肽链或同一条肽链的两个伸展的片断之间形成氢键的二级结构称为.

4.使酶具有高催化效应的因素有,,和.

5.tRNA的分子3'端的碱基序列是.

6.酵母DNA按摩尔计含有32.8%的T,则A为,G为和C为.

7.真核细胞核小体的组成是和

8.核酸变性后可发生_________效应.

9.破坏a-螺旋结构的氨基酸是

10.与mRNA密码子ACG相对应的tRNA的反密码子是

11.内含子是指

12.有机体的代谢和代谢是密切联系在一起的

13.ATP在细胞的产能和煦能过程中起着重要的作用

14.电子传递链在原核细胞存在于______上,在真核细胞存在于内膜上

15.磷酸果糖激酶是酵解过程最关键的酶

16.TCA循环是生物体内糖，脂,蛋白质代谢的

17.生物体内卵磷脂合成的两种不同途径是和

18.在灵长类动物中,喋吟分解代谢的最终产物是

19.脱氧核甘酸的生物合成是在___________的基础上还原生成的

20.在真核生物中DNA复制的主要酶是

21.酶的磷酸化和脱磷酸化作用是共价修饰调节酶活性的一种重要方式.

22.操纵子包括,和.

23.所有原核生物的终止子在终止点之前均有一个,其产生的RNA可形成.

24.在转录过程中RNA聚合酶全酶的a-因子负责,核心酶负责.

25.DNA拓扑异构酶是与有关的酶

三.问答题（40分）

1,用Imol酸水解五肽,得两个谷氨酸，一个赖氨酸；用胰蛋白酶裂解成两个碎片,在Ph=7时电泳,

碎片之一向阳极,另一个向阴极；碎片之一用DNP水解得DNP-谷氨酸；原五肽用胰蛋白酶裂解产生

两个二肽和一个游离的谷氨酸,写出五肽顺序（5分）

2.简述如何用酶的竞争性抑制剂的理论来寻找或合成控制代谢的药物（5分）

3.什么是遗传学中心法则?为什么说阮病毒的发现是对此法则提出了挑战？（5分）

4.在动物体内脂肪酸能转变成糖吗?为什么？（4分）

5.简述原核生物与真核生物蛋白质合成的区别（6分）

6.简述真核生物的基因表达调控（6分）

7.ImolC6=C714碳不饱和单烯酸彻底氧化分解生成C02和H20共产生多少molATP?（5分）

8.大肠杆菌仅在有充足的丙氨酸提供能量的情况下能存活吗?为什么？

参考答案：

、

1.具有四级结构的蛋白质中的每一个具有三级结构的多肽链。

2.酶活性所必须的氨基酸残基的基团。

3.除了5种正常的核昔酸之外，有些核昔分子发生甲基化、环上原子取代后形成的核普。

4.糖无氧代谢途径，葡萄糖变成丙酮酸，并释放能量合成ATP。

5.是生物储存能量的方式之一，伴随呼吸链上的电子传递给氧并生成水，合成ATP。

6.DNA复制时，前导链的合成是连续的，后随链的合成是先合成冈崎片段，然后在连接酶的作用下

连接成完整的DNA链。

7.以单链DNA为模板，在Taq聚合酶作用下，在引物后快速合成DNA过程。

8.分为DNA-DNA、DNA-RNA二种，不同来源的核酸单链通过碱基互补形成双链的过程。

9.蛋白质折叠过程中协助蛋白质折叠成正确构象的蛋白质或酶。

10.增强子首先发现于真核生物DNA中促进DNA转录的局部序列，属于基因转录的顺式元件。

-•、

1.静电荷、水化层；2.方向性，饱和性；3.0-片层；4.底物和酶的靠近和定向，酶使底物发生形

变，共价催化，酸碱催化;5.3'-ACC-5'；6.32.8%,38.6%,38.6%；

7.DNA,组蛋白；8.增色效应；9.甘、脯氨酸；10.CGA；ll.mRNA翻译后要除去部分在DNA中对应的

序列；12.分解代谢，合成代谢；13.中介作用；14.胞浆，线粒体，叶绿体；

15.调节酶；16.枢纽；17.从头合成，节约利用途径；18.尿酸；19.二核甘酸；

20.DNA聚合酶a；21.高等动物；22.调节基因，结构基因，调节元件；

23.回纹结构，发夹结构；24.识别启动子，合成RNA；25.DNA复制时双链解开

--、

1.赖-赖-谷-精-谷

2.酶的竞争性抑制是抑制剂和底物相似，或者与酶诱导底物形变的结构相似，增大酶的Km。

应用这个原理人们发现磺胺药，磺胺药和维生素BH相似。

3.中心法则：DNA自我复制，转录成RNA,RNA指导翻译蛋白质合成。阮病毒的出现挑战了这个原则,

因为阮病毒是蛋白质发生传染，将正常的蛋白质转变为阮病毒。

4.动物体内脂肪酸不能转变为糖，动物体内不存在乙醛酸循环。正常情况下，乙酰CoA进入三竣酸

循环产生二氧化碳和水。

5.

原核生物真核生物

核糖体70S,转录和翻译同时进行80S,转录和翻译分开

底物20种氨基酸20种氨基酸

搬运tRNAtRNA

模板和起始密码mRNA,AUG,mRNA,AUG

SD-序列无SD-序列，扫描寻找AUG

能量ATP,GTPATP,GTP

起始氨基酸甲酰蛋氨酸蛋氨酸

辅助因子少多

后加工有信号肽有信号肽，多种修饰

6.（1）转录前水平；（2）转录水平；（3）转录后水平；（4）翻译水平；（5）翻译后加工、运输和

分泌等

7.经过6次B氧化，产生7分子乙酰辅酶A,能量为：7*12+6*4-1*1.5-2=104.5

8.能存活，因为丙氨酸脱氨生成丙酮酸，丙酮酸经过三较酸循环产生能量，丙酮酸可以经过转化变

成其他的酮酸，和氨结合后又可以变成其他的氨基酸，供给机体进行代谢。

§北师大2001年攻读硕士学位研究生入学试题生物化学

一.名词解释（20分）

1.蛋白质前体；2.分子病；3.核糖体；4.酶的催化基团；5.核酶

6.顺式作用元件；7.增强子；8.受体；9.分子筛层析；10.PCR

二.填空(30分)

1.血红蛋白与氧结合是通过效应实现的.由组织产生的C02扩散到细胞,从而影响Hb和02

的亲合力,这称为效应

2.赖氨酸带三个可解离基团,它们Pk分别为2.18,8.95,10.53,其等电点为

3.糖肽连接的键是键,而脂质与蛋白质以键结合而成.

4.测定蛋白质中二硫键位置的经典方法是.

5.破坏a-螺旋结构的氨基酸是和

6.蛋白质二级结构和三级结构之间还存在_____和两种组合体

7.DNA变性后,子外吸收能力,黏度

8.tRNA的反密码子为UGC,它识别的密码子为

9.染色体中DNA的构型主要是______型

10.竞争性抑制剂使Vmax,Km.

11.生物氧化主要是通过代谢物反应实现的，生物氧化产生的水是通过

形成的

12.磷酸戊糖途径的生理意义是和

13.糖原合成的关键酶是糖原分解的关键酶是.

14.一分子脂肪酸活化后需经转运才能由胞浆内进入线粒体内氧化,线粒体内的乙酰CoA

需经才能将其带出线粒体参与脂肪酸的合成

15.催化IMP转变为AMP的酶有和

16.DNA复制，引发前体加构成

17.氨酰Trna合成酶既能识别又能识别

三.问答题(50分)

1.某九肽组成为两个Gly,两个Phe,Tyr,Met,Asp,Arg和Pro,经胰凝乳蛋白酶水解得五肽和四肽，

四肽组成为Phe,Tyr,Gly和Pro.此九肽的CNBr处理产物经阳离子交换树脂层析并洗脱得一组成为

Arg,Phe和Gly的三肽.此九肽经胰蛋白酶水解得Phe,如用FDNB反应后在水解测得DNP-Tyr.请写出

此九肽顺序及解析过程(6分)

2.简述血红蛋白的结构及其结构与功能的关系(6分)

3.简述酶活性的的调节方式有那些？(6)

4.简述tRNA的结构特征及其作用与作用机制(6)

5