DB11 T 150.2-2002 奶牛饲养管理技术规范第2部分 繁殖

奶牛饲养管理技术规范第2部分：繁殖北京市质量技术监督局发布I前言 Ⅱ 12规范性引用文件 13术语和定义 14人工授精 34.1种公牛 34.1.1对种公牛的基本要求 34.1.2种公牛的营养 34.1.3种公牛生殖器官的检查 34.1.4种公牛的保健 44.1.5采精 44.1.6精液冷冻 44.1.7精液质量标准 44.2母牛 44.2.1繁殖指标 44.2.2发情和发情鉴定 54.2.3配种 54.2.4妊娠和妊娠诊断 64.2.5繁殖障碍牛的管理 64.2.6产科管理 64.2.7记录 75胚胎移植 75.1供体牛的选择标准 75.2超数排卵 85.3胚胎的冷冻保存与解冻 85.4受体牛的选择与准备 5.6胚胎移植记录 附录A(规范性附录)繁殖指标计算方法 附录B(规范性附录)人工授精记录表格 附录C(规范性附录)胚胎移植记录表格 18IDB11/T150《奶牛饲养管理技术规范》为北京市地方系列标准。本标准分为四个部分：—第1部分：育种；——第2部分：繁殖；——第3部分：饲养与饲料；——第4部分：卫生保健。本部分为DB11/T150的第2部分。DB11/T150的本部分依据的主要文件和参考文献：《北京奶牛场管理与技术规范》(1990年)、GB4143-1984《牛冷冻精液》、《畜牧名词术语标准》(中华人民共和国农牧渔业部畜牧局组织编写、农业出版社出版，1987年)、中国奶牛协会《奶牛繁殖技术管理规范》(1993年)。本部分的附录A、附录B、附录C为规范性附录。本部分由北京三元集团总公司提出。本部分由北京市质量技术监督信息研究所归口。本部分起草单位：北京奶牛中心。本部分主要起草人：于德洪、吕奇、张晓霞、宣柏华、张新慧。1奶牛饲养管理技术规范第2部分：繁殖修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究2形精子比例如超过一定限度，就会降低受胎率。牛畸形精子不低于40%。指未经配种母畜，两次发情间隔的天数。母牛的平均发情周期为21天。3受精卵移植指将供体母畜体内、外生产的胚胎移植到受体母畜子宫角内，使其继续发育成正常个体的一项繁殖技术。胚胎移植的一个重要技术环节。指在一定时期，给母畜注射(或施用)某种激素类药物，使卵巢有更多的成熟卵泡，排出更多的卵子的技术。指在胚胎移植中，提供胚胎或卵母细胞的母畜。一般选用生产性能较高或具有某种遗传特性，体质健康，繁殖机能正常的母畜作供体。指接受移植胚胎的母畜。一般选用生产性能较低，但健康并繁殖机能正常的母畜作受体。4人工授精4.1种公牛4.1.1对种公牛的基本要求4.1.1.1种公牛系谱至少三代清楚，并经后裔测定或其他方法证明为良种者。4.1.1.2种公牛必须体质健壮，生殖器官(睾丸、副性腺、交媾器官等)发育正常，无繁殖障碍和法规规定的传染病。4.1.1.3全年冻精合格率不低于60%,年生产量不低于1万个剂量。4.1.1.4年第一次授精的情期受胎率不低于55%(至少需要100头牛的输精数据)。4.1.2种公牛的营养4.1.2.1按种公牛的发育阶段和营养需要做好日粮配合。4.1.2.2犊种公牛哺乳期不少于4个月，哺乳量不低于600kg。4.1.2.3初情期阶段蛋白质给量一般应高于成年公牛需要量的10%。4.1.2.4性成熟阶段蛋白质给量一般应高于成年公牛需要量的5%。4.1.3种公牛生殖器官的检查4.1.3.1对生殖器官应进行全面检查，包括睾丸形态、大小、质地以及副睾、副性腺等。4.1.3.2检查时间和次数青年牛在首次采精前检查一次，成年公牛每年检查一次。4.1.3.3在检查中发现异常问题时要及时查明原因并酌情进行治疗或淘汰。4.1.4种公牛的保健4.1.4.1每年定期两次检疫，平时做好防疫卫生保健和安全工作。44.1.4.2必须保证种公牛每天有适量的运动，做好护蹄、修蹄工作。4.1.4.3平时注意对种公牛生殖器官的护理，防止各种因素造成的伤害。4.1.5.1开始采精年龄不得低于14月龄，体重不得低于400kg。4.1.5.2采精场所必须整洁、防尘、防滑和地面平坦，并设有采精垫和安全栏。4.1.5.3成年公牛采精一般每周不得超过2次，每次不得超过2回，采精前做到空爬1次～2次。4.1.5.4做好采精牛平时的阴毛修剪和采精时的包皮清洗、消毒以及公牛后躯的卫生工作。4.1.5.5所有采精器具每次使用前均需严格消毒，未经消毒不得重复使用，采精时要求假阴道温度在37℃~40℃,松紧适宜，润滑剂涂抹深度不得超过二分之一。4.1.5.6采精时要做到人牛固定，操作不得粗暴，要胆大心细，充分掌握公牛个体习性，做到诱导采精。由公牛将阴茎自行伸入假阴道，射精后随公牛下落，让阴茎慢慢回缩，自动脱落。精液冷冻遵照GB4143。4.1.7精液质量标准精液质量标准见表1。表1精液质量标准冷冻精液(解冻后)——%万个/ml%%精子在37℃下存活时间小时个亿个/ml4.2.1.1年总受胎率≥95%。4.2.1.2年情期受胎率≥58%。4.2.1.3年空怀率≤5%。4.2.1.4年综合受胎指数≥0.55。54.2.1.7产后第一次配种受胎率≥65%。4.2.1.8胎间距≤385天。4.2.1.9初产月龄≤30月龄。4.2.1.10产犊后50天内出现第一次发情的母牛比率≥80%。4.2.1.12产后第一次配种的平均天数在70天～90天之间。4.2.1.13配种三次以下(含三次)即孕母牛比率≥94%。4.2.1.15母牛每受孕一次的平均精液耗量≤3个剂量。4.2.2发情和发情鉴定4.2.2.1对逾15月龄未见初情的育成母牛，须进行母畜科和营养学检查。4.2.2.2发情鉴定采用观察法，每天不少于3次~4次，主要观察母牛是否接受其他母牛爬跨、粘液4.2.3.1育成母牛16月龄~17月龄、体重达380kg开始配种。4.2.3.2成年母牛产后应有60天的休整期，第一次配种应在休整期以后。4.2.3.3配前要进行母畜科检查，对患有生殖疾病的牛只不予配种，应及时治疗。4.2.3.4.1细管冻精用38℃±2℃温水直接浸泡解冻。4.2.3.4.2颗粒冻精用38℃±2℃,1.5ml解冻液解冻，每次解冻一粒，多于两粒时，应分别解冻。4.2.3.4.3解冻液配制a)二水柠檬酸钠2.9g、双蒸馏水100ml。b)二水柠檬酸钠1.0g、蔗糖4.0g、乙二胺乙酸二钠0.1g、双蒸馏水100ml。细管精液≤1小时，颗粒精液≤1小时。若需外运，应该采用4.2.3.4.3中列项b),解冻后用塑料袋包装在4℃~5℃贮存，存放时间≤6小时。4.2.3.6输精前应进行精液品质检查，符合4.1.7所列质量标准方可输精。64.2.3.7采用直肠把握法输精。输精时机掌握在发情中、后期。一个发情期输精1次~2次，每次用14.2.3.8用卡苏枪或玻璃输精器输精。玻璃输精器每牛每次一支，不经消毒不得重复使用，用毕要及时清洗干净，放入干燥箱内经170℃消毒2小时。4.2.3.9配种全过程要保证无污染操作。4.2.4妊娠和妊娠诊断4.2.4.1母牛输精后进行两次妊娠诊断，第一次在配后2个月～3个月，第二次在停奶前。4.2.4.2妊娠诊断采用直肠检查法、腹壁触诊法、超声诊断法等。4.2.4.3对妊娠母牛要加强饲养管理，做好保胎工作。4.2.5繁殖障碍牛的管理4.2.5.1对产后60天未发情的牛只、发情间隔在40天以上的未配牛只、妊检发现的未妊牛只，要查明原因，进行诱导发情或对症处理。4.2.5.2对输精两次以上仍未妊的牛只，要进行母畜科检查，发现病症及时处理。4.2.5.3对产后半年以上的未妊成母牛和24月龄以上的未妊青年牛要组织会诊。4.2.5.4对早期胚胎死亡、流产、早产的牛只，要分析原因，必要时进行流行病学调查。对传染性流产要采取相应的卫生、防疫措施。4.2.6产科管理4.2.6.1.1分娩母牛在预产期前15天进产房，产后15天左右出产房。产房每周消毒一次，产床(或产间)每天消毒一次，并经常更换垫草，防止生殖道感染。4.2.6.1.2母牛应以自然分娩为主，需要接产或助产时应严格按产科要求进行。4.2.6.1.3对产后母牛要加强饲养管理，促进母牛生殖机能恢复。4.2.6.2产后的一般监护4.2.6.2.1产后6小时内，观察母牛产道有无损伤，发现损伤要及时处理。产后12小时内观察母牛的努责状态。母牛努责强烈时，要注意子宫内是否还有胎儿和有无子宫脱征兆，发现子宫脱要及时处置。4.2.6.2.2产后三天内，观察胎衣排出情况及产道和外阴部有无感染。同时观察母牛有无生产瘫痪症状，发现有此症状时要及时诊治。4.2.6.2.3产后7天内，监视恶露。一旦发现恶露异常或急性炎症表现要立即诊治。4.2.6.2.4产后14天，进行第一次产科检查。主要检查阴道粘液的洁净程度。发现粘液不洁时，严重的进行治疗，较轻微的可先行记录，暂不处理。4.2.6.2.5产后30天~35天，进行第二次产科检查，主要通过直肠检查子宫恢复程度和卵巢机能状况，同时对第一次检查做先行记录的牛只进行复查。此次检查发现的子宫疾病，不论轻重均要治疗。4.2.6.2.6产后50天~60天，对一检、二检的治疗牛只进行复查，如未愈，继续治疗。对卵巢静止或发情不明显的牛只，通过诱导发情方法催情。74.2.6.3.1产后5小时胎衣仍未下时，需进行处理。处理方法：肌注催产素或前列腺素。4.2.6.3.2产后24小时胎衣仍未下时，行手术剥离或保守疗法。4.2.6.3.3胎衣脱落后检查胎膜是否完整，尤其要注意对空角尖端的检查。如发现有部分绒毛膜或尿用4%苛性钠液2ml,取等量子宫粘液混合于试管内加热至沸点，冷却产后2周内。牛群产后子宫隐性感染率<30%。b)体积和形状：子宫体积不再缩小，两角基本对称，间沟明显，宫缩反应灵敏；c)子宫供血：恢复正常(无明显特异性搏动)。产后30天～35天进行第一次检查。产后6周进行复查。4.2.6.5.4子宫复旧的正常时间范围为4周~6周。4.2.7.1对母牛的发情、配种、妊检、产犊(包括流产)等情况需用专门的表格给予记录。表格格式见附录B。4.2.7.2牛场应根据产后监控内容设立母牛产后监控卡，把产后监控作为技术管理的一项常规措施。产后监控卡格式见附录B。5.1.1遗传性能优良，其质量标准见表2。8预期传递力(PTA)%%%%5.2.1.1两次超排的间隔天数为70天~90天；5.2.1.2连续超排4次~5次后，应自身妊娠一次；采用FSH和氯前列烯醇(以下简称PG)注射程序。5.2.2.1FSH的总剂量为9.0mg~9.8mg,于供体牛发情周期的9天~13天开始剂量递减注射，注射期为4.5天，每日上、下午各一次，共9次。5.2.2.2PG的总剂量为1.0mg,于注射FSH的第三天分二次注射，上午0.6mg,下午0.4mg。5.2.3.1供体牛发情后精，第二天上午进行第二次输精。输精剂量为通常的2倍~3倍。两次输精应使用同一头公牛的精液。5.2.3.2在注射PG前开始发情的，应立即停止注射FSH,不要配种。5.2.3.3在注射PG后不到30小时发情的，应在发情后停止注射FSH并配种。5.2.3.4对迟于PG注射后56小时发情的，应按方案注射完药物，等待发情后输精。5.2.4.1供体牛超排发情后的第7天用二路或三路式采卵管进行非手术采卵。冲卵液总量为1000ml,每测子宫角各500ml。5.2.4.2为保证供体牛安静，便于操作，采卵前需注射静松灵1ml～1.5ml。5.2.4.3先冲超排效果较好的一侧子宫角，后冲另一侧子宫角。量为18ml～20ml。5.2.4.6冲卵时，进液速度应慢，出液速度应快；先少量进液，再逐渐加大进液量，每次进液量范围在30ml~50ml之间。要防止冲卵液的丢失。95.2.4.7采卵后，供体牛应肌注PG0.4mg~0.6mg,子宫灌注抗菌素。把集卵杯内的回收液在室温18℃~22℃下静置20分钟~30分钟，然后将上清液通过集卵漏斗慢慢清除，最后集卵杯内剩下30ml~50ml回收液，摇动集卵杯将其倒入100mm培养皿内。用PBS液冲洗集卵杯壁2次~3次，清洗液倒入集卵漏斗。另一侧子宫角回收液做同样处理。集卵漏斗最后保留的20ml左右液体倒入另一Ø100mm培养皿中。上述培养皿待镜检。a)桑椹胚(M):卵裂球隐约可见，细胞团体积几乎占满卵周间隙。b)致密桑椹胚(CM):卵裂球进一步分裂，看不清细胞之间的界线，细胞团收缩变紧，占卵周间隙的60%-70%。c)早期囊胚(EB):出现透亮的囊胚腔，此时的滋养层和内细胞团尚难于区分，细胞团占卵周间隙的70%-80%。d)囊胚(BL):囊胚腔扩大，滋养层细胞分离，细胞团充满卵周间隙。e)扩张囊胚(EXB):囊胚腔充分扩张，体积增至1.2倍~1.5倍，透明带变薄，相当于原厚度的各级胚胎的标准见表3。5.2.6.4对于较难判定的胚胎，可以在体外培养4小时～6小时后，观察胚胎的发育能力，以此来判胚胎形态完整，处于正常的发育阶段，外形匀称，胚胞呈球形。分裂球大小均匀，结构紧凑，透明度适中，没有或有少量游离细胞(少于10%发育稍缓慢，胚胎有小的破损，有少量游离细胞(少于20%),内细胞团完发育迟缓1~2天，卵裂球大小不均匀，透明度变化明显(太明或太暗),胚胞破损较大(大于30%,小于50%),细胞连结不够紧密，但胚胞仍呈球形，有明显的细胞团结发育迟缓(2天以上),比C级胚胎的缺损更大。未受精a)保存液：含有0.4%牛血清蛋白的PBS液。c)1.5M乙二醇冷冻液(含0.1M蔗糖):用保存液配制。注：溶液在使用时，先用细菌滤器过滤。a)用10%甘油/保存液做冷冻剂胚胎→保存液洗10次→10%甘油/保存液→装管约15分钟~20分钟→冷冻仪(-6.0℃)→-6.0℃平衡5分钟→植冰(7秒～10秒)→继续平衡5分种→以(0.4℃~0.6℃)/分钟的速率下降→-32℃→平衡5分钟→投入液氮。b)用M乙二醇(含0.1M蔗糖)/保存液做冷冻剂胚胎→保存液洗10次→1.5M乙二醇/保存液→装管约15分钟~20分钟→冷冻仪(-7.0℃)→在-7.0℃平衡5分钟→植冰(7秒~10秒)→继续平衡5分钟→以(0.4℃~0.6℃)/分的速率下降→-35℃→平衡5分种→投入液氮。a)保存液：含0.4%牛血清白蛋白的PBS液；装胚细管→空气浴(18℃~25℃)10秒→32℃水浴10秒→揩干细管→剪去细管塞→推出胚胎→解冻液4分钟→保存液，冲洗5次～6次→镜检→装管→细管装入移植枪→移植(胚胎解冻后30分钟~45分钟内移入受体)。b)1.5M乙二醇/保存液(含0.1蔗糖)冷冻胚胎的解冻(直接解冻移植法):装胚细管→32℃水浴10秒→揩干细管→用70%酒精棉球擦拭细管，晾干→剪去细管塞→把细管装入移植枪→移植(胚胎解冻后5分～8分钟内移入受体)。5.4.1.2身体健康，营养状况正常，没有全身或生殖器官感染，5.4.1.418月龄～21月龄、体重380kg~400kg的青年牛或成年母牛。采用自然发情的受体牛时，受体牛的数量应按供体牛的5倍准备。若没有足够数量的同期受体牛，可用PG或孕激素阴道栓对备用受体牛进行同期发情处胚胎移植时，为了达到最佳的受胎结果，优良胚胎应该移植给具有优良黄体的受体。5.5.2.1受体牛自处理的前三周至移植后的一个月内，都不应受到应激作用(如：改变饲料、免疫接种，驱虫等)。清洗消毒外阴，扒开外阴唇→插入移植器至子宫颈外口→一只手进直肠，采用直肠把握法导入移植器→过子宫颈→至移植侧子宫角(黄体侧)→至移植部位(小弯或稍后)→慢慢推出胚胎→移植器退回0.5cm,转一下移植器(防止胚胎丢失)→退出移植器。注意整个操作，手法要轻缓。门的记录表详细记录。记录表见附录C。繁殖指标计算方法A.1年总受胎率指年内受胎母牛总数与受配母牛总数的百分比。A.2年情期受胎率指年内受胎母牛总数与受配情期总数的百分比。指年内平均空怀头数与平均饲养头数的百分比。注：年平均空怀头数的计算方法为：年内年满18月龄以上母牛的总空怀天数除以365。年平均饲养头数的计算方法为：年内年满18月龄以上母牛的总饲养日数除以365。A.4年综合受胎指数是以总受胎率、情期受胎率、空怀率为基础数据的牛群繁殖力综合指标。式中所得Q值越大，表示总体受胎水平越高。A.5年漏情率指年内大于正常发情周期天数一倍以上的发情周期期数占总发情周期期数的百分比。A.6初配受胎率指青年母牛首次配种的受胎率。A.7产后第一次配种受胎率指成年母牛产后第一配种情期的受胎率。指牛群中全部母牛两次产犊之间的平均间隔天数。∑胎间距一参加统计母牛两次产犊之间间隔天数的总和A.9初产月龄指牛群中全部青年母牛首次产犊的平均年龄，即由青年牛转为成母牛的平均年龄。A.10产犊后50天内出现第一次发情的母牛比率指成母牛群中产后50天内出现发情母牛占同期分娩母牛的百分比。指全群母牛出现的发情周期总数中，属于18天~24天正常发情周期所占的百分比。A.12产后第一次配种的平均天数指分娩日(0天)到产后首次配种日的平均间隔天数。A.13配种三次以下即孕母牛比率指全群母牛在三个受配情期以下(含三个情期)即配孕的母牛占同期所有参加配种母牛的百分比。指年内产后半年以