微生物检验理论课 18支原体 学习资料

支原体

（Mycoplasma）

南方医科大学第三附属医院检验科陈佑明电话62784781

邮箱cym38432@163.com教学内容与要求支原体的生物学概念与生物学特性支原体的分类支原体对人致病的主要疾病支原体感染患者的标本采集及微生物检验支原体和L型细菌的区别支原体定义：是一类缺乏细胞壁、呈高度多形性、介于细菌与病毒之间、能通过除菌滤器、在无生命培养基中能生长繁殖的最小原核细胞型微生物。生物学特点能在人工培养基中生长能独立生活最小的原核细胞型微生物无细胞壁二分裂繁殖多形态性，“油煎蛋样”菌落

分类

原核生物界（Procaryotae）

硬壁菌门(Firmicutes)

柔膜体纲(Mollicutes)

支原体目

(Mycoplsmatales)支原体科（Mycoplasmataceae)支原体属(Mycoplasma)脲原体属(Ureaplasma)所致疾病：原发性非典型肺炎

非淋球菌性尿道炎等血虫体属(Eperythrozoon)血巴尔通氏体属(Haemobartonella)人类支原体的常见栖居场所和致病性种类栖居场所致病性

口咽部泌尿生殖道唾液支原体+-_口腔支原体+-_颊支原体+-_咽支原体+-_嗜脂支原体+-_肺炎支原体+-+人型支原体+++生殖道支原体±++发酵支原体++±灵长支原体_+_嗜精子支原体-+_渗透支原体-+±解脲脲原体++＋莱氏无胆甾原体+-_目无胆甾原体?-_支原体与细菌L型比较性状支原体细菌L型滤过性有有细胞壁无无油煎蛋状菌落形成形成对青霉素抵抗抵抗对胆固醇需要生长需要不一定需要来源自然界、人与动物由细菌在环境条件下诱导形成回复变成细菌不能能遗传性与细菌无关与原细菌相同人类支原体的生化反应支原体需要胆固醇分解葡萄糖水解还原四氮唑吸附血细胞精氨酸尿素发酵支原体+++———肺炎支原体++——++解脲脲原体+——+—+人型支原体+—+———唾液支原体+—+———穿通支原体+++—？+生殖支原体++———+一、肺炎支原体形态与结构

大小:可通过滤器,光镜下可观察细胞壁:无形态:球形、球杆形、分枝丝状或念珠状等细胞膜:三层:1.蛋白质2.脂质(胆固醇较多)

3.蛋白质染色:姬姆萨染色法:淡紫色或蓝色核酸:二种(DNA和RNA)生长繁殖繁殖方式:

二分裂方式球体延伸、分节断裂、出芽、分枝繁殖周期:3小时营养要求:较高,含动物血清、酵母浸液酸碱度:pH7.8～8．0气体环境:5％CO2温度与时间:35℃,2d～3d菌落特征:“油煎蛋”状菌落抗原构造主要抗原成分:1.蛋白质

P1蛋白抗原:表面抗原致病:粘附2.脂质中的糖脂抗体:产生补体结合抗体生长抑制抗体代谢抑制抗体抵抗力理化因素:比细菌敏感(因无细胞壁)热:弱,50℃经30min死亡－20℃可长期保存耐碱酸和有机溶剂:较敏感(消毒剂、清洁剂)四环素族、红霉素、卡那霉素、氯霉素:敏感青霉素、头孢菌素:不敏感致病性外源性感染上呼吸道感染:感冒、咽炎、气管炎支原体性肺炎原发性非典型肺炎世界各地,密集人群,儿童及青少年多见秋冬季发病率高,每隔3～5年出现一次流行飞沫传播潜伏期2W～3W,感染起病缓慢临床主要症状:发热（约39℃）、头痛、持续性顽固咳嗽、胸痛等。病人带菌、排菌状态可持续6W～8W肺外合并症（神经系统、消化系统及心脏等）发病率高，严重者可致死致病性:粘附是先决条件也和超敏反应有关(共同抗原)免疫性抗体：多种(CF抗体、生长抑制抗体、杀支原体抗体等)

呼吸道sIgA:有一定作用非特异冷凝集素:

1.和自身免疫有关

2.患者阳性率为50％常用于辅助诊断病原菌分离特异核酸的检测血清学诊断抗原检测冷凝集试验

微生物检测方法病原菌分离标本：咽拭子或痰液培养基：双相培养基（含马血清、酵母浸液）

SP-4培养基（提高分离率30％～40％）气体环境：5％～10％CO2温度与时间：35℃，l～2W可疑菌落：

1.糖发酵2.溶血性3.血细胞吸附4.特异抗血清生长抑制试验和代谢抑制试验

病原菌分离标本：咽拭子或痰液培养基：液体显色培养基+药敏一体化气体环境：普通温度与时间：37℃，24-72小时特异性核酸的检测（1）聚合酶链反应(PCR)：优点：特异性好、敏感性高、快速、简便。（2）基因探针特异性强，敏感性不如PCR技术。血清学诊断（1）补体结合试验（CFT）：（2）间接血凝试验（IHA）：

明胶颗粒凝集试验（MPPA）（3）酶联免疫吸附试验(ELISA)：（4）间接免疫荧光试验（IFA）：抗原检测

方法1:间接法或直接法方法2:双抗体夹心酶联免疫吸附试验方法3:酶联免疫吸附试验捕获法方法4：免疫层析法方法5：免疫荧光法

冷凝集试验辅助诊断非典型肺炎针对红细胞膜Ⅰ抗原冷凝集素属IgM5d～10d出现，2W～3W高峰辅助诊断效价:64～128倍以上

双份效价升高4倍以上特异性和敏感性较低防冶药物:四环素类(近年来耐药性增加)

大环内酯类:首选

(红霉素、克拉霉素、阿奇霉素)

喹诺酮类疫苗:减毒活疫苗基因工程疫苗二、泌尿生殖道支原体种类：

人型支原体、生殖道支原体、解脲脲原体传播途径：

性传播

垂直传播所致疾病：

非淋病性尿道炎

早产、流产解脲脲原体生物学性状形态:球形、球杆状、杆型及长丝形染色:革兰染色阴性，姬姆萨染色呈紫蓝色温度、酸碱度和时间:35℃,pH6.3，2d～3d菌落:细小(10μm～40μm),油煎蛋样菌落

（显微镜低倍镜观察）抗生素敏感性:

敏感:四环素类、大环内脂类、林可霉素类及喹诺酮类不敏感:青霉素生化特性:水解尿素产氨致病性存在:人和动物的口腔、呼吸道、泌尿生殖道血清型:解脲脲原体(Uu)有16个血清型传播途径:性接触传播、母婴传播所致疾病(STD)泌尿生殖道感染:NGU、盆腔感染、宫颈炎、阴道炎、输卵管炎、慢性前列腺炎、附睾炎、男女不孕症、反复流产、早产、死胎新生儿疾病:呼吸道病变、肺炎、脑膜炎解脲支原体、人型支原体标本的采集：分泌物、精液、中段尿等。分离培养：培养基：基本同肺炎支原体，培养基含0.05%尿素（精氨酸）、酚红等。

pH：6.3培养条件：35℃，有氧条件下生长良好。培养时间：24～48h检验程序：液体—固体二步培养法标本液体培养基（黄色，37℃，Uu8—24小时,Mh1～3d）液体澄清透亮变红0.1ml转种于固体培养基（37℃，5%CO2Uu1--3天,Mh3～7天）肉眼观察无菌落(人型支原体菌落较大），培养基变红低倍镜下观察（油煎蛋或颗粒样菌落）。

解脲脲原体：棕色或深棕色“海胆”样菌落

人型支原体：浅黄色“油煎蛋”样菌落多功能超高倍显微镜分析仪MDI◆是一种综合相差对比、暗视野及偏振光的可变投影显微镜，是在高清晰度的情况下连续放大40～