生物化学实验 生化实验操作考核要点（新） 学习资料

【实验操作考核要点】一、目的要求1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。5．正确掌握溶液转移的操作。6．正确操作使用分光光度计。二、操作考核内容按百分制计。1．吸量管操作（20分）；2．可调式微量移液器操作（20分）；3．溶液混匀操作（视具体情况，采用合适的混匀方法）（15分）；4．溶液转移操作（10分）；5．分光光度计比色操作（25分）。6．整体表现（10分）。三、操作考核标准（一）吸量管操作（20分，每项操作5分）1．执管要求右手拿吸量管，左手拿橡皮球，只能用食指而不能用拇指按压吸量管上口来调节吸取液量的刻度；吸液、排液整个操作过程吸量管应始终保持垂直。2．坐姿要求腰、背保持竖直，看刻度时眼睛保持平视。3．吸取溶液吸量管插入液面深度约0.5cm，不能一插到底，也不能插入过浅而吸进空气致使溶液进入橡皮球内；调控吸量管吸取液量的刻度时，吸量管尖应离开液面靠在容器内壁上。4．排出液体吸量管尖应靠上受纳容器内壁，让管内溶液自然流出。不能用橡皮球吹压，而且在流净后吸量管尖停靠受纳容器内壁至少3秒。（二）可调式微量移液器操作（20分，每项操作5分）1．设定容量值转动加样器的调节旋钮，反时针方向转动旋钮，可提高设定取液量。顺时针方向转动旋钮，可降低设定取液量。在调整设定移液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意使取液器显示的数值不超过其可调范围。2．吸液（1）选择合适的吸头安放在取液套筒上，稍加扭转压紧吸嘴使之与套筒之间无空气间隙；（2）把按钮压至第一停点，垂直握持加样器,使吸头浸入液面下2~3毫米处,然后缓慢平稳地松开按钮，吸入液体，等一秒钟，然后将吸头提离液面，贴壁停留2-3秒，使管尖外侧的液滴滑落。3．放液（1）将吸头口贴到容器内壁底部并保持100°~40°倾斜；（2）平稳地把按钮压到第一停点，等一秒钟后再把按钮压到第二停点以排出剩余液体；（3）压住按钮，同时提起加样器，使吸头贴容器壁擦过，再松开按钮。按吸头弹射器除去吸头。4．压放按钮时保持平稳；加样器不得倒转；吸头中有液体时不可将加样器平放。取液器吸嘴为一次性使用。实验完毕，将取液器读数调至最大量程值，竖立放于支架上。（三）溶液的混匀（操作流程中下划实线的三处，每项操作5分，共15分）1．肝糖原的提取与鉴定操作中，肝匀浆上清液中加5ml95%乙醇后的混匀最好用倾倒混匀，也可用滴管或吸量管吸、吹混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。2．肝糖原定量测定中，肝组织消化液沸水浴后全部转入100ml容量瓶，加水至刻线后的混匀应采用倒转混匀。3．肝糖原定量测定中，加蒽酮溶液后的混匀，可将试管倾斜约45º再作旋转混匀。因蒽酮溶液（浓硫酸配制）比重大于样品水溶液很多，一加入便沉于管底（加试剂的顺序一定不能颠倒），不倾斜试管旋转混匀不了。（四）溶液的转移（操作流程中下划波纹线的两处，每项操作5分，共10分）1．在研钵中研磨后的肝匀浆转入试管离心可用滴管或取液器吸取转移，如果采用倒入，不能洒落管外，应尽量转移干净。2．肝组织沸水浴后的消化液转入100ml容量瓶前应冷却；转入时用玻璃棒引入，玻璃棒头插入容量瓶靠瓶颈磨口下约1cm处，玻璃棒上端不要靠上瓶口边沿，引入时试管口靠玻璃棒的位置靠近容量瓶口，不要离开瓶口太高，以免消化液沾染玻璃棒较长；转入过程中，溶液不要沾染到容量瓶磨砂口上，更不能滴洒到容量瓶外面；应用蒸馏水洗消化管3遍以上，洗液一并全部转入容量瓶。（五）分光光度计的操作（25分）1．波长选择，仪器调零，灵敏度挡选择等操作正确（5分）。2．溶液转移到比色杯操作（10分）手接触比色杯毛面；倒液量不超过比色杯体积的2/3；比色溶液不能洒落在色杯外或试管外；溅出比色杯外液体的擦拭；空白液、标准液、待测液的放置顺序；不能在仪器上方倒液。3．比色操作（5分）：盖盖；调透光度；空白调零；测定（拉杆、记录）。4．比色后操作（5分）：比色杯溶液的倒出；比色杯清洗。（六）整体表现（10分）1．小组分工协作有序，不忙乱。2．实验结束后实验台面的整理：器材按要求清洗干净、器材与试剂瓶归回原位和台面卫生整洁。四、实验报告结果要求1．肝糖原的提取、鉴定鉴定方法①和鉴定方法②中最后的“呈色对比”和“观察颜色变化”，结果一定要明确表达是“有变化”或“没有变化”，有变化的话还要具体写出变成什么颜色了。而且要作出明确结论：“有糖原”或“没有糖原”，如果颜色转变成红色不很明显，可以写“有少量糖原”、“有极少量糖原”或“有微量糖原”等，但不能写“可能有少量糖原”、“可能有极少量糖原”或“可能有微量糖原”等带“可能”的结论。在这里结论“没有糖原”不是说绝对没有糖原，而只是说用这种鉴定方法鉴定不出有糖原的存在。2．肝糖原的定量测定测定数据应记入结果栏内，计算过程应先写出计算公式，再代入测定数据进行计算，结果保留小数点后3位。如果是直接列式计算，