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植物提取物中原花青素的测定紫外/可见分光光度法2019-05-01实施2019-05-01实施天津市市场监督管理委员会发布I本标准依据GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由天津市农业科学院提出并归口。本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所。本标准主要起草人：刘征辉、赵琳琳、魏静娜、张强、赵云平、薛天凯、徐石勇、郑贵忠。1植物提取物中原花青素的测定紫外/可见分光光度法1范围本标准规定了采用紫外/可见分光光度法测定植物提取物中原花青素含量的原理、试剂材料、仪器设备、分析步骤、分析结果表述和精密度。本标准适用于植物提取物中原花青素的测定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理原花青素本身无色，但经过用热酸处理后，可以生成深红色的花青素离子，用分光光度法测定原花青素在水解过程中生成的花青素离子，计算试样中原花青素含量。4试剂和材料4.1.3盐酸(HCL):纯度为35%～37%(g/g)。4.1.5水(H₂O):GB/T6682规定的一级水。4.2试剂配制4.2.1盐酸-正丁醇溶液：取正丁醇50mL,于100mL容量瓶中，准确量取盐酸5mL,用正丁醇定容，摇4.2.22mol/L盐酸溶液：准确量取盐酸20mL于烧杯中，加100mL水4.2.3硫酸铁铵溶液：称取硫酸铁铵2.0g于三角瓶中，加2mol/L盐酸溶液，放置于沸水浴中，至其全4.3标准品原花青素标准品纯度≥95%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。24.4.1原花青素标准储备液(1.0mg/mL):取原花青素标准品10mg,精密称定，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，即得浓度为1.0mg/mL标准储备液，溶液现用现配。5.1紫外分光光度计，配1cm比色杯，波长范围(110～900)nm。5.4天平：感量0.01mg。5.7容量瓶：10mL、50mL、100mL。取样品(10~100)mg,精密称定，置50mL容量瓶中，加入30mL甲醇，超声处理(功率250W,频率50kHz)20min,放至室温后，加甲醇至刻度，摇匀，离心或放至澄清后取上清液作为供试品溶液。准确吸取原花青素标准系列工作液各1mL,置于安瓿瓶中，精密加入盐酸-正丁醇溶液(4.2.1)6mL,硫酸铁铵溶液(4.2.3)0.2mL,混匀，用封口钳将其密封，置沸水中加热40min后，取出，立即置冰精密吸取6.1项下的供试品溶液1mL,置于安瓿瓶中，然后按照标准曲线制作步骤执行。以相应试试样中原花青素的含量按式(1)计算：3 X——试样中原花青素的含量，单位为克每100克(g/100g);c——反应混合物中原花青素的量，单位为微克每毫升(μg/mL);

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